BT-474[BT474]人乳腺导管癌细胞系 专业技术指导 专注复苏

BT-474[BT474]人乳腺导管癌细胞系 专业技术指导 专注复苏
TE12细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NGEC细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HRT-S1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞培养过程中相关问题总结：悬浮性细胞应如何继代处理？一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，可将培养角瓶口端稍微抬高，直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养角瓶，加入新鲜培养基稀释至适当浓度，重复前述步骤即可。欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速？欲回收动物细胞，其离心速率一般为300xg(约1,000rpm)，5-10分钟，过高之转速，将造成细胞死亡；细胞之接种密度为何？依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因；细胞冷冻培养基之成份为何？动物细胞冷冻保存时Z常使用的冷冻培养基是含5-10%DMSO(dimethyl sulfoxide)和90-95%原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之。注意：由于DMSO稀释时会放出大量热能，故不可将DMSO直接加入细胞液中，必须使用前先行配制完成；DMSO之等级和无菌过滤之方式为何？冷冻保存使用之DMSO等级，必须为Tissue culture grade之DMSO，其本身即为无菌状况，次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于4°C，避免反复冷冻解冻造成DMSO之裂解而释出有害物质，并可减少污染之机会。若要过滤DMSO，则须使用耐DMSO之Nylon材质滤膜；冷冻保存细胞之方法？冷冻保存方法一：冷冻管置于4°C 30~60分钟→ (-20°C 30分钟)→-80°C 16~18小时(或隔夜)→液氮槽vaporphase长期储存。冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3°C至–80°C以下，再放入液氮槽vapor phase长期储存。-20°C不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80°C冰箱中，惟存活率稍微降低一些；细胞欲冷冻保存时，细胞冷冻管内应有多少细胞浓度？冷冻管内细胞数目一般为1x10(6)cells/ml vial，融合瘤细胞则以5x10(6)cells/ml vial为宜；应如何避免细胞污染？细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之Z好方法；如果细胞发生微生物污染时，应如何处理？直接灭菌后丢弃之。
NCI-H1770[H1770]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
DOHH-2细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分
PK136细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
Wort琼脂基础，英文名：Wort Agar Base，用途：麦芽汁琼脂基础,用于真菌计数,每100ml添加0.235g甘油
麦康凯琼脂培养基，英文名：MacConkey Agar Medium，用途：ZG药典2015，用于大肠埃希氏菌选择性分离
LAPT肉汤，英文名：LAPT Broth，用途：基础培养基,用于乳酸菌的培养
酵母氮源琼脂，英文名：Yeast Nitrogen Agar，用途：用于通过碳源的利用对酵母菌进行分类
细胞形态特性：详见细胞说明书
SB肉汤，英文名：Super Broth，用途：用于基因工程大肠杆菌的高密度发酵
SC琼脂基础，英文名：Sulfite Cycloserine Agar Base，用途：用于产气荚膜梭菌的计数和培养,需添加D-环丝酸溶液及50%卵黄盐水悬液
CCF-STTG1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：星形胶质细胞；细胞传代方法：1：3—1：6传代；每周换液2-3次
RuCa细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
PtK2(NBL-5)细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
大鼠艾杜糖酸酯酶(IDS)ELISA试剂盒，英文名：IDS ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠腺苷三结合盒转运体A1(ABCA1)ELISA试剂盒，英文名：ABCA1 ELISA Kit，规格：48T/96T
药敏试验琼脂，英文名：Sensitivity Disk Agar，用途：用于抗生素药敏试验
细胞背景资料：详见相关文献介绍
细胞的冻存：为避免污染造成的损失，Z小化连续细胞系的遗传改变和避免有限细胞系的老化和转化，需要冻存哺乳细胞。冻存细胞前，细胞应该特性化并检查是否污染。有几种普通培养基用来冻存细胞。对于包含有血清的培养基，成分可能如下：包含10%甘油的完全培养基；包含10%二甲基亚砜(DMSO)的完全培养基；50%细胞条件培养基和50%含有10%甘油的新鲜培养基或50%细胞条件培养基和50%含有10%二甲基亚砜的新鲜培养基。对于无血清培养基，一些普通的培养基成分可能是：50%细胞条件无血清培养基和50%包含有7.5%二甲基亚砜的新鲜的无血清培养基或包含有7.5%二甲基亚砜和10%细胞培养级BSA的新鲜无血清培养基。悬浮细胞冻存：计数将要冻存的活细胞。细胞应该处于对数生长期。以大约200～400g离心5分钟沉淀细胞，使用移液管移去上清到Z小体积，不要搅乱细胞。以1×10(7)到5×10(7)细胞/ml密度，在包含有血清的冷冻培养基中再次悬浮细胞，或者以0.5×10(7)到1×10(7)在无血清培养基中，再次悬浮细胞。分装进冻存管，将冻存管置于湿冰上或放入4℃冰箱中，5分钟内开始冷冻步骤。细胞以1℃/分钟进行冷冻，可以通过可编程序的冷冻器进行或者把隔离盒中的冻存管放到-70℃到-90℃的冰箱中，然后转移到液氮中贮存。贴壁细胞冻存：使用分离试剂从基层分离细胞，分离时尽可能温和，使对细胞的损伤减少到Z小。在完全生长培养基中，再次悬浮分离细胞，确定有活力细胞数。以大约200g离心5分钟沉淀细胞。使用移液管移去上清到Z小体积，不要搅乱细胞。以5×10(6)到1×10(6)细胞/ml密度，在冻存液中悬浮细胞。分装进冻存管，将冻存管置于湿的冰上或放入4℃冰箱中，5分钟内开始冷冻步骤。细胞以1℃/分钟进行冷冻，可以通过可编程序的冷冻器进行或者把隔离盒中的冻存管放到-70℃到-90℃的冰箱中，然后转移到液氮中贮存。
细菌保存培养基(半固体)，英文名：Bacteria Save Medium,Semisolid，用途：用于菌种培养与保存
