PG人巨细胞肺癌细胞系 实验平台专业技术指导

PG人巨细胞肺癌细胞系 实验平台专业技术指导
大鼠肌醇3激酶(PI3K)ELISA试剂盒，英文名：PI3K ELISA Kit，规格：48T/96T
人血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子(VWF)ELISA试剂盒，英文名：Human VWF ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞培养过程中相关问题总结：悬浮性细胞应如何继代处理？一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，可将培养角瓶口端稍微抬高，直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养角瓶，加入新鲜培养基稀释至适当浓度，重复前述步骤即可。欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速？欲回收动物细胞，其离心速率一般为300xg(约1,000rpm)，5-10分钟，过高之转速，将造成细胞死亡；细胞之接种密度为何？依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因；细胞冷冻培养基之成份为何？动物细胞冷冻保存时Z常使用的冷冻培养基是含5-10%DMSO(dimethyl sulfoxide)和90-95%原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之。注意：由于DMSO稀释时会放出大量热能，故不可将DMSO直接加入细胞液中，必须使用前先行配制完成；DMSO之等级和无菌过滤之方式为何？冷冻保存使用之DMSO等级，必须为Tissue culture grade之DMSO，其本身即为无菌状况，次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于4°C，避免反复冷冻解冻造成DMSO之裂解而释出有害物质，并可减少污染之机会。若要过滤DMSO，则须使用耐DMSO之Nylon材质滤膜；冷冻保存细胞之方法？冷冻保存方法一：冷冻管置于4°C 30~60分钟→ (-20°C 30分钟)→-80°C 16~18小时(或隔夜)→液氮槽vaporphase长期储存。冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3°C至–80°C以下，再放入液氮槽vapor phase长期储存。-20°C不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80°C冰箱中，惟存活率稍微降低一些；细胞欲冷冻保存时，细胞冷冻管内应有多少细胞浓度？冷冻管内细胞数目一般为1x10(6)cells/ml vial，融合瘤细胞则以5x10(6)cells/ml vial为宜；应如何避免细胞污染？细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之Z好方法；如果细胞发生微生物污染时，应如何处理？直接灭菌后丢弃之。
KF链球菌琼脂，英文名：KF Streptococcus Agar，用途：用于肠球菌、链球菌滤膜法计数和检验，每100ml培养基添加1支1%TTC溶液
Starky液体培养基，英文名：Starky Medium，用途：用于氧化杆菌的培养
YPD肉汤，英文名：YPD Broth，用途：用于分子生物学实验中酵母菌的培养和保存
White培养基，英文名：White Medium，用途：用于植物组织培养，适合于根的培养
细胞生长特性：贴壁
牛津琼脂(OXA)基础，英文名：Oxford Agar Base，用途：用于李氏菌分离,每100ml添加多粘菌素E1支
人蛋白激酶C-θ(PKCθ)ELISA试剂盒，英文名：Human PKCθ ELISA Kit，规格：48T/96T
人多巴胺受体D4(D4R/DRD4)ELISA试剂盒，英文名：Human D4R/DRD4 ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠腺苷脱羧酶(AMD)ELISA试剂盒，英文名：Mouse AMD ELISA Kit，规格：48T/96T
解冻细胞常见实验问题分析及推荐解决方法：在解冻冻存细胞时，发现会出现存活率低、大量细胞碎片及生长缓慢等问题，究竟是什么原因导致，我们该怎么进行解决？以下是国内外细胞培养专家针对解冻细胞实验问题，总结的一些解决方案！出现低存活率的可能原因及推荐解决方案如下：1)解冻过程中细胞裂解，推荐的解决方案：可预期到一定量的细胞死亡，因此细胞的浓度应足够高，考虑到这一损失。起始浓度为1*10(6)至1*10(7)细胞/毫升；2)解冻过程中的问题，推荐的解决方案：在-70℃至-80℃下保存冷冻的培养物，保存时间为1-5天，但这不是保存的方法。在37℃充分解冻后应立即开始培养；3)对冷冻液过敏，推荐的解决方案：A.完全或部分更换培养基，减少培养基中冷冻液的量。在24小时后更换培养液体可全部去除冷冻液。B.留出更多时间供培养物恢复。有时细胞需要几周时间才能形成单层或密集的悬浮物，取决于冷冻时细胞的年龄或传代次数或在生长阶段中的位置。冷冻的条件在对数期；4)被冷冻的原种细胞的年龄或冷冻时培养物的年龄，推荐的解决方案：解冻Z近冷冻的细胞。细胞处于冷冻状态的时间越长，存活率越低。检查冷冻细胞的时间和方法。在冷冻时细胞应处于对数期。
化镁孔雀绿增菌液(RV/MM)，英文名：Rappaport-Vassiliadis Medium，用途：用于沙门氏菌选择性增菌
