人卵巢癌组织源细胞提取物
卵巢恶性肿瘤是女性生殖器官常见的恶性肿瘤之一,发病率仅次于子宫颈癌和子宫体癌而列居第三位。但卵巢上皮癌死亡率却占各类妇科肿瘤的首位,对妇女生命造成严重威胁。由于卵巢的胚胎发育、组织解剖及内分泌功能较复杂,早期症状不典型,术前鉴别卵巢肿瘤的组织类型及良恶性相当困难。卵巢恶性肿瘤中以上皮癌Z多见,其次是恶性生殖细胞肿瘤。卵巢上皮癌患者手术中发现肿瘤局限于卵巢的仅占30%,大多数已扩散到子宫,双侧附件,大网膜及盆腔各器官,所以在早期诊断上是一大难题。
基因组DNA制备:采用酶解法裂解细胞,利用硅胶膜离心柱特异地吸附DNA,去除蛋白质、盐类、脂类等杂质,有效地保持基因组DNA的完整性。提取的DNA适用于酶切、PCR、Southern Blot等实验。
总RNA制备:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。康朗生物提供的总RNA样品附有RNA样品OD值、浓度、总含量等。
cDNA制备:纯化后的总RNA来合成cDNA链,以50ul总反应体系进行逆转录,体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及2μg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA,1 μl cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的质控分析,保证了产品的质量。
microRNA制备:采用具有的裂解能力和抽提灵敏度microRNA试剂盒制备,结合试剂盒采用的特殊吸附膜,大大增加了小分子RNA的吸附力,获得的microRNA纯度好,得率高,可以直接用于各种下游实验,如Northern Blot分析,Real-Time PCR,Microarray Analysis等。
蛋白制备:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl,1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备细胞蛋白裂解液,离心去除细胞碎片,通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度,组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF,-80度保存。
细胞沉淀制备:首先分离培养出高质量的原代细胞,然后经平衡盐溶液清洗去除细胞表面杂质,用合适的裂解液裂解细胞并离心获得细胞沉淀。