PT-67小鼠逆转录病毒包装细胞系 传代很慢要怎么操作

PT-67小鼠逆转录病毒包装细胞系 传代很慢要怎么操作
CFSC-8B细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
胰蛋白示盐肉汤，英文名：Tryptose Phosphate Broth，用途：用于苛养菌的培养
T1N1琼脂，英文名：T1N1 Agar，用途：用于霍乱弧菌的纯化
结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂(VRBGA)，英文名：Violet-Red Bile Agar with Glucose and Lactose，用途：含乳糖、葡萄糖。用于阪崎肠杆菌的分离
细胞冻存复苏材料与方法步骤：常用的细胞冷冻贮存器为液氮贮存器，规格有35L和50L两种。使用时要注意以下几点：(1)一般两周需充液氮一次，至少一个月充氮一次。液氮温度达-196℃，使用时注意勿让液氮溅到皮肤上，以免引起冻伤。(2)液氮容器为双层结构，中间为真空层，瓶口有双层焊接处，应防止焊接部裂开。(3)在装入液氮时，要注意缓慢小心，并用厚纸卷筒或特制漏斗作引导，使液氮直达瓶底，如有专用液氮灌注装置则更好。若为初次使用，加液氮时更要缓慢，以免温度骤降而使容器损坏。细胞冻存时常备的材料有：0.25%胰蛋白酶，含10%～20%的血清培养液，DMSO(分析纯)或无色新鲜甘油(121°C蒸气高压消毒)，2mL安瓿(或专用细胞冻存管)、吸管、离心管、喷灯、纱布袋(或冻存管架)等。主要操作步骤为：(1)选择处于对数生长期的细胞，在冻存前一天Z好换液。将多个培养瓶中的细胞培养 液去掉，用0.25%胰蛋白酶消化。适时去掉胰蛋白酶，加入少量新培养液。用吸管吸取培养液反复吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液。悬浮生产细胞则不要消化处理。然后将细胞收集于离心管中离心(1000r/min，10分钟)。(2)去上清液，加入含20%小牛血清的完全培养基，于4℃预冷15分钟后，逐滴加入已无菌的DMSO或甘油，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，细胞浓度为3×106～1×107/mL之间。(3)将上述细胞分装于安瓿或专用冷冻塑料管中，安瓿装1～1.5mL在火焰喷灯上封口，封口处要完全封闭，圆滑无勾。冷冻管要将盖子盖紧，并标记好细胞名称和冻存日期，同时作好登记(日期、细胞种类及代次、冻存支数)。(4)将装好细胞的安瓿或冻存管装入沙布袋内;置于液氮容器颈口处存放过夜，次日转入液氮中。采用控制降温速度的方法也可采用下列步骤：先将安瓿置入4℃冰箱中2～3小时，再移至冰箱冷冻室内3～4小时，再吊入液氮容器颈气态部分存放2小时，沉入液氮中。细胞冻存在液氮中可以长期保存，但为妥善起见，冻存半年后，Z好取出一只安瓿细胞复苏培养，观察生长情况，然后再继续冻存。
细胞背景资料：详见相关文献介绍
志贺氏菌增菌肉汤基础，英文名：Shigella Broth Base，用途：用于志贺氏菌选择性增菌,每225ml中添加1支新生霉素溶液
脑-心浸萃液态培养基，英文名：Brain-Heart Extraction Liquid Medium，用途：用于粪链球菌验证,也可用于苛养菌的培养
BCYE琼脂基础(BCYE鉴别琼脂基础)，英文名：Buffered Charcoal Yeast Extract Agar Base，用途：用于军团菌选择性分离
动力-盐培养基(B法)基础，英文名：Power-nitrate Medium，用途：用于细菌动力和盐还原试验,每100ml添加1ml甘油
H1648细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HCC2157细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：每周换液2—3次
NCI-H1155细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长；细胞形态特性：上皮细胞；细胞传代方法：每周换液2-3次。
人微管蛋白ε(TUBε)ELISA试剂盒，英文名：Human TUBε ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠可溶性晚期糖基化终末产物受体(SRAGE)ELISA试剂盒，英文名：Mouse SRAGE ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠β淀粉样蛋白(Aβ)ELISA试剂盒，英文名：Aβ ELISA Kit，规格：48T/96T
人抗甲状腺微粒体抗体(ATMA/TMAB)ELISA试剂盒，英文名：Human ATMA/TMAB ELISA Kit，规格：48T/96T
MS微量元素，英文名：Murashige & Skoog Micronutrients，用途：用于植物组织培养
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
酵母氮源基础、无基酸，英文名：Yeast Nitrogen Base，without Amino Acid，用途：用于通过碳源和基酸的利用对酵母菌进行分类
为什么培养的细胞要及时传代？体外培养的细胞大多具有生长接触YZ的特性，也就是说当一个细胞被其他细胞包围的时候，它就会停止生长，及时传代后，细胞的生长得以继续。培养细胞生长减慢的原因在哪些?其解决办法有哪些？可能的原因有：更换了不同的培养液或血清；培养液中一些细胞生长必需成分如谷眈肢或生长因子等耗尽或缺乏或己被破坏；培养物中有少量细菌或真菌污染；试剂保存不当；比较新培养液与原培养液成分，比较新血清与旧血清等，找出其它可能的原因。解决办法：增加起始培养细胞浓度；让细胞逐渐适应新培养液；换入新鲜配制培养液；补加谷酷肢或生长因子等；用无抗生素培养液培养，如发现污染，去弃培养物，或用抗生素CJ；血清需保存在5℃到20℃; 培养液需在2-8℃避光保存;含血清完全培养液在2-8℃保存，并在2周内用完;分离培养物，检测支原体。冷冻管应如何解冻？取出冷冻管后，须立即放入37℃水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1-2分钟内大部分融化，特别注意，需残留一小块冰块，就可拿到超净工作台操作细胞，用75%酒精消毒冻存管，用新鲜培养基将细胞转移至培养瓶。另外冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管爆裂。
