mousepodocyte肾小球足细胞系 传代很慢要怎么操作

mousepodocyte肾小球足细胞系 传代很慢要怎么操作
MT2细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
含糖牛肉汤培养基，英文名：Beef soup Medium with Lactose，用途：用于乳酸菌培养和鉴别
药敏试验肉汤，英文名：Sensitivity Disk Broth，用途：用于抗生素药敏试验
尿素琼脂基础(pH7.2)，英文名：Urease Agar Base，用途：用于细菌尿素酶试验,每100ml添加1支40%尿素溶液
细胞复苏相关注意事项：1.取细胞的过程中注意带好防冻手套，护目镜。此项尤为重要，细胞冻存管可能漏入液氮，解冻时冻存管中的气温急剧上升，可导致爆炸。2.冻存液的问题：冻存液的配置已是常识，在这里不作详述，但二甲基亚砜(DMSO )对细胞不是完全，在常温下，二甲基亚砜对细胞的毒副作较大，因此，必须在1-2min内使冻存液完全融化。如果复苏温度太慢，会造成细胞的损伤，二甲基亚砜(DMSO)Z好选择进口产品。3.离心前须加入少量培养液。细胞解冻后二甲基亚砜浓度较高，注意加入少量培养液可稀释其浓度，以减少对细胞的损伤。4.离心问题：目前主要有两种见解。一种是解冻后的细胞悬液直接吹打均匀后分装到培养瓶中进行培养，第二天换液。因为离心的目的是两个，去除DMSO，去除死细胞，这个是标准流程，但对一般人来说，把握不好离心转速和时间，转的不够活细胞沉底的少，细胞就全被扔掉了，转过了活细胞会受压过大，死亡。此外在操作过程中容易污染，所以不推荐。另一种说法为细胞悬液中含有二甲基亚砜(DMSO)，DMSO对细胞有一定的毒副作用，所以须将离心后的液体前倒净，且一定倒干净。我在试验中按照常规的离心分装的方法进行复苏，结果无异常。5.细胞贴壁少的问题：教科书中说明冻存细胞解冻时1ml细胞液要加10ml-15ml培养液，而在我的试验中的经验总结为培养基越少细胞越容易贴附。6.复苏细胞分装的问题：试验中我的经验总结为复苏1管细胞一般可分装到1-2只培养瓶中，分装过多，细胞浓度过低，不利于细胞的贴壁。7.加培养基的量放入问题：这个量的多少的把握主要涉及到的问题DMSO的浓度，从如果你加培养基的太少，那么DMSO的浓度就会比较大，就会影响细胞生长，从以前的资料来看，DMSO的浓度在小于0.5%的时候对一般细胞没有什么影响，还有一个说法是1%。所以如果你的冻存液的浓度是10%DMSO的话那么加10ml以上的培养基就恰好稀释到了无害浓度。
细胞背景资料：详见相关文献介绍
哥伦比亚血琼脂基础，英文名：Columbia Blood Agar Base，用途：广泛用于细菌,尤其是苛养菌的培养,添加无菌脱纤维绵羊全血
DEV乳糖蛋白胨肉汤，英文名：DEV Lactose Peptone Broth，用途：用于大肠杆菌的测定
WL营养肉汤，英文名：Wallerstein Laboratory Nutrient Broth，用途：用于啤酒和发酵产品中酵母菌和细菌的培养
沙氏脑心浸液琼脂基础，英文名：Sabouraud Brain Heart Infusion Agar Base，用途：用于真菌的选择性分离,每100ml培养基中添加1支霉素溶液
HSC-4细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞；细胞传代方法：1 x 10^5 cells/10cm dish
T6-Swiss albino细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HLEB3细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
大鼠足细胞标记蛋白(PCX)ELISA试剂盒，英文名：PCX ELISA Kit，规格：48T/96T
人软骨粘附素(CHAD)ELISA试剂盒，英文名：Human CHAD ELISA Kit，规格：48T/96T
人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF/FGF2)ELISA试剂盒，英文名：Human bFGF/FGF2 ELISA Kit，规格：48T/96T
人β葡萄糖醛酸酶(GUSβ)ELISA试剂盒，英文名：Human GUSβ ELISA Kit，规格：48T/96T
乳糖肉汤培养基，英文名：Lactose Broth，用途：含麝香草蓝,用于大肠菌群的测定
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
HE琼脂培养基，英文名：Hektoen Enteric Agar Medium，用途：用于肠道菌选择性分离(符合药典USP)
培养细胞真的不难，Z关键几点：1)所有的东西使用Z好的，如果你用的血清、培养皿、培养基、胰酶什么的都是进口的，真的很难相信你会把细胞养坏；2)动作要快，胰酶消化，换液什么，细胞暴露在空气中的时间越少越好。另外，要掌握好胰酶消化时间，所谓的细胞状态差，很多时候是传代的原因；3)有时间的话，需要细胞计数，传相应数目的细胞到培养皿中，可以大致清楚细胞的生长曲线，不会临时要处理，手足无措；4)要做什么心里要非常清楚，合理安排时间，传代细胞的实验穿插进行，可以节省很多时间，也不会耽误别人的实验；5)个人的实验器具自己收一套，不要和别人混用，Z近换了什么新的东西稍微记一下，试剂一旦怀疑污染，马上丢；6)传代细胞不能进去太多人，避免相互干扰。每天对待细胞比孝敬爹妈还用心，那真是捧在手里怕碎了，含在嘴里怕化了，看在眼里怕丢了，培养细胞时有哪些经验教训可以分享呢?1)严格无菌操作，多喷喷酒精，要是对灭菌的东西不放心，自己包自己送自己烘干；2)不要和别人共用试剂耗材，自己准备一套；3)有可能的话在拿到新细胞的时候做好支原体衣原体检测；4)水浴锅很脏，生化培养箱要是得手动加湿的话盘里的水也会很脏，勤换(灭菌水加进去)；5)晚上离开的时候Z好给传代细胞照紫外，超净台是用完就开；6)Z好的是同一时间就你一个人在用传代细胞在养细胞。
QBC-939细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
Ranca细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
SW-13细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2传代
