GNM人上颌牙龈癌颈淋巴结转移癌细胞系 专业传代培养技术指导

GNM人上颌牙龈癌颈淋巴结转移癌细胞系 专业传代培养技术指导
龙胆紫血液琼脂基础，英文名：Crystal Violet Blood Agar Base，用途：用于鼠疫杆菌的选择性培养,需添加无菌脱纤维绵羊全血
XWLC-05细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
L-929细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：成纤维细胞；细胞传代方法：1：2-1：8传代
SV40 MES 13细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
MEC57细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
豆芽汁蔗糖培养基，英文名：Soybean sprout Extract Sucrose Medium，用途：用于真菌尤其是霉菌的培养
抗生素检测用培养基Ⅱ，英文名：Antibiotic Examination Medium Ⅱ，用途：用于乳及乳制品中舒巴坦敏感β-内酰胺酶类药物检验
PL-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分
AAM培养基，英文名：AAM Medium，用途：用于乳酸菌的培养
TE15细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
CFSC-8B细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
大鼠凝血酶/抗凝血酶复合体(TAT)ELISA试剂盒，英文名：TAT ELISA Kit，规格：48T/96T
人胱天蛋白酶12(CASP12)ELISA试剂盒，英文名：Human CASP12 ELISA Kit，规格：48T/96T
NCI-H2196[H2196]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
M14细胞专业复苏；细胞生长特性：混合生长；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：3传代
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
蛋白胨山梨醇胆盐(PSB)肉汤，英文名：Peptone Sorbitol Bile salts Broth，用途：用于耶尔森氏菌选择性增菌
铜培养基，英文名：Bluestone Medium，用途：用于啤酒野生酵母的检验
TGC液体培养基，英文名：TGC Medium without Indicator, Liquid，用途：用于无菌检验
人血管生成素4(ANG-4)ELISA试剂盒，英文名：Human ANG-4 ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)ELISA试剂盒，英文名：Mouse Aβ1-42 ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
小鼠乙酰辅酶A羧化酶合成酶(ACC)ELISA试剂盒，英文名：Mouse ACC ELISA Kit，规格：48T/96T
心浸液琼脂，英文名：Heart Infusion Agar，用途：用于苛养菌的培养
胰蛋白胨胆汁琼脂(TBA)，英文名：Tryptone Bile Agar，用途：用于大肠菌群滤膜法检测
细胞复苏相关注意事项：1.取细胞的过程中注意带好防冻手套，护目镜。此项尤为重要，细胞冻存管可能漏入液氮，解冻时冻存管中的气温急剧上升，可导致爆炸。2.冻存液的问题：冻存液的配置已是常识，在这里不作详述，但二甲基亚砜(DMSO )对细胞不是完全，在常温下，二甲基亚砜对细胞的毒副作较大，因此，必须在1-2min内使冻存液完全融化。如果复苏温度太慢，会造成细胞的损伤，二甲基亚砜(DMSO)Z好选择进口产品。3.离心前须加入少量培养液。细胞解冻后二甲基亚砜浓度较高，注意加入少量培养液可稀释其浓度，以减少对细胞的损伤。4.离心问题：目前主要有两种见解。一种是解冻后的细胞悬液直接吹打均匀后分装到培养瓶中进行培养，第二天换液。