4-甲基伞形酮葡糖苷酸(MUG)培养基，英文名：MUG Medium，用途：用于大肠埃希氏菌检验(ChP)
CVT琼脂培养基，英文名：Crystal Violet Tetrazolium Chloride Agar Medium，用途：用于乳及乳制品中嗜低温细菌总数的测定
Tinsdale琼脂基础，英文名：Tinsdale Agar Base，用途：用于白喉杆菌分离培养,每100ml添加10ml血清和1支Tinsdale琼脂基础添加剂
293T细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：2传代
CHO/dhFr-细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：消化3-5分钟。1：2。3天内可长满。
NCI-H1573[H1573]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCI-H146细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长；细胞形态特性：上皮细胞；细胞传代方法：1：2—1：6传代，每周换液2-3次
MCM细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
RC-4BC细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
人205kDa核孔蛋白(NUP205)ELISA试剂盒，英文名：Human NUP205 ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠凝血因子FⅫ(FⅫ)ELISA试剂盒，英文名：FⅫ ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠G蛋白偶联受体(GPCR-APJ)ELISA试剂盒，英文名：GPCR-APJ ELISA Kit，规格：48T/96T
肺炎支原体肉汤基础，英文名：Mycoplasma pneumonia Broth Base，用途：含红,用于肺炎支原体培养,需添加小牛血清及YJ剂
酵母基酸缺陷型合成液体培养基(组酸/亮酸/色酸/腺嘌呤缺陷)，英文名：Yeast Synthetic Drop-out Fluid Medium，用途：用于酵母杂交及遗传突变株的筛选和研究
半固体营养琼脂，英文名：Semisolid Nutrient Agar，用途：用于细菌生化鉴定试验 SN 2552.5
RH35细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
NCI-H211细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：3-4天换液1次。
MN60细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
人半乳糖-3-O-磺基转移酶2(GAL3ST2)ELISA试剂盒，英文名：Human GAL3ST2 ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠可溶性CD86(B7-2/sCD86)ELISA试剂盒，英文名：B7-2/sCD86 ELISA Kit，规格：48T/96T
人芳香烃受体(AhR)ELISA试剂盒，英文名：Human AhR ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠Ⅳ型胶原α1(COL4α1)ELISA试剂盒，英文名：COL4α1 ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
小鼠N-甲基-D-天氡酸离子能谷酸受体1(NMDA-R1)ELISA试剂盒，英文名：Mouse NMDA-R1 ELISA Kit，规格：48T/96T
酵母基酸缺陷型合成琼脂培养基(亮酸/色酸缺陷)，英文名：Yeast Synthetic Drop-out Agar Medium，用途：用于酵母杂交及遗传突变株的筛选和研究
细菌L型分离琼脂，英文名：L-Bacterial Isolation Agar，用途：用于样本中L型细菌的分离培养
营养肉汤(NB)，英文名：Nutrient Broth，用途：用于细菌的培养和增菌
MRS培养基(改良MRS培养基基础)，英文名：MRS Medium(Modified MRS Medium Base)，用途：用于乳酸菌计数,改良MRS培养基每100ml需添加1支莫匹罗星锂盐储备液
厌氧肉肝汤培养基，英文名：Anaerobic Meat Liver Broth，用途：用于厌氧微生物的培养
NCI-H1668细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
EB1细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长 ；细胞形态特性：淋巴母细胞样；细胞传代方法：1：2传代
细胞产品包装：复苏形式：T25培养瓶(一瓶)或冻存形式：1ml冻存管(两支)
KARPAS-422细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
PC-12细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
缓冲蛋白胨水(BPW)，英文名：Buffered Peptone Water，用途：用于沙门氏菌、阪崎杆菌的增菌(日本标准）
HNE1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
BPH-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
CAL62细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
解冻细胞常见实验问题分析及推荐解决方法：在解冻冻存细胞时，发现会出现存活率低、大量细胞碎片及生长缓慢等问题，究竟是什么原因导致，我们该怎么进行解决？以下是国内外细胞培养专家针对解冻细胞实验问题，总结的一些解决方案！出现低存活率的可能原因及推荐解决方案如下：1)解冻过程中细胞裂解，推荐的解决方案：可预期到一定量的细胞死亡，因此细胞的浓度应足够高，考虑到这一损失。起始浓度为1*10(6)至1*10(7)细胞/毫升；2)解冻过程中的问题，推荐的解决方案：在-70℃至-80℃下保存冷冻的培养物，保存时间为1-5天，但这不是保存的方法。在37℃充分解冻后应立即开始培养；3)对冷冻液过敏，推荐的解决方案：A.完全或部分更换培养基，减少培养基中冷冻液的量。在24小时后更换培养液体可全部去除冷冻液。B.留出更多时间供培养物恢复。有时细胞需要几周时间才能形成单层或密集的悬浮物，取决于冷冻时细胞的年龄或传代次数或在生长阶段中的位置。冷冻的条件在对数期；4)被冷冻的原种细胞的年龄或冷冻时培养物的年龄，推荐的解决方案：解冻Z近冷冻的细胞。细胞处于冷冻状态的时间越长，存活率越低。检查冷冻细胞的时间和方法。在冷冻时细胞应处于对数期。
NCI-H1963[H1963]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。