货号:
BH-X5851
组织来源:
详见说明书
相关疾病:
详见说明书
物种来源:
人/小鼠/大鼠/其他
免疫类型:
详见说明书
细胞形态:
上皮样/成纤维样/其它
是否是肿瘤细胞:
详见说明书
器官来源:
详见说明书
运输方式:
常温运输/干冰运输
年限:
详见说明书
生长状态:
贴壁/悬浮
英文名:
详见说明书
注册证号:
详见说明书
数量:
34
供应商:
上海博湖
CAS号:
详见说明书
肿瘤类型:
详见说明书
细胞类型:
详见说明书
ATCC Number:
Brain: Normal Mouse Meningeal Derivatives
品系:
详见说明书
规格:
详见说明书
公司生产的小鼠脑膜组织提取物质量佳,发货速度快,售后有保证。可支持各大院校先发货细胞描述
小鼠脑膜组织提取物脑膜组织由外向内由硬网膜、蛛网膜和软脑膜组成。公司科技提供来自新鲜或冷冻小鼠脑膜组织中高质量的总RNA,PCR准备的条cDNA链,蛋白质及其亚组分。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆,表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。
总RNA制备:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。生物科技提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。cDNA制备:纯化后的总RNA来合成cDNA链,以50ul总反应体系进行逆转录,体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA,1 μl cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析,保证产品的质量。蛋白制备:利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人血管组织裂解液,离心去除组织碎片,通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度,组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5% PMSF,-80度保存。潜在的应用: <1>已知基因的PCR克隆;<2>mRNA选择性剪接;<3>基因克隆与目标测序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白检测与蛋白质组学;<6>芯片研究与表达图谱。细胞传代:
小鼠脑膜组织提取物1. 显微镜下观察细胞,神经干细胞悬浮成“神经球”生长,通常情况下,每两天换液一次,每四天传代一次。
2. 在生物安全柜或者超净台中,将培养瓶中的含有神经球的培养基转移到15ml离心管中。
3. 500rpm离心5分钟,收集神经干细胞。
4. 加入1ml 0.125%含有EDTA的胰酶,在超净工作台中轻轻吹打10次,注意不要消化太久,消化的目的是缩小神经球的体积,不要消化能单个神经干细胞,那样会影响其生长速度。
5. 然后加入5ml培养基,吹打均匀后1000rpm 离心5分钟。
6. 离心后,去掉上清,用新鲜培养基重悬细胞,按照1:2-1:3的比例进行细胞传代培养。
细胞复苏:
1. 小鼠脑膜组织提取物 取出冻存管后,投入37℃水浴中,震荡解冻2 min。
2. 酒精消毒管壁外侧后,将其转入超净台中,将管内细胞转移至离心管中,加入5 ml 37℃预热的DMEM/F12+10%FBS培养基。
3. 将离心管离心(1000rpm,5 min)。
4. 弃去上清,再加入2ml DMEM/F12+1%N2+2%B27完全培养基,转入培养瓶中培养。
细胞冻存:液氮冻存(冻存液:DMEM/F12+10%FBS+10%DMSO)。
细胞运输:干冰运输(冻存管)/ 常温运输(T-25培养瓶)
细胞鉴定:神经干细胞采用nestin免疫荧光染色鉴定。左图是白光视野中的“神经球”形态,放大倍数为200x,右图为nestin染色后的荧光图片(绿色),放大倍数为200x。
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小鼠脑膜组织提取物悬浮细胞的传代
悬浮细胞传代比贴壁细胞传代稍微简单一些。由于细胞已经在生长培养基中悬浮,因此无需通过酶的作用使其从培养容器表面脱离,整个过程较为迅速,对细胞的损伤也较小。悬浮培养时不进行生长培养基的更换;而是每 2 到 3 天加料一次,直到细胞汇合。可以直接在培养瓶中稀释细胞,然后继续培养扩增,或者也可以从培养瓶中取出一部分细胞,将余下的细胞稀释到该细胞系适宜的接种密度。悬浮细胞传代后的延滞期一般比贴壁细胞短。