HuTu80人十二指肠腺癌细胞系 实验平台专业技术指导

HuTu80人十二指肠腺癌细胞系 实验平台专业技术指导
人睾丸受体4(TR4)ELISA试剂盒，英文名：Human TR4 ELISA Kit，规格：48T/96T
人含区PHD指蛋白1(BRPF1)ELISA试剂盒，英文名：Human BRPF1 ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞培养过程中相关问题总结：悬浮性细胞应如何继代处理？一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，可将培养角瓶口端稍微抬高，直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养角瓶，加入新鲜培养基稀释至适当浓度，重复前述步骤即可。欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速？欲回收动物细胞，其离心速率一般为300xg(约1,000rpm)，5-10分钟，过高之转速，将造成细胞死亡；细胞之接种密度为何？依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因；细胞冷冻培养基之成份为何？动物细胞冷冻保存时Z常使用的冷冻培养基是含5-10%DMSO(dimethyl sulfoxide)和90-95%原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之。注意：由于DMSO稀释时会放出大量热能，故不可将DMSO直接加入细胞液中，必须使用前先行配制完成；DMSO之等级和无菌过滤之方式为何？冷冻保存使用之DMSO等级，必须为Tissue culture grade之DMSO，其本身即为无菌状况，次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于4°C，避免反复冷冻解冻造成DMSO之裂解而释出有害物质，并可减少污染之机会。若要过滤DMSO，则须使用耐DMSO之Nylon材质滤膜；冷冻保存细胞之方法？冷冻保存方法一：冷冻管置于4°C 30~60分钟→ (-20°C 30分钟)→-80°C 16~18小时(或隔夜)→液氮槽vaporphase长期储存。冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3°C至–80°C以下，再放入液氮槽vapor phase长期储存。-20°C不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80°C冰箱中，惟存活率稍微降低一些；细胞欲冷冻保存时，细胞冷冻管内应有多少细胞浓度？冷冻管内细胞数目一般为1x10(6)cells/ml vial，融合瘤细胞则以5x10(6)cells/ml vial为宜；应如何避免细胞污染？细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之Z好方法；如果细胞发生微生物污染时，应如何处理？直接灭菌后丢弃之。
N6培养基，英文名：N6 Medium，用途：适合于愈伤组织和悬浮细胞培养
葡萄糖蛋白胨肉汤，英文名：Dextrose Peptone Broth，用途：用于霉菌、酵母菌检测
葡萄糖肉浸液肉汤，英文名：Dextrose Meat Infusion Broth，用途：用于溶血性链球菌增菌
3%NaCl MR-VP培养基，英文名：MR-VP Medium with 3%NaCl，用途：用于弧菌的MR、VP试验
细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分
3%NaCl MR-VP培养基，英文名：MR-VP Medium with 3%NaCl，用途：用于弧菌的MR、VP试验
小鼠血小板激活因子(PAF)ELISA试剂盒，英文名：Mouse PAF ELISA Kit，规格：48T/96T
人蔗糖酶异麦芽糖酶(SI)ELISA试剂盒，英文名：Human SI ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠糖类抗原19-9(CA19-9)ELISA试剂盒，英文名：Mouse CA19-9 ELISA Kit，规格：48T/96T
解冻细胞常见实验问题分析及推荐解决方法：在解冻冻存细胞时，发现会出现存活率低、大量细胞碎片及生长缓慢等问题，究竟是什么原因导致，我们该怎么进行解决？以下是国内外细胞培养专家针对解冻细胞实验问题，总结的一些解决方案！出现低存活率的可能原因及推荐解决方案如下：1)解冻过程中细胞裂解，推荐的解决方案：可预期到一定量的细胞死亡，因此细胞的浓度应足够高，考虑到这一损失。起始浓度为1*10(6)至1*10(7)细胞/毫升；2)解冻过程中的问题，推荐的解决方案：在-70℃至-80℃下保存冷冻的培养物，保存时间为1-5天，但这不是保存的方法。在37℃充分解冻后应立即开始培养；3)对冷冻液过敏，推荐的解决方案：A.完全或部分更换培养基，减少培养基中冷冻液的量。在24小时后更换培养液体可全部去除冷冻液。B.留出更多时间供培养物恢复。有时细胞需要几周时间才能形成单层或密集的悬浮物，取决于冷冻时细胞的年龄或传代次数或在生长阶段中的位置。冷冻的条件在对数期；4)被冷冻的原种细胞的年龄或冷冻时培养物的年龄，推荐的解决方案：解冻Z近冷冻的细胞。细胞处于冷冻状态的时间越长，存活率越低。检查冷冻细胞的时间和方法。在冷冻时细胞应处于对数期。