COR-L88细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2传代
BeWo细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：3传代，3-4天换液一次
CaPan-Ⅱ/Capan-2细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
【冻存细胞操作】1)选对数增生期细胞(证明无支原体污染)，在冻存前1d换液；2)按常规方法把培养细胞制备成悬液，计数，使细胞密度达5×10(7)/ml左右密度，离心，去上清；3)加入配制好的冻存液(培养液6.8ml，小牛血清2ml，DMSO 1ml，5.6%NaHCO3 0.1ml)，按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中，然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。冻存细胞时培养液中加入保护剂10％二甲基亚砜(DMSO) 或甘油，可使冰点降低，使细胞内水分在冻结前透出细胞外；4)分装于无菌冻存管中，每管加1.5m悬液；5)旋好冻存管并仔细检查，一定要盖紧，做好标记；6)冻存：在特殊的仪器或简易的液氮容器中，按-1℃/min的速度，在30～40min时间内，下降到液氮表面，再停30min后，直接投入液氮中。要适当掌握下降冷冻速度，过快能影响细胞内水分透出，太慢则促进冰晶形成。操作时应戴防护眼镜和手套，以免液氮冻伤。【复苏细胞操作】1)从罐中取出冻存管；2)迅速放入36℃～37℃水浴，不时摇动，使其急速融化，30～60s内完成；3)冻存管用70％酒精擦拭消毒后，打开盖子，用吸管将细胞悬液注入离心管中，再滴加10ml培养液；4)低速离心(500～1000r/min) 5min，去上清后再用培养液洗一次；5)用培养液适当稀释后，装入培养瓶37℃培养，次日更换一次培养液后，继续培养。以后仍按常规进行培养。冻存细胞数量要充分，密度应达到10(7)/ml，在融后稀释20倍时，仍能保持5×10(5)/ml数量。
细胞传代方法：1：2传代
AM-38细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞；细胞传代方法：1：2传代
SV-HUC-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长　；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2传代
HO-8910PM细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：消化3-5分钟。1：2。3天内可长满。
RASMCs细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
MEE肉汤，英文名：MEE Broth，用途：用于肠道菌选择性增菌
蛋白胨水培养基，英文名：Peptone Water Medium，用途：用于细菌靛基质试验
Dubos油酸琼脂基础，英文名：Dubos Oleic Agar Base，用途：用于肺结核杆菌的分离培养,每90ml添加5支Dubos油酸琼脂基础添加剂和1-2支青霉素溶液
联合固氮菌培养基，英文名：Endophytic Diazotrophs Medium，用途：用于固氮螺菌的培养
尿素琼脂基础(pH7.2)，英文名：Urease Agar Base，用途：用于细菌尿素酶试验,每100ml添加1支40%尿素溶液
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
COLO 829细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：成纤维细胞；细胞传代方法：1：3-1：6传代，2-3天换液1次。
MHCC97-L细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：2传代
BALL-1细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长；细胞形态特性：淋巴母细胞；细胞传代方法：1：2传代
LB琼脂(Miller)，英文名：LB Agar,Miller，用途：用于分子生物学中大肠杆菌的培养
酵母粉琼脂，英文名：Yeast Extract Agar，用途：用于水中细菌总数的测定
乙醇酸盐肉汤，英文名：Thioglycollate Broth（Enriched），用途：不含指示剂，用于厌氧菌、需氧菌和微需氧菌的培养，每100ml添加化血红素溶液、维生素K1溶液各1支
细胞产品包装：复苏形式：T25培养瓶(一瓶)或冻存形式：1ml冻存管(两支)
结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂(VRBDA)，英文名：Violet Red Bile Dextrose Agar，用途：肠道菌计数琼脂,不含乳糖,用于肠道菌分离和计数
大鼠抗凝血酶受体(ATR)ELISA试剂盒，英文名：ATR ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠促血管生成素 1(ANG1)ELISA试剂盒，英文名：Mouse ANG1 ELISA Kit，规格：48T/96T
鼠孢菌培养基，英文名：Sporomusa Medium，用途：用于鼠孢菌的培养
细胞生长特性：悬浮生长
细胞形态特性：详见细胞说明书
pH7.2盐缓冲液，英文名：pH7.2 PBS Broth，用途：用于样品的稀释
CPA 47细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
MA104细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
mESCs-11细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
人激肽释放酶7(KLK7)ELISA试剂盒，英文名：Human KLK7 ELISA Kit，规格：48T/96T
人登革热(DF)抗体(IgG)ELISA试剂盒，英文名：Human IgG ELISA Kit，规格：48T/96T