HLEC(晶状体)人晶状体上皮细胞系 实验室四代复苏

HLEC(晶状体)人晶状体上皮细胞系 实验室四代复苏
正确的细胞复苏需知事项：细胞冻存好了，接下来要注意什么问题呢？没错，就是记得到时间了，拿出来复苏。那么，细胞复苏的过程中又有哪些该注意的事项呢？细胞活力和形态检查的作用何在？活力检查——千万不要使用不健康的细胞，可能有污染(真菌、支原体等)，如果发现有污染毫不犹豫的丢弃!形态检查——检查细胞的固有形态和生长行为。冻存细胞：补充新的培养液——在您开始冻存细胞的前一天补充新的培养液。在细胞长至70%单层时收获细胞，计数活细胞数，用冻存液调整细胞密度~5 x106 Cell s/ml (根据不同的细胞类型调整)；冻存液——用冻存液洗细胞并用冻存液重悬细胞，有不同类型的冻存液，根据细胞类型选择Z合适的冻存液(常用的冻存液成分有)：5-10% DMSO——注意确保DMSO不含有其他的毒性物质；5-15%甘油；如果细胞在无血清培养基内生长，应在50%条件培养基内(细胞在无血清培养基内生长24小时)内冻存和复苏。在冻存管上标记好细胞类型，日期，冻存人等信息，并保证每冻存管不超过1.5ml。放入液氮罐之前记录冻存管的数量和位置。以Z快的速度转移冻存管知液氮罐内，因此，此步骤Z好使用干冰，或者把冻存管浸入装有液氮的小盒内。此外还要注意，在冻存管上没有足够的空间记录细胞的详细信息，做好记录是非常非常重要的！还有一个Z重要的，一定要在异地的液氮罐内保存同样的一份细胞，以免其中的一个液氮罐出现问题！细胞正确的复苏方式和正确的冻存方式同样重要，熟记以下要点：当从液氮罐内取出细胞时，有可能会出现冻存管破裂的情况，使用保护面罩和防护服十分必要；其实，细胞复苏只是一个简单的实验，不过这其中却不可避免有一些需要注意的细节，不然，也不一定会尽如人意。例如说，人身健康方面：一定要记得做好防冻工作，戴上护目镜；尽量降低DMSO对细胞的损伤等等。
大鼠转化生长因子β1(TGF-β1)ELISA试剂盒，英文名：TGF-β1 ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠分化簇抗原109(CD109)ELISA试剂盒，英文名：CD109 ELISA Kit，规格：48T/96T
697细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
Min6细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2传代
Walker256细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞背景资料：晶状体；上皮细胞
大鼠极低密度脂蛋白受体(VLDLR)ELISA试剂盒，英文名：VLDLR ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)ELISA试剂盒，英文名：CK-MB ELISA Kit，规格：48T/96T
人巨噬细胞炎性蛋白2(MIP-2)ELISA试剂盒，英文名：Human MIP-2 ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠β-血小板球蛋白(bTG)ELISA试剂盒，英文名：bTG ELISA Kit，规格：48T/96T
肝浸液培养基/肝汤，英文名：Liver Infusion Broth，用途：用于嗜热芽孢菌的鉴别培养，需添加牛肝粒牛肝粒
酵母浸膏葡萄糖土霉素琼脂培养基基础，英文名：OGYE Agar Base，用途：用于霉菌、酵母菌计数,葡萄糖20g/L,每100ml添加1支土霉素溶液
常见细胞培养中一些问题总结：1)培养基中血清的比例多少合适？血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的含量多少会对细胞的生长会产生极大的影响。血清的含量一般为5%-15%，不要低于5%或高过20%，因为含量过低会导致细胞营养不足，过高则会破坏渗透压平衡。一般建议血清含量为10%，可以适量加减；2)何时须更换培养基？视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上的更换时间，按时更换培养基即可。还可以参照指示剂的颜色变化进行更换；3)购买的复苏细胞，为何会有脱落？因为运输的过程中不可避免的会有震荡，收到后可以离心收集；4)购买的细胞冷冻管经解冻后，为何会发生细胞数目太少之情形？研究人员在冷冻细胞之培养时出现细胞数目太少，大都是因为离心过程操作上的失误，造成细胞的物理性损伤，以及细胞流失。建议细胞解冻后不要立刻离心，应待细胞生长隔夜后再更换培养基即可；5)购买的细胞死亡或细胞存活率不佳可能原因？研究人员在细胞培养时出现存活率不佳，常见原因可归纳为：培养基使用错误或培养基品质不佳。血清使用错误或血清的品质不佳。解冻过程错误。冷冻细胞解冻后，加以洗涤细胞和离心。悬浮细胞误认为死细胞。培养温度使用错误。细胞置于–80°C太久；6)收到的冷冻管瓶身破裂，瓶盖有裂纹，或瓶盖脱落之原因？冷冻管瓶盖裂纹，或瓶身破裂，可能是因为操作者夹取冷冻管时用力不当，造成冷冻管裂损，建议使用止血钳小心夹取。另冷冻管瓶盖松动或松脱，乃因热胀冷缩之物理现象，冷冻管有可能因此而造成细胞污染，故冷冻管于放入和取出液氮桶时，均应立刻将冷冻管再一次扭紧。
ESC-410细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
PMVEC细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
CCRF-CEM细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：淋巴母细胞；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
A549[A-549]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
脑-心浸萃琼脂培养基，英文名：Brain-Heart Extraction Agar Medium，用途：用于粪链球菌验证,也可用于苛养菌的培养
甘露醇发酵培养基，英文名：Mannitol Fermentation Medium，用途：用于甘露醇发酵试验