MES-13细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
U937[U-937/U937-DC-SIGN]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
STC-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
MDA-MB-468细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：2-1：4传代；2-3天换液1次
SW1116细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞；细胞传代方法：消化3-5分钟。1：2。3天内可长满。
HBVP细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
传代培养及其操作步骤：原代细胞培养成功以后，需要进行分离培养，否则细胞会因生存空间不足或密度过大，营养障碍，影响细胞生长。细胞由原培养瓶内分离稀释后传到新的培养瓶中培养的过程称之为传代培养。传代细胞允许培养的细胞扩增(形成细胞株)，可以进行细胞克隆，易于保存，但可能丧失一些特殊的细胞和分化特征。传代细胞形成细胞株的利处在于提供了大量持久的实验材料，便于实验。传代细胞培养操作步骤：1)吸掉或倒掉培养瓶内旧培养液；2)向瓶内加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆盖培养瓶底为宜；3)置37℃孵箱或室温(25℃温度)下进行消化，2-5min后把培养瓶放在倒置显微镜下进行观察，当发现胞质回缩、细胞间隙增大后，应立即中止消化；4)吸出消化液，向瓶内加入Hanks液少量，轻轻转动培养瓶，把残留消化液冲掉，然后再加培养液。如果仅使用胰蛋白酶消化，在吸除胰蛋白液后，可直接加入少量含血清的培养液，终止消化；5)使用弯头吸管，吸取瓶内培养液，按顺序反复轻轻吹打瓶壁细胞，使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。吹打时动作要轻柔，以防用力过猛损伤细胞；6)用计数板计数后，分别接种于新的培养瓶中，置CO2培养箱中进行培养；7)细胞培养换液时间应根据细胞生长的状态和实验要求来确定。一般2-3d后应换一次生长液。待细胞铺满器皿底面，即可使用；也可继续传代扩大培养或换成维持液。
细胞传代方法：1：2传代
LN-18细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞；细胞传代方法：1：4-1：6传代；每周换液2-3次
ZR-75-30细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：上皮细胞样；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NG108-15 [108CC15]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：成纤维细胞样　；细胞传代方法：1：6-1：10传代，每周换液2-3次
CTX TNA2细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
精酸葡萄糖斜面琼脂(AGS)，英文名：Arginine Glucose Slant Agar，用途：用于霍乱弧菌的复合生化试验
麦康凯肉汤，英文名：MacConkey Broth，用途：用于肠道菌选择性增菌
酵母基酸缺陷型合成液体培养基(尿嘧啶/亮酸/色酸缺陷)，英文名：Yeast Synthetic Drop-out Fluid Medium，用途：用于酵母杂交及遗传突变株的筛选和研究
NWRI琼脂/HPCA培养基，英文名：NWRI Agar/HPC Agar，用途：用于水中异养微生物的计数
AC肉汤，英文名：AC Broth，用途：用于常见微生物的培养和不含防腐剂的样品的检测
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
NCI-H774细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：每周换液2次。
H3255细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
Colon26细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
乙基紫叠氮钠肉汤，英文名：Ethyl Violet Azide Broth，用途：用于链球菌的增菌培养
m-TGE肉汤，英文名：m-TGE Broth，用途：用于滤膜法测定奶制品中的菌落总数
White培养基，英文名：White Medium，用途：用于植物组织培养，适合于根的培养
细胞产品包装：复苏形式：T25培养瓶(一瓶)或冻存形式：1ml冻存管(两支)
肉浸液肉汤，英文名：Meat Infusion Broth，用途：用于蜡样芽胞杆菌的纯培养
人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)ELISA试剂盒，英文名：Human TRAIL ELISA Kit，规格：48T/96T
人精酸酶(ARG2)ELISA试剂盒，英文名：Human ARG2 ELISA Kit，规格：48T/96T
酵母基酸缺陷型合成液体培养基(赖酸缺陷)，英文名：Yeast Synthetic Drop-out Fluid Medium withoutLysin，用途：用于酵母杂交及遗传突变株的筛选和研究
细胞生长特性：贴壁生长
细胞形态特性：详见细胞说明书
桔汁肉汤(10倍浓缩)，英文名：Orange Serum Broth Concentrate 10×，用途：用于耐酸细菌的培养
95D细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
MPC-83细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HO-8910细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：消化3-5分钟。1：2。3天内可长满。
大鼠G蛋白β1(GNb1)ELISA试剂盒，英文名：GNb1 ELISA Kit，规格：48T/96T
人25羟基维生素D(25OHVD)ELISA试剂盒，英文名：Human 25OHVD ELISA Kit，规格：48T/96T