细胞传代培养方法:1、收到细胞,请查看瓶子是否有破裂,培养基是否漏出,是否浑浊,如有请尽快联系。2、收到细胞,如包装完好,请在显微镜下观察细胞。,由于运输过程中的问题,细胞培养瓶中的贴壁细胞有可能从瓶壁中脱落下来,显微镜下观察会出现细胞悬浮的情况,出现此状态时,请不要打开细胞培养瓶,先不要把培养基吸出来。应立即将培养瓶置于细胞培养箱里静止3-5小时左右,让细胞先稳定下,再于显微镜下观察,此时多数细胞会重新贴附于瓶壁。如细胞仍不能贴壁,请用台盼蓝染色法鉴定细胞活力,如台盼蓝染色证实细胞活力正常请按悬浮细胞的方法处理3. 收到细胞时如无异常情况 ,请在显微镜下观察细胞密度,如为贴壁细胞,未超过80%汇合度时,用75%酒精(建议配置75%酒精的水也是灭菌超纯水。喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内,严格无菌操作:然后打开盖子,先用枪头把培养基吸出10ML左右,放在离心管里,然后瓶口过火,(严禁直接倾倒),这样可以保证不污染,再用10ML的移液管,将剩余的培养基全部吸出,放于离心管中,培养瓶中只剩余5-10ML左右培养液继续培养就可以了):超过80%汇合度时,请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞,吸出培养液,1000转/分钟离心3-5分钟,吸出上清,管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。4,将培养瓶置于37℃培养箱中培养,盖子微微拧松。吸出的培养基可以保存在灭菌过的瓶子里,存放于4℃冰箱,以备不时之需。第二天换液时,要配制新鲜的培养基和进口胎牛血清。这样对细胞生长更好。不要再用我们原瓶的培养基了。5 、24小时后,细胞形态已恢复并贴满瓶壁,就可以传代了。(贴壁细胞)将培养瓶里的培养基倒去,加3-5ml(以能覆盖细胞生长面为准)PBS或Hanks’液洗涤后弃去。加0.5-1ml 0.25%含EDTA的胰酶消化,消化时间以具体细胞为准,一般1-3分钟,不超过5分钟。可以放入37℃培养箱消化。轻轻晃动瓶壁,见细胞脱落下来,加入3-5ml培养基终止消化。用移液管轻轻吹打瓶壁上的细胞,使之完全脱落,然后将溶液吸入离心管内离心,1000rpm/5min。弃上清,视细胞数量决定分瓶数,一般一传二,如细胞量多可一传三,有些细胞不易传得过稀,有些生长较快的细胞则可以多传几瓶,以具体细胞和经验为准。(悬浮细胞)用移液管轻轻吹打瓶壁,直接将溶液吸入离心管离心即可。6,贴壁细胞 ,悬浮细胞。严格无菌操作。换液时,换新的细胞培养瓶和换新鲜的培养液和进口胎牛血清,37度 5%CO2 培养7. 收到细胞后,请镜下观察细胞,用恰当方式处理细胞。若悬浮的细胞较多,请离心收集细胞,接种到一个新的培养瓶中。弃掉原液,使用新鲜配制的培养基,使用进口胎牛血清. 刚接到细胞,若细胞不多时 血清浓度可以加到15%去培养。若细胞迏到80%左右 ,血清浓度还是在10%。特别注意:(如使用公共实验室或初次接触细胞培养,建议添加双抗培养)1.收到细胞后请尽快更换为含15%血清的新鲜培养基,如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基,请在原瓶培养基中额外添加10%的血清(原瓶培养基的继续使用时间Z长不宜超过72小时)2.贴壁细胞收到当天切忌立刻消化,请将细胞换液后放置培养箱孵育过夜到第二天再做消化传代,请优先选择直径6cm的培养皿进行传代培养3.如签收时出现培养瓶壁破裂,漏液等情况请及时做好照片记录并联系实验室