Th17小鼠辅助性T细胞系 实验室四代复苏

Th17小鼠辅助性T细胞系 实验室四代复苏
正确的细胞复苏需知事项：细胞冻存好了，接下来要注意什么问题呢？没错，就是记得到时间了，拿出来复苏。那么，细胞复苏的过程中又有哪些该注意的事项呢？细胞活力和形态检查的作用何在？活力检查——千万不要使用不健康的细胞，可能有污染(真菌、支原体等)，如果发现有污染毫不犹豫的丢弃!形态检查——检查细胞的固有形态和生长行为。冻存细胞：补充新的培养液——在您开始冻存细胞的前一天补充新的培养液。在细胞长至70%单层时收获细胞，计数活细胞数，用冻存液调整细胞密度~5 x106 Cell s/ml (根据不同的细胞类型调整)；冻存液——用冻存液洗细胞并用冻存液重悬细胞，有不同类型的冻存液，根据细胞类型选择Z合适的冻存液(常用的冻存液成分有)：5-10% DMSO——注意确保DMSO不含有其他的毒性物质；5-15%甘油；如果细胞在无血清培养基内生长，应在50%条件培养基内(细胞在无血清培养基内生长24小时)内冻存和复苏。在冻存管上标记好细胞类型，日期，冻存人等信息，并保证每冻存管不超过1.5ml。放入液氮罐之前记录冻存管的数量和位置。以Z快的速度转移冻存管知液氮罐内，因此，此步骤Z好使用干冰，或者把冻存管浸入装有液氮的小盒内。此外还要注意，在冻存管上没有足够的空间记录细胞的详细信息，做好记录是非常非常重要的！还有一个Z重要的，一定要在异地的液氮罐内保存同样的一份细胞，以免其中的一个液氮罐出现问题！细胞正确的复苏方式和正确的冻存方式同样重要，熟记以下要点：当从液氮罐内取出细胞时，有可能会出现冻存管破裂的情况，使用保护面罩和防护服十分必要；其实，细胞复苏只是一个简单的实验，不过这其中却不可避免有一些需要注意的细节，不然，也不一定会尽如人意。例如说，人身健康方面：一定要记得做好防冻工作，戴上护目镜；尽量降低DMSO对细胞的损伤等等。
小鼠硬骨素(SOST)ELISA试剂盒，英文名：Mouse SOST ELISA Kit，规格：48T/96T
人白介素11受体α(IL11Rα)ELISA试剂盒，英文名：Human IL11Rα ELISA Kit，规格：48T/96T
KMH-2细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
COLO 320HSR细胞专业复苏；细胞生长特性：半贴壁生长；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2传代。3天内可长满。
MPC5细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞背景资料：辅助性T细胞
人环指蛋白39(RNF39)ELISA试剂盒，英文名：Human RNF39 ELISA Kit，规格：48T/96T
人α-黑色素细胞刺激素(α-MSH)ELISA试剂盒，英文名：Human α-MSH ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠葡萄糖变位酶(PGM)ELISA试剂盒，英文名：PGM ELISA Kit，规格：48T/96T
人α干扰素(IFN-α)ELISA试剂盒，英文名：Human IFN-α ELISA Kit，规格：48T/96T
哥伦比亚-MUG琼脂培养基，英文名：Columbia-MUG Agar Medium，用途：于大肠杆菌荧光检测
黄原胶液体发酵培养基(葡萄糖)，英文名：Xanthan gum Fluid Medium with Dextrose，用途：以葡萄糖为碳源,用于黄原胶生产
常见细胞培养中一些问题总结：1)培养基中血清的比例多少合适？血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的含量多少会对细胞的生长会产生极大的影响。血清的含量一般为5%-15%，不要低于5%或高过20%，因为含量过低会导致细胞营养不足，过高则会破坏渗透压平衡。一般建议血清含量为10%，可以适量加减；2)何时须更换培养基？视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上的更换时间，按时更换培养基即可。还可以参照指示剂的颜色变化进行更换；3)购买的复苏细胞，为何会有脱落？因为运输的过程中不可避免的会有震荡，收到后可以离心收集；4)购买的细胞冷冻管经解冻后，为何会发生细胞数目太少之情形？研究人员在冷冻细胞之培养时出现细胞数目太少，大都是因为离心过程操作上的失误，造成细胞的物理性损伤，以及细胞流失。建议细胞解冻后不要立刻离心，应待细胞生长隔夜后再更换培养基即可；5)购买的细胞死亡或细胞存活率不佳可能原因？研究人员在细胞培养时出现存活率不佳，常见原因可归纳为：培养基使用错误或培养基品质不佳。血清使用错误或血清的品质不佳。解冻过程错误。冷冻细胞解冻后，加以洗涤细胞和离心。悬浮细胞误认为死细胞。培养温度使用错误。细胞置于–80°C太久；6)收到的冷冻管瓶身破裂，瓶盖有裂纹，或瓶盖脱落之原因？冷冻管瓶盖裂纹，或瓶身破裂，可能是因为操作者夹取冷冻管时用力不当，造成冷冻管裂损，建议使用止血钳小心夹取。另冷冻管瓶盖松动或松脱，乃因热胀冷缩之物理现象，冷冻管有可能因此而造成细胞污染，故冷冻管于放入和取出液氮桶时，均应立刻将冷冻管再一次扭紧。
Hela229[HeLa229]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
MLO-Y4细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
SL-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
FRhK-4[FRhK4]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
酵母基酸缺陷型合成琼脂培养基(亮酸/色酸缺陷)，英文名：Yeast Synthetic Drop-out Agar Medium，用途：用于酵母杂交及遗传突变株的筛选和研究
哥伦比亚-MUG琼脂培养基，英文名：Columbia-MUG Agar Medium，用途：于大肠杆菌荧光检测
黄原胶液体发酵培养基(葡萄糖)，英文名：Xanthan gum Fluid Medium with Dextrose，用途：以葡萄糖为碳源,用于黄原胶生产
Hayflick培养基，英文名：Hayflick Medium，用途：需添加马血清、青霉素
Hayflick培养基，英文名：Hayflick Medium，用途：需添加马血清、青霉素