因为离心的目的是两个，去除DMSO，去除死细胞，这个是标准流程，但对一般人来说，把握不好离心转速和时间，转的不够活细胞沉底的少，细胞就全被扔掉了，转过了活细胞会受压过大，死亡。此外在操作过程中容易污染，所以不推荐。另一种说法为细胞悬液中含有二甲基亚砜(DMSO)，DMSO对细胞有一定的毒副作用，所以须将离心后的液体前倒净，且一定倒干净。我在试验中按照常规的离心分装的方法进行复苏，结果无异常。5.细胞贴壁少的问题：教科书中说明冻存细胞解冻时1ml细胞液要加10ml-15ml培养液，而在我的试验中的经验总结为培养基越少细胞越容易贴附。6.复苏细胞分装的问题：试验中我的经验总结为复苏1管细胞一般可分装到1-2只培养瓶中，分装过多，细胞浓度过低，不利于细胞的贴壁。7.加培养基的量放入问题：这个量的多少的把握主要涉及到的问题DMSO的浓度，从如果你加培养基的太少，那么DMSO的浓度就会比较大，就会影响细胞生长，从以前的资料来看，DMSO的浓度在小于0.5%的时候对一般细胞没有什么影响，还有一个说法是1%。所以如果你的冻存液的浓度是10%DMSO的话那么加10ml以上的培养基就恰好稀释到了无害浓度。
精酸支原体半流体培养基，英文名：Mycoplasma Semifluid Medium with Arginine，用途：——用于支原体的培养
细胞背景资料：详见相关文献介绍
APA培养基基础，英文名：APA Medium Base，用途：用于嗜盐菌的培养，灭菌后需添加1%无菌碳酸钠
NCM460细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2传代
N1E-115细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HO-8910PM细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：消化3-5分钟。1：2。3天内可长满。
NCI-H295R[H295R]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
缓冲李斯特氏菌增菌肉汤基础(BLEB基础)，英文名：Buffered Listeria Enrichment Broth Base，用途：用于李氏菌的选择性增菌,每225ml添加2支啶酮酸溶液
胆汁液态培养基，英文名：Bile Broth Medium，用途：用于粪链球菌验证和培养
溶菌酶营养肉汤基础，英文名：Lysozyme Nutrient Broth Base，用途：用于蜡样芽胞杆菌的溶菌酶试验,每200ml添加1支0.1%溶菌酶溶液
JJN-3细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
Pfeiffer细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长；细胞形态特性：淋巴母细胞样；细胞传代方法：1：2传代
WM-115细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞；细胞传代方法：1：3-1：6传代，2-3天换液1次。
N6培养基(不含琼脂)，英文名：N6 Medium without Agar，用途：适合于愈伤组织和悬浮细胞培养
酵母基酸缺陷型合成琼脂培养基(色酸缺陷)，英文名：Yeast Synthetic Drop-out Agar Medium without Trypt，用途：用于酵母杂交及遗传突变株的筛选和研究
改良GAM琼脂基础，英文名：Glfu Anaerobic Medium Agar Base,Modified，用途：用于厌氧菌的培养,每100ml添加化血红素溶液、维生素K1溶液各1支
细胞形态特性：详见细胞说明书
细胞培养中支原体污染的经验分享：支原体是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物，大小一般在0.3-0.5um之间，呈高度多形性，有球形、杆形、丝状、分枝状等多种形态。它不同于细胞，也不同于病毒。支原体用普通染色法不易着色，用姬姆萨染色很浅，革兰染色为阴性。支原体可在鸡胚绒毛尿囊膜上或细胞培养中生长，营养要求比细菌高。细胞培养(特别是传代细胞)被支原体污染是个世界性问题。在细胞培养中支原体感染发生率达到63%，支原体感染发生后能改变细胞的DNA,RNA及蛋白表达，又不能通过可视法对其进行检测，而且它对细胞的生长率影响较小，不易引起注意。