马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)(日本标准用)，英文名：Potato dextrose agar，用途：用于霉菌和酵母菌计数
布氏琼脂，英文名：Brucella Agar，用途：用于布鲁氏菌属的培养
细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
酵母氮源基础，无基酸、铵，英文名：Yeast Nitrogen Base,without Amino Acid and Ammoniu，用途：用于通过碳源和氮源的利用对酵母菌进行分类
大鼠组织蛋白酶抗体(Cath AB)ELISA试剂盒，英文名：Cath AB ELISA Kit，规格：48T/96T
人促泌素(SCGN)ELISA试剂盒，英文名：Human SCGN ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠高分子量细胞角蛋白(CK-HMW)ELISA试剂盒，英文名：Mouse CK-HMW ELISA Kit，规格：48T/96T
人半胱酸蛋白酶YZ剂5(CST5)ELISA试剂盒，英文名：Human CST5 ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠防御素α1(DEFα1)ELISA试剂盒，英文名：Mouse DEFα1 ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠2',5'-寡腺苷酸合成酶1(OAS1)ELISA试剂盒，英文名：Mouse OAS1 ELISA Kit，规格：48T/96T
SK-RC-52细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
L-cell细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCI-H1650[H-1650,H1650]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
U-2OS[U2OS,U2-OS,U-2OS]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
MPVECs细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
SNU-C2B细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HOS细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：成纤维细胞和上皮细胞的混合样；细胞传代方法：1：2-1：4传代；每周换液2-3次。
NCI-H2066[H2066]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
SGC-7901细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：2传代
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
胰酪胨大豆琼脂培养基(TSA)，英文名：Soybean-Casein Digest Agar，用途：用于YJ剂效力检查（ZG药典2010）
YSG琼脂培养基基础，英文名：YSG Agar Medium Base，用途：用于耐热耐酸菌的检测,需使用1N或调节pH
A1培养基，英文名：A1 Medium，用途：用于水源中大肠菌群的检验
NCI-H2066[H2066]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HCC-1395细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCI-H1869[H1869]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞产品包装：复苏形式：T25培养瓶(一瓶)或冻存形式：1ml冻存管(两支)
ACHN细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞样；细胞传代方法：1：2-1：3传代，每周2-3次。
3T3NIH细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
KBM7细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
KYSE30细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
A375细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞样；细胞传代方法：1：2传代
LIPF155C细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
ACT-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
AtT20细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
明胶培养基(营养明胶培养基)，英文名：Gelatin Medium，用途：用于细菌的明胶生化试验
细胞形态特性：详见细胞说明书
