HuTu80人十二指肠腺癌细胞系 专业传代培养技术指导

HuTu80人十二指肠腺癌细胞系 专业传代培养技术指导
硅酸盐细菌液体培养基，英文名：Silicate Bacteria Fluid Medium，用途：用于硅酸盐细菌的培养
J774细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HL-7702[L-02]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
3T6-Swissalbino细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HME4细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
阿须贝氏甘露醇培养基，英文名：Ashby’S Mannitol Medium，用途：用于固氮菌的培养
西蒙氏柠檬酸盐琼脂/枸橼酸盐琼脂，英文名：Simmons Citrate Agar，用途：用于柠檬酸盐利用实验
Capan-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞；细胞传代方法：1：2-1：4传代，2-3天换液1次。
细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分
乙基紫叠氮钠肉汤，英文名：Ethyl Violet Azide Broth，用途：用于链球菌的增菌培养
HPBALL细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
CT26.WT[CT26WT]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
大鼠丝酸蛋白酶12(PRSS12)ELISA试剂盒，英文名：PRSS12 ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠线粒体甘油-3-酰基转移酶(GPAM)ELISA试剂盒，英文名：GPAM ELISA Kit，规格：48T/96T
293C18(293E)细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
KATO Ⅲ细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
改良DG-18琼脂基础，英文名：Dichloran Glycerol Agar Base,Modified，用途：用于霉菌酵母菌的计数,每升培养基中添加220g甘油
改良爱德华培养基基础，英文名：Edwards Medium Base,Modified，用途：用于无乳链球菌的选择性分离,每升添加5～7%无菌脱纤维绵羊全血
轻唾琼脂培养基(MSA)基础，英文名：Mitis Salivarius Agar Base，用途：用于轻唾链球菌的分离培养,每200ml添加1支亚碲酸钾溶液
大鼠胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)ELISA试剂盒，英文名：CYP7A1 ELISA Kit，规格：48T/96T
人过氧化还原酶1(PRDX1)ELISA试剂盒，英文名：Human PRDX1 ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
大鼠同种异体移植炎症因子1(AIF1)ELISA试剂盒，英文名：AIF1 ELISA Kit，规格：48T/96T
肝浸液肉汤，英文名：Liver Infusion Broth，用途：用于布鲁氏菌及其它苛养菌的培养
卵磷脂-吐温80营养琼脂培养基基础，英文名：Lecithin Tween 80 Nutrient Agar Medium，用途：用于菌落总数测定,每升培养基需添加1支吐温80
细胞复苏相关注意事项：1.取细胞的过程中注意带好防冻手套，护目镜。此项尤为重要，细胞冻存管可能漏入液氮，解冻时冻存管中的气温急剧上升，可导致爆炸。2.冻存液的问题：冻存液的配置已是常识，在这里不作详述，但二甲基亚砜(DMSO )对细胞不是完全，在常温下，二甲基亚砜对细胞的毒副作较大，因此，必须在1-2min内使冻存液完全融化。如果复苏温度太慢，会造成细胞的损伤，二甲基亚砜(DMSO)Z好选择进口产品。3.离心前须加入少量培养液。细胞解冻后二甲基亚砜浓度较高，注意加入少量培养液可稀释其浓度，以减少对细胞的损伤。4.离心问题：目前主要有两种见解。一种是解冻后的细胞悬液直接吹打均匀后分装到培养瓶中进行培养，第二天换液。因为离心的目的是两个，去除DMSO，去除死细胞，这个是标准流程，但对一般人来说，把握不好离心转速和时间，转的不够活细胞沉底的少，细胞就全被扔掉了，转过了活细胞会受压过大，死亡。此外在操作过程中容易污染，所以不推荐。另一种说法为细胞悬液中含有二甲基亚砜(DMSO)，DMSO对细胞有一定的毒副作用，所以须将离心后的液体前倒净，且一定倒干净。我在试验中按照常规的离心分装的方法进行复苏，结果无异常。5.细胞贴壁少的问题：教科书中说明冻存细胞解冻时1ml细胞液要加10ml-15ml培养液，而在我的试验中的经验总结为培养基越少细胞越容易贴附。6.复苏细胞分装的问题：试验中我的经验总结为复苏1管细胞一般可分装到1-2只培养瓶中，分装过多，细胞浓度过低，不利于细胞的贴壁。7.加培养基的量放入问题：这个量的多少的把握主要涉及到的问题DMSO的浓度，从如果你加培养基的太少，那么DMSO的浓度就会比较大，就会影响细胞生长，从以前的资料来看，DMSO的浓度在小于0.5%的时候对一般细胞没有什么影响，还有一个说法是1%。所以如果你的冻存液的浓度是10%DMSO的话那么加10ml以上的培养基就恰好稀释到了无害浓度。
WS琼脂，英文名：WS Agar，用途：用于沙门氏菌选择性分离
细胞背景资料：详见相关文献介绍
布鲁氏菌培养基基础，英文名：Brucella Medium Base，用途：每100ml添加5%血清以及1支布鲁氏菌选择性添加剂或改良布鲁氏菌选择性添加剂制备血清-葡萄糖-抗生素培养基
Mino细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
OE-33细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：2传代