马丁培养基，英文名：Martin Medium，用途：用于真菌的培养，含琼脂、霉素及孟加拉红。
抗生素培养基8号，英文名：Medium 8，用途：用于微生物方法测定抗生素效价
酪胨-大豆卵磷脂-吐温20液体培养基基础，英文名：Fluid Casein Digest-Soy Lecithin-Polysorbate 20 Me，用途：用于药品稀释,每升培养基需添加40ml吐温20
细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
Wort琼脂基础，英文名：Wort Agar Base，用途：麦芽汁琼脂基础,用于真菌计数,每100ml添加0.235g甘油
大鼠纤维蛋白(FBL)ELISA试剂盒，英文名：FBL ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠封闭蛋白2(CLDN2)ELISA试剂盒，英文名：Mouse CLDN2 ELISA Kit，规格：48T/96T
人成骨生长肽/成骨多肽(OGP)ELISA试剂盒，英文名：Human OGP ELISA Kit，规格：48T/96T
人利钠肽受体3(NPR3)ELISA试剂盒，英文名：Human NPR3 ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠原卟啉(EP)ELISA试剂盒，英文名：Mouse EP ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠Apelin受体(APLNR)ELISA试剂盒，英文名：APLNR ELISA Kit，规格：48T/96T
DMS153[DMS153]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
293A细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
SKOV-3细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HCC-366细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HMEC细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
MS1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：消化3-5分钟。1：2。3天内可长满。
TE-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：消化3-5分钟。1：2。3天内可长满。
A-204细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：6-1：10传代；每周2-3次
NOR-10细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
厌氧菌琼脂，英文名：Anaerobic Agar，用途：用于厌氧微生物的培养
Baird-Parker琼脂培养基基础，英文名：Baird-Parker Agar Medium Base，用途：用于金黄色葡萄球菌检验,每95ml添加1支亚碲酸钾卵黄增菌液
TCBS琼脂，英文名：Thiosulfate Citrate Bile Salts Sucrous Agar，用途：用于副溶血性弧菌选择性分离
A-204细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：6-1：10传代；每周2-3次
DOK细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
C643细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞产品包装：复苏形式：T25培养瓶(一瓶)或冻存形式：1ml冻存管(两支)
RAW264.7细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：不规则圆形；细胞传代方法：1：2传代
MDA-MB-415细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞；细胞传代方法：消化5-10分钟。1：2。4-5天长满。
OC-3-VGH细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
BV2细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：上皮细胞样；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
KM932细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
EC9706细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞样；细胞传代方法：1：2传代
SK-MEL-5细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：星形的；细胞传代方法：1：3-1：6传代，2-3天换液1次。
MARC-145细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