抗生素培养基3号，英文名：Medium 3（Penassay Broth），用途：用于微生物方法测定抗生素效价
碳酸钠琼脂基础，英文名：Sodium Hydrogen- Carbonate Agar Base，用途：用于炭疽杆菌的毒力测定,每100ml添加3～5ml无菌马血清
肠毒素产毒培养基(不含琼脂)，英文名：Enterotoxin toxin-producing medium without Agar，用途：用于葡萄球菌产毒素检验
人K-乙酰转移酶2A(KAT2A)ELISA试剂盒，英文名：Human KAT2A ELISA Kit，规格：48T/96T
人间生蛋白1(MSGN1)ELISA试剂盒，英文名：Human MSGN1 ELISA Kit，规格：48T/96T
NCI-295R细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
MGECs细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
为了防止因污染或技术原因使长期培养功亏一篑，考虑到培养细胞因传代而迟早会出现变异，有时因寄赠、交换和购买，培养细胞从一个实验室转运到另一个实验室，的策略是进行低温保存。这对于维持一些特殊细胞株的遗传特性极为重要。现简要介绍深低温保存法(-70℃~-196℃)的特点。细胞深低温保存的基本原理是：在-70℃以下时，细胞内的酶活性均己停止，即代谢处于完全停止状态，故可以长期保存。细胞低温保存的关键，在于通过0~20℃阶段的处理过程。在此温度范围内，水晶呈针状，极易招致细胞的严重损伤。冻存细胞的复苏：冻存细胞较脆弱，要轻柔操作。冻存细胞要快速融化，并直接加入完全生长培养基中。若细胞对冻存剂(DMSO或甘油)敏感，离心去除冻存培养基，然后加入完全生长培养基中。直接铺板方法：取出贮存细胞，37℃水浴中快速融化；直接用完全生长培养基铺板细胞。1ml冻存细胞使用10~20ml完全生长培养基。进行活细胞计数，细胞接种应该至少在3×10(5)活细胞/ml；培养细胞12到24小时，更换新鲜的完全生长培养基，去除冻存剂。离心方法：取出贮存细胞，37℃水浴中快速融化；把1到2ml冻存细胞加入到大约25ml完全生长培养基，轻轻混匀；以大约80x离心2到3分钟；弃去上清。在完全生长培养基轻轻再次悬浮细胞，并且进行活细胞计数。细胞铺板，细胞接种应该至少为3×10(5)活细胞/ml。细胞的分化：一个成年人全身细胞总数约1012个，可以区分为200多种不同类型的细胞：形态结构，代谢，行为，功能等各不相同。追根溯源，这么多种细胞均来自一个受精卵细胞。所以，通常把发育过程中，细胞后代在形态、结构和功能上发生差异的过程称为细胞分化。细胞分化发生在胚胎阶段，也发生在胎儿出生以后，乃至成人阶段。例如，人体血细胞的产生和分化，这个过程在人的一生中一直持续着。由旺盛生长不断分裂的细胞，转入分化，通常从细胞周期中G1期开始时一个确定的点G0点“逃逸”出细胞周期。旺盛生长分裂的细胞和各种分化了的细胞，它们的基因表达和代谢活动各不相同。
庖肉培养基基础，英文名：Cooked Meat Medium Base，用途：含9.8%牛心浸粉,用于厌氧菌的培养,需添加适量庖肉牛肉粒
乙酰胺肉汤，英文名：Acetamide Broth，用途：用于铜绿假单胞菌产试验
Grein – Meyers 琼脂，英文名：Grein and Meyers Agar(Grein and Meyers, 1958)，用途：用于链霉菌属的培养鉴定
人唾液酸转移酶7B(SIAT7B)ELISA试剂盒，英文名：Human SIAT7B ELISA Kit，规格：48T/96T
人甲胎蛋白异质体2(αFPL2)ELISA试剂盒，英文名：Human αFPL2 ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠热休克蛋白40(Hsp-40)ELISA试剂盒，英文名：Mouse Hsp-40 ELISA Kit，规格：48T/96T
c918细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长　；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2传代
SW48[SW-48]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
786-O细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：2传代
细胞背景资料：巨细胞肺癌
OUMS-23细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
铜培养基，英文名：Bluestone Medium，用途：用于啤酒野生酵母的检验
SW 780 [SW-780, SW780]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
3T3-F442A细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HCC1143细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：2—1：4传代，每周换液2—3次
BT-B细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：上皮细胞样；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。