小鼠结肠平滑肌细胞提取物

小鼠结肠平滑肌细胞提取物

结肠分升结肠、横结肠、降结肠和乙状结肠4部分，大部分固定于腹后壁，结肠的排列酷似英文字母“M”，将小肠包围在内。结肠横切面由内到外依次为：黏膜（上皮层、固有层、黏膜肌层），黏膜下层（疏松结缔组织），肌层（内环形、外纵行两层平滑肌），外膜（纤维膜或浆膜）。结肠平滑肌细胞主要分布于黏膜肌层和肌层的内环形、外纵行平滑肌；结肠运动少而缓慢，对刺激的反应也较迟缓。结肠平滑肌在食物消化与吸收、肠道运动和物质分泌、诱发全身炎症反应以及细胞内信号转导途径等研究中起着重要的作用。

基因组DNA制备：采用酶解法裂解细胞，利用硅胶膜离心柱特异地吸附DNA，去除蛋白质、盐类、脂类等杂质，有效地保持基因组DNA的完整性。提取的DNA适用于酶切、PCR、Southern Blot等实验。
    总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。康朗生物提供的总RNA样品附有RNA样品OD值、浓度、总含量等。
    cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及2μg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 μl cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的质控分析，保证了产品的质量。
    microRNA制备:采用具有的裂解能力和抽提灵敏度microRNA试剂盒制备，结合试剂盒采用的特殊吸附膜，大大增加了小分子RNA的吸附力，获得的microRNA纯度好，得率高，可以直接用于各种下游实验，如Northern Blot分析，Real-Time PCR，Microarray Analysis等。
    蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl,1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备细胞蛋白裂解液，离心去除细胞碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。
    细胞沉淀制备：首先分离培养出高质量的原代细胞，然后经平衡盐溶液清洗去除细胞表面杂质，用合适的裂解液裂解细胞并离心获得细胞沉淀。