改良胰蛋白胨大豆肉汤(mTSB)/(mTSB+N基础)，英文名：mTSB Broth with Novobiocin Base，用途：用于O157菌选择性增菌,每225ml中添加1支新生霉素储备液组成含新生霉素的改良胰蛋白胨大豆肉汤(mTSB+N)
细胞形态特性：详见细胞说明书
改良Gorodkowa琼脂，英文名：Modified Gorodkowa Agar，用途：用于酵母孢子的形成和培养
甘露醇发酵培养基，英文名：Mannitol Fermentation Medium，用途：用于甘露醇发酵试验
pH7.0 化钠-蛋白胨缓冲液，英文名：Buffered Sodium Chloride-peptone Solution pH 7.0，用途：用于样品制备
人谷氧还蛋白5(GLRX5)ELISA试剂盒，英文名：Human GLRX5 ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠黄嘌呤脱酶(XDH)ELISA试剂盒，英文名：XDH ELISA Kit，规格：48T/96T
CCC-HSF-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HPA-s细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞的冻存：为避免污染造成的损失，Z小化连续细胞系的遗传改变和避免有限细胞系的老化和转化，需要冻存哺乳细胞。冻存细胞前，细胞应该特性化并检查是否污染。有几种普通培养基用来冻存细胞。对于包含有血清的培养基，成分可能如下：包含10%甘油的完全培养基；包含10%二甲基亚砜(DMSO)的完全培养基；50%细胞条件培养基和50%含有10%甘油的新鲜培养基或50%细胞条件培养基和50%含有10%二甲基亚砜的新鲜培养基。对于无血清培养基，一些普通的培养基成分可能是：50%细胞条件无血清培养基和50%包含有7.5%二甲基亚砜的新鲜的无血清培养基或包含有7.5%二甲基亚砜和10%细胞培养级BSA的新鲜无血清培养基。悬浮细胞冻存：计数将要冻存的活细胞。细胞应该处于对数生长期。以大约200～400g离心5分钟沉淀细胞，使用移液管移去上清到Z小体积，不要搅乱细胞。以1×10(7)到5×10(7)细胞/ml密度，在包含有血清的冷冻培养基中再次悬浮细胞，或者以0.5×10(7)到1×10(7)在无血清培养基中，再次悬浮细胞。分装进冻存管，将冻存管置于湿冰上或放入4℃冰箱中，5分钟内开始冷冻步骤。细胞以1℃/分钟进行冷冻，可以通过可编程序的冷冻器进行或者把隔离盒中的冻存管放到-70℃到-90℃的冰箱中，然后转移到液氮中贮存。贴壁细胞冻存：使用分离试剂从基层分离细胞，分离时尽可能温和，使对细胞的损伤减少到Z小。在完全生长培养基中，再次悬浮分离细胞，确定有活力细胞数。以大约200g离心5分钟沉淀细胞。使用移液管移去上清到Z小体积，不要搅乱细胞。以5×10(6)到1×10(6)细胞/ml密度，在冻存液中悬浮细胞。分装进冻存管，将冻存管置于湿的冰上或放入4℃冰箱中，5分钟内开始冷冻步骤。细胞以1℃/分钟进行冷冻，可以通过可编程序的冷冻器进行或者把隔离盒中的冻存管放到-70℃到-90℃的冰箱中，然后转移到液氮中贮存。
WL营养肉汤，英文名：Wallerstein Laboratory Nutrient Broth，用途：用于啤酒和发酵产品中酵母菌和细菌的培养
蜡状芽孢杆菌琼脂基础，英文名：Bacillus Cereus Selective Agar Base，用途：用于蜡样芽孢杆菌的选择性分离，每100ml添加1支多粘菌素B溶液
Starky代钠琼脂培养基，英文名：Starky -Na2S2O3 Agar Medium，用途：用于氧化杆菌的培养
人抗缪勒管激素(AMH)ELISA试剂盒，英文名：Human AMH ELISA Kit，规格：48T/96T
人细胞色素b(COB)ELISA试剂盒，英文名：Human COB ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠肌酸激酶同工酶MB(CKMB)ELISA试剂盒，英文名：Mouse CKMB ELISA Kit，规格：48T/96T
hOMF细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
hOMF细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HHSEC细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞背景资料：详见相关文献介绍
OV-90细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞；细胞传代方法：1：2-1：3传代，3-4天换液1次。
大豆酪蛋白肉汤培养基(胰酪大豆胨液体培养基)，英文名：Fluid Soybean-Casein Digest Broth，用途：用于无菌检查和细菌培养
YD-38细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2传代
HUP-T3细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2传代
CAMA-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞贴壁斑块；紧凑，很少汇合；细胞传代方法：1：3—1：4传代；每周换液2-3次。
CRT细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。