国内外研究表明，95%以上是以下四种支原体：口腔支原体(M.orale)、精酸支原体(M.arginini)、猪鼻支原体(M.hyorhinis)和莱氏无胆甾原体(A.laidlawii)，为牛源性。以上是Z常见的污染细胞培养的支原体菌群，但能够污染细胞的支原体种类是很多的，国外调查证明，大约有二十多种支原体能污染细胞，有的细胞株可以同时污染两种以上的支原体。支原体污染的来源包括工作环境的污染、操作者本身的污染(一些支原体在人体是正常菌群)、培养基的污染、污染支原体的细胞造成的交叉污染、实验器材带来的污染和用来制备细胞的原始组织或器官的污染。组织细胞培养工作中，主要从以下几个方面来预防支原体的污染：控制环境污染;严格实验操作；细胞培养基和器材要保证无菌；在细胞培养基中加入适量的抗生素。支原体污染细胞后，特别是重要的细胞株，有必要清除支原体，常用方法有抗生素处理、抗血清处理、抗生素加抗血清和补体联合处理。支原体Z突出的结构特征是没有细胞壁，一般来讲，对作用于细胞壁生物合成的抗生素，如万古霉素等完全不敏感；对多粘菌素(polymycin)、利福平、磺胺药物普遍耐药。对支原体Z有YZ活性及常用于支原体感染ZL的抗生素是四环素类、大环内酯类及一些喹诺酮;其他类抗生素如基糖苷类、霉素对支原体有较小YZ作用，所以常不用来作为支原体感染的化学ZL剂。
大鼠GDP解离YZ因子1(GDI1)ELISA试剂盒，英文名：GDI1 ELISA Kit，规格：48T/96T
艰难梭菌选择性琼脂基础(CDA)，英文名：Clostridium difficile Selective Agar，用途：用于艰难梭菌的选择性分离.每400ml添加1支D-环丝酸溶液、1支头孢西丁溶液、3支50%卵黄盐水悬液、4ml马血
芽孢杆菌培养基基础，英文名：Bacillus Medium Base，用途：用于芽孢杆菌的保藏
人脂肪酸结合蛋白3(FABP3)ELISA试剂盒，英文名：Human FABP3 ELISA Kit，规格：48T/96T
人β-1,3-半乳糖转移酶2(β3GALT2)ELISA试剂盒，英文名：Human β3GALT2 ELISA Kit，规格：48T/96T
人甘露糖异构酶(MPI)ELISA试剂盒，英文名：Human MPI ELISA Kit，规格：48T/96T
培养细胞真的不难，Z关键几点：1)所有的东西使用Z好的，如果你用的血清、培养皿、培养基、胰酶什么的都是进口的，真的很难相信你会把细胞养坏；2)动作要快，胰酶消化，换液什么，细胞暴露在空气中的时间越少越好。另外，要掌握好胰酶消化时间，所谓的细胞状态差，很多时候是传代的原因；3)有时间的话，需要细胞计数，传相应数目的细胞到培养皿中，可以大致清楚细胞的生长曲线，不会临时要处理，手足无措；4)要做什么心里要非常清楚，合理安排时间，传代细胞的实验穿插进行，可以节省很多时间，也不会耽误别人的实验；5)个人的实验器具自己收一套，不要和别人混用，Z近换了什么新的东西稍微记一下，试剂一旦怀疑污染，马上丢；6)传代细胞不能进去太多人，避免相互干扰。每天对待细胞比孝敬爹妈还用心，那真是捧在手里怕碎了，含在嘴里怕化了，看在眼里怕丢了，培养细胞时有哪些经验教训可以分享呢?1)严格无菌操作，多喷喷酒精，要是对灭菌的东西不放心，自己包自己送自己烘干；2)不要和别人共用试剂耗材，自己准备一套；3)有可能的话在拿到新细胞的时候做好支原体衣原体检测；4)水浴锅很脏，生化培养箱要是得手动加湿的话盘里的水也会很脏，勤换(灭菌水加进去)；5)晚上离开的时候Z好给传代细胞照紫外，超净台是用完就开；6)Z好的是同一时间就你一个人在用传代细胞在养细胞。
改良布氏肉汤培养基，英文名：Brucella Broth,Modified，用途：用于空肠弯曲杆菌的增菌培养
SCH细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞产品包装：复苏形式：T25培养瓶(一瓶)或冻存形式：1ml冻存管(两支)
751-NA细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
BIU-87细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2传代
PT-K75细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：成纤维细胞样；细胞传代方法：1：2传代