HAC-84细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCI-H838细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：3-1：6传代；2-3天换液1次。
淋病奈瑟菌增菌培养基基础，英文名：N.gonorrhoeae Enrichment Medium Base，用途：用于淋病奈瑟菌的增菌和转送,每100ml添加1支淋病奈瑟菌培养基添加剂和10ml无菌脱纤维绵羊全血
橄榄油培养基基础，英文名：olive oil medium for Malassezia，用途：用于马拉色菌的培养，每80ml添加3.2ml橄榄油
菌种培养基，英文名：Strain Medium，用途：用于菌种培养与保存(pH6.5)
HS-578T细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
Kert-3细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
SNU354细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
低限肉汤(不含葡萄糖)，英文名：Minimal Broth Davis without Dextrose，用途：用于分离和表现营养突变型大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的特性
抗生素培养基34号，英文名：Medium 34，用途：用于微生物方法测定抗生素效价，每100ml添加1支甘油
Wilkins-Chalgren厌氧菌琼脂，英文名：Wilkins-Chalgren Anaerobe Agar，用途：用于厌氧菌的培养和药敏试验
细胞形态特性：详见细胞说明书
冷冻细胞解冻程序：依据细胞株数据单指定之基础培养基种类、血清种类和其它指定之成份和比例，制备培养基。绝大多数之细胞均无法立即适应不同之基础培养基或不同之血清种类，若因实验需要，必须有所不同时，务必以缓慢比例渐次改变培养基组成，确定细胞适应后，方进行所需之实验。FBS(fetal bovine serum,胚牛血清), CS(calf serum,小牛血清)和HS(horse serum,马血清)，对细胞而言差异极大，请务必依据细胞株资料单指定之血清种类培养之。将培养基置于37°C水槽中回温，回温后喷以70%酒精并擦拭之，移入无菌操作台内。取出冷冻管，立即放入37°C水槽中快速解冻，水面高度不可接近或高过冷冻管之盖沿，否则易发生污染。轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化后，以70%ethanol擦拭冷冻管外部，移入无菌操作台内。依据细胞种类和浓度，于无菌操作台内取10ml培养基加至T25或T75flask中。取出已解冻之细胞悬浮液，缓缓加入T25或T75flask内之培养基，混合均匀，放入37°C，5%CO2培养箱培养。对绝大多数细胞而言，1%以下之冷冻保护剂DMSO，不会对细胞之贴附或活化有不良影响，不需立刻由解冻细胞中去除，待第二天确定细胞生长或贴附良好后再去除即可。惟对极少数因对DMSO敏感或会造成细胞分化之细胞，需立即去除DMSO者，则可将解冻后之细胞悬浮液放入5-10ml培养基中，离心300xg(约1000rpm)，5分钟，小心移去上清液，加入适量新鲜培养基，将细胞均匀混合后，转移至培养瓶中，再放入37°C，5%CO2培养箱培养。
小鼠促肾上腺皮质素释放激素受体(CRH-R)ELISA试剂盒，英文名：Mouse CRH-R ELISA Kit，规格：48T/96T
AN厌氧琼脂基础，英文名：Anaerobic Agar Base，用途：厌氧基础培养基,每100ml添加化血红素溶液和维生素K1溶液各1支
Amies运送培养基，英文名：Amies Transport Medium，用途：用于致病菌标本的采集、运输和保存
小鼠血小板反应蛋白3(THBS3)ELISA试剂盒，英文名：Mouse THBS3 ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠B因子(BF)ELISA试剂盒，英文名：BF ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠胱抑素A(CSTA)ELISA试剂盒，英文名：Mouse CSTA ELISA Kit，规格：48T/96T
培养细胞真的不难，Z关键几点：1)所有的东西使用Z好的，如果你用的血清、培养皿、培养基、胰酶什么的都是进口的，真的很难相信你会把细胞养坏；2)动作要快，胰酶消化，换液什么，细胞暴露在空气中的时间越少越好。另外，要掌握好胰酶消化时间，所谓的细胞状态差，很多时候是传代的原因；3)有时间的话，需要细胞计数，传相应数目的细胞到培养皿中，可以大致清楚细胞的生长曲线，不会临时要处理，手足无措；4)要做什么心里要非常清楚，合理安排时间，传代细胞的实验穿插进行，可以节省很多时间，也不会耽误别人的实验；5)个人的实验器具自己收一套，不要和别人混用，Z近换了什么新的东西稍微记一下，试剂一旦怀疑污染，马上丢；6)传代细胞不能进去太多人，避免相互干扰。每天对待细胞比孝敬爹妈还用心，那真是捧在手里怕碎了，含在嘴里怕化了，看在眼里怕丢了，培养细胞时有哪些经验教训可以分享呢?1)严格无菌操作，多喷喷酒精，要是对灭菌的东西不放心，自己包自己送自己烘干；2)不要和别人共用试剂耗材，自己准备一套；3)有可能的话在拿到新细胞的时候做好支原体衣原体检测；4)水浴锅很脏，生化培养箱要是得手动加湿的话盘里的水也会很脏，勤换(灭菌水加进去)；5)晚上离开的时候Z好给传代细胞照紫外，超净台是用完就开；6)Z好的是同一时间就你一个人在用传代细胞在养细胞。
指示选择性培养基基础，英文名：Direct selective medium base，用途：用于炭疽杆菌的分离鉴别,需加入多粘菌素B、溶菌酶、碳源
NCI-H2023细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：每周换液2次
细胞产品包装：复苏形式：T25培养瓶(一瓶)或冻存形式：1ml冻存管(两支)
L132细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCI-H929细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
IGROV-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。