DTA培养基，英文名：DTA Medium，用途：用于乳与乳制品中嗜热需氧芽孢数的测定
含铁牛奶培养基(含铁牛乳培养基)，英文名：Iron Milk Medium，用途：用于产气荚膜梭菌暴烈发酵试验
TCBS琼脂，英文名：Thiosulfate Citrate Bile Salts Sucrous Agar，用途：用于副溶血性弧菌选择性分离
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
人抗软骨抗体(anti-cartilage-Ab)ELISA试剂盒，英文名：Human anti-cartilage-Ab ELISA Kit，规格：48T/96T
人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)ELISA试剂盒，英文名：Human t-PA ELISA Kit，规格：48T/96T
支原体固体培养基，英文名：Mycoplasma Agar Medium Base，用途：需添加马血清、MEM 培养液、青霉素
酵母基酸缺陷型合成琼脂培养基(亮酸/色酸缺陷)，英文名：Yeast Synthetic Drop-out Agar Medium，用途：用于酵母杂交及遗传突变株的筛选和研究
L-363细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HCC1954 BL细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HL7702[L02]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
高盐察氏培养基，英文名：Salt Czapek Dox Medium，用途：用于霉菌总数的测定
沙氏脑心浸液琼脂基础，英文名：Sabouraud Brain Heart Infusion Agar Base，用途：用于真菌的选择性分离,每100ml培养基中添加1支霉素溶液
DTA培养基，英文名：DTA Medium，用途：用于乳与乳制品中嗜热需氧芽孢数的测定
细胞产品包装：复苏形式：T25培养瓶(一瓶)或冻存形式：1ml冻存管(两支)
含铁牛奶培养基(含铁牛乳培养基)，英文名：Iron Milk Medium，用途：用于产气荚膜梭菌暴烈发酵试验
TCBS琼脂，英文名：Thiosulfate Citrate Bile Salts Sucrous Agar，用途：用于副溶血性弧菌选择性分离
Caki-2细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞样；细胞传代方法：1：3—1：6传代，每周换液2—3次
NRK49F细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞形态特性：详见细胞说明书
WB-F344细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：2传代
Sol8细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
OE19细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：2传代
SNU-398细胞专业复苏；细胞生长特性：混合生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：3-1：6传代；2-3天换液1次。
Loo细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
动物细胞实验室必备仪器进行简单介绍：1)CO2培养箱：CO2培养箱是细胞培养的必备仪器，它为细胞提供了一个体外培养的舒适环境，如适宜的温度、湿度、酸碱度、O2浓度等。细胞在体外培养时很容易受到各种细菌、微生物的感染，因此，CO2培养箱的灭菌和YJ能力就显得尤为重要；2)烘箱(干燥箱)：用于细胞培养的一些器械、器皿必须烘干后才能使用，玻璃器皿等须干热消毒。干热消毒时，烘箱内温度一般要达到160℃以上，通常使用鼓风式烘箱。其优点是温度均匀、效果较好，缺点是升温过程较慢。升温时不能先升温后鼓风而应鼓风与升温同时开始，至100℃时，停止鼓风。需注意避免包裹器皿的纸或棉花烧焦，烧焦的碎屑可影响细胞的生长。消毒后不能立即打开箱门，以免骤冷导致玻璃器皿破裂，应等温度自然下降至100℃以下后可开门。3)超净工作台/生物安全柜：细胞培养对无菌环境要求很高，在细胞操作时，一般需要在100级空气质量条件下进行，因此超净工作台或生物安全柜就必须配备。4)液氮罐：为了保存细胞，特别是不易获得的突变型细胞或细胞株，要将细胞冻存。冻存的温度一般为液氮温度-196℃，因此，需要液氮罐。在此环境中，一般细胞可以保存十年具有活性。5)超低温冰箱：细胞的冻存过程需要一系列程序降温，一般4℃下存放30min，转放-20℃ 1 hour，再转入-70至-80℃过夜，之后才可以转移到液氮内(-196℃)，这时就必须配备一台-86℃超低温冰箱。一般超低温冰箱保存细胞可达数月，对于不需要长期冻存的细胞，可暂时放于超低温冰箱保存。6)恒温水浴：从液氮或超低温冰箱中取出细胞冻存管需要立即放于37℃水浴中快速复苏之后才传代培养，因此，恒温水浴也是细胞实验室必备仪器。7离心机：细胞培养需要离心收集传代细胞，所以需要配置低速的常温离心机，对于后期细胞内容物的分离则需要高速冷冻离心机。除上述仪器外，移液器、高压灭菌锅、倒置显微镜、荧光显微镜也是细胞培养的必备仪器，发酵罐、转瓶机等也常常见于细胞培养实验室。
HK-2C细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞生长特性：悬浮
HASMC细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
RWPE1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
高盐察氏培养基，英文名：Salt Czapek Dox Medium，用途：用于霉菌总数的测定
沙氏脑心浸液琼脂基础，英文名：Sabouraud Brain Heart Infusion Agar Base，用途：用于真菌的选择性分离,每100ml培养基中添加1支霉素溶液
支原体固体培养基，英文名：Mycoplasma Agar Medium Base，用途：需添加马血清、MEM 培养液、青霉素