M-绿色酵母菌和霉菌肉汤，英文名：m-Green Yeast and Mold Broth，用途：用于饮料中酵母菌和霉菌的检测
阿姆斯壮镰刀菌培养基基础，英文名：Armstrong Fusarium Medium Base，用途：用于镰刀菌的培养，每100ml培养基中添加1支阿姆斯壮镰刀菌培养基添加剂
阿须贝氏甘露醇培养基，英文名：Ashby’S Mannitol Medium，用途：用于固氮菌的培养
沙堡琼脂培养基，英文名：Sabouraud’s Agar Medium，用途：用于真菌杀灭试验
马铃薯葡萄糖半固体琼脂，英文名：Potato Dextrose Semisolid Agar，用途：用于椰毒假单胞菌酵米面亚种检验
三糖铁琼脂培养基，英文名：Triple Sugar-Iron-Agar Medium，用途：用于肠杆菌科细菌生化试验
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
人食欲素B/阿立新B(OXB)ELISA试剂盒，英文名：Human OXB ELISA Kit，规格：48T/96T
人血浆抗凝蛋白C(PC)ELISA试剂盒，英文名：Human PC ELISA Kit，规格：48T/96T
抗生素培养基41号，英文名：Medium 41，用途：用于微生物方法测定抗生素效价
RV沙门菌增菌液体培养基/RV沙氏增菌肉汤，英文名：Rappaport Vassiliadis Salmonella Enrichment Broth，用途：用于沙门氏菌选择性增菌
MDA-MB-231细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：消化3-5分钟，1：2,3天内可长满
KATO Ⅲ细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
CTLL-2[CTLL2]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
根瘤菌培养基Ⅱ基础，英文名：Nodule Bacteria Medium Ⅱ Base，用途：用于根瘤菌的保藏和培养
鼠孢菌培养基，英文名：Sporomusa Medium，用途：用于鼠孢菌的培养
10%化钠胰蛋白胨大豆肉汤，英文名：10% Sodium Chloride Tryptone Soy Broth，用途：用于金黄色葡萄球菌的增菌
细胞产品包装：复苏形式：T25培养瓶(一瓶)或冻存形式：1ml冻存管(两支)
盐蛋白胨水培养基，英文名：Nitrate peptone water Medium，用途：用于细菌的盐分解试验
抗生素培养基3号，英文名：Medium 3（Penassay Broth），用途：用于微生物方法测定抗生素效价
CCC-ESF-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCI-H1836[H1836]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞形态特性：详见细胞说明书
MN9D细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCI-H1693细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞；细胞传代方法：1：2-1：3传代,每周换液2次。
HMC-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HCC-366细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HAmEpiC细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
以下对初次培养细胞人员来说，是非常好的开门教程：准备室的设备：单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜(放置未消毒物品)、储品柜(放置消毒过的物品)、包装台；配液室的设备：扭力天平和电子天平(称量药品)、PH计(测量培养用液PH值)、磁力搅拌器(配置溶液室搅拌溶液)；培养室的设备：液氮罐、储品柜(存放杂物)、日光灯和紫外灯、空气净化器系统、低温冰箱(-80℃)、空调、二氧化碳缸瓶、边台(书写实验记录)；必须放在无菌间的设备：离心机(收集细胞)、超净工作台、倒置显微镜、CO2孵箱(孵育培养物)、水浴锅、三氧消毒杀菌机、4℃冰箱(放置serum和培养用液)。无菌室的灭菌：定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等，然后用3‰来苏尔或者新洁尔灭或者0.5％擦拭；CO2孵箱(培养箱)灭菌：先用3‰新洁尔灭擦拭，然后用75％酒精擦拭或者0.5％，再用紫外灯照射；实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-30分钟；实验后灭菌：用75％酒精(3‰新洁尔灭)擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台；实验人员的无菌准备：肥皂洗手、穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋、用75％酒精棉球擦净双手。
NGP细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞生长特性：贴壁
NCI-H146细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长；细胞形态特性：上皮细胞；细胞传代方法：1：2—1：6传代，每周换液2-3次
GNM细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
番茄汁特制琼脂，英文名：Tomato Juice Agar Special，用途：用于唾液和其他标本中乳酸菌等嗜酸微生物的培养
TBB培养基，英文名：Tyrobutyricun Broth Base，用途：用于乳酪产品中梭菌的计数
Amies运送培养基(含活性碳)，英文名：Amies Transport Medium with carbon，用途：用于致病菌标本的采集、运输和保存