细胞名称:
JAR(胎盘绒毛癌细胞)细胞JAR(胎盘绒毛癌细胞)生长特性:贴壁/悬浮
细胞来源:ATCC/DSMZ/RCB/SCIENCELL/中科院等
培养条件:1640+10%FBS
传代方法:1:2传代;3-4天一次
冻存条件:90%FBS+10%DMSO
支原体检测:阴性
使用范围:本细胞仅用于科研工作,未经许可不得用于其他目的
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JAR(胎盘绒毛癌细胞)细胞JAR(胎盘绒毛癌细胞)MTT步骤1.吸走用于培养基,加入3-5mL PBS后轻轻晃动培养瓶润洗细胞;
2.吸干净PBS后加入1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA,轻轻摇晃培养皿使胰酶浸没细胞表面,培养瓶放37度培养箱消化;
(细胞对于消化比较敏感,消化过度会严重影响细胞状态,导致细胞传代死亡漂浮或者传代后不长。细胞消化到细胞间隙变大但未脱落,可以轻轻吹下时即可终止
,禁止消化到细胞完全漂浮。混匀细胞时尽量轻柔,不要吹出大量气泡。)
3.加入6-8ml完全培养基终止消化,轻轻吹下细胞混匀;
4.将混匀的细胞1000rpm(约150g)离心3min,弃上清,再用新鲜培养基重悬37度培养箱继续培养;
传代比例: 不同细胞生长速度不一,具体传代比例视细胞生长速度而定,大部分细胞适用1:3-1:4传代,生长较慢的细胞可以1:2传代。
JAR(胎盘绒毛癌细胞)细胞JAR(胎盘绒毛癌细胞)注意事项
1.细胞经过运输后,部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正常现象。贴壁细胞可以消化,悬浮细胞直接混匀收集细胞,900-1000rpm(约150g)离
心3min,弃上清。加5ml PBS重悬细胞,再900-1000rpm(约150g)离心3min,用新鲜的完全培养基重悬接种到新的培养瓶。第二次PBS重悬是为了去除碎片,如果平时
碎片比较少,传代时可以省略PBS重悬的步骤;如果碎片很多,建议PBS多洗几次。
2.细胞生长不均时,可以将细胞消化吹散后加入新的培养基重新接种或传代。
3.细胞生长缓慢时,可以选择提高血清浓度培养(不超过20%),也可以根据细胞生长状态,选择传代细胞到新的培养瓶中继续培养。
4.不同细胞贴壁性差异比较大,所以消化时间差别较大,20s-10min均有可能,具体以细胞消化到相互分离但未脱落,并可以轻轻吹下为准,严禁消化到细胞完全漂
浮。客户消化过度导致细胞死亡、漂浮、生长缓慢,不提供免费售后服务。
JAR(胎盘绒毛癌细胞)细胞JAR(胎盘绒毛癌细胞)增殖存活检测
1:接种细胞:用含10%胎小牛血清的培养液配成单个细胞悬液,以每孔 1000-10000个细胞的密度接种到96孔板中,每孔体积200ul.
2:培养细胞:同一般培养条件,培养3-5天(可根据试验目的和要求决定培养时间)。
3:呈色:培养3-5天后,每孔加MTT溶液(5mg/ml用PBS 配)20ul. 继续孵育4小时,终止培养,小心吸弃孔内培养上清液,对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养
上清液。每孔加150ul DMSO,振荡10分钟,使结晶物充分融解。
4:比色:选择490nm波长,在酶联免疫检测仪上测定各孔的光吸收值,记录结果,以时间为横坐标,吸光值为纵坐标来绘制细胞生长曲线。