Tsu-Pr1人非雄激素依赖型前列腺癌细胞系 传代很慢要怎么操作

Tsu-Pr1人非雄激素依赖型前列腺癌细胞系 传代很慢要怎么操作
MPC-11细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2传代
缓冲MUG琼脂(BMA)，英文名：Buffered MUG Agar，用途：用于滤膜法测定大肠杆菌
MRS培养基(改良MRS培养基基础)，英文名：MRS Medium(Modified MRS Medium Base)，用途：用于乳酸菌计数,改良MRS培养基每100ml需添加1支莫匹罗星锂盐储备液
Fraser肉汤增菌液基础，英文名：Fraser Enrichment Broth Base，用途：用于李斯特氏菌增菌
贴壁细胞的消化方法介绍：1、胰酶。这是用得Z多的。一般浓度在0.25-0.5%。作用时间根据细胞种类、作用温度等因素而变化很大，从几分钟到几十分钟不等。0.25%的胰酶作用于单层贴壁的细胞，在37度条件下，一般消化1-5分钟就足够了。终止是用血清。主要作用于细胞间。配制时不能用含、镁的平衡液，否则影响活性。保存于-20度。2、胶原酶。这种方法比较少，一般是用原代培养时，从组织消化下细胞。这种方法作用温和，对细胞损伤较小，但是，价格也较贵。中止同样是用血清。3、EDTA。用得也是非常多。一般浓度在0.02%左右。作用于细胞与间质，对细胞间也有一定作用。注意，它能显著影响pH值，而且在弱碱性条件下才易溶。因此，配制时应调节好酸碱度。它不能被终和。因此，消化下来的细胞要洗一遍。4、商品化的无酶消化液。个人的使用经常觉得对细胞的损伤比较大，但是分离成单细胞悬液的能力确实比较强。5、物理法。直接吹打或用细胞刮子将细胞刮下来。6、冷冻法。此方法仅能用于细胞传代时。无法使组织上的细胞脱落下来。本方法的原理，我想是因细胞冷冻后收缩，从而从培养瓶上脱落下来。优点是：对细胞损伤小，不需要中止或洗细胞，方便，不需要另外配制消化液。特别适用那些贴壁不是特别紧，又特别娇气的细胞。不足是细胞常成小片脱落。此种方法曾用于因用其它方法传代导致大量细胞死亡操作的间充质干细胞、DC细胞的培养，效果非常满意。具体过程是：1、用较多的4度的PBS 洗涤一遍细胞(以6孔板为例，加1.5ml/孔)，2、再加0.5毫升4度的PBS，静置操作台上，很快细胞就小片脱落，3、轻轻吹打，细胞即完全脱落，4、按一定比例传代。
细胞背景资料：详见相关文献介绍
双抗巧克力琼脂基础，英文名：Bi-Anti Chocolate Agar Base，用途：用于嗜血杆菌和奈瑟菌的培养,每100ml添加1支双抗巧克力琼脂添加剂和5%无菌脱纤维绵羊全血
缓冲蛋白胨水(BPW)，英文名：Buffered Peptone Water，用途：用于沙门氏菌、阪崎杆菌的增菌(日本标准）
DNA酶试验琼脂，英文名：Dnase Test Agar，用途：用于核糖核酸酶检测,含0.2%DNA
抗生素培养基C(PH8.0)，英文名：Medium C（PH8.0），用途：用于抗生素检测
F81细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCI-H1648[H1648]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
H2.35细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
小鼠DNA甲基转移酶3B(DNMT3B)ELISA试剂盒，英文名：Mouse DNMT3B ELISA Kit，规格：48T/96T
人丝酸蛋白酶2(PRSS2)ELISA试剂盒，英文名：Human PRSS2 ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠核糖核苷酸酶H(RNASEH)ELISA试剂盒，英文名：Mouse RNASEH ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠黄体生成素释放激素(LHRH)ELISA试剂盒，英文名：LHRH ELISA Kit，规格：48T/96T
葡萄糖半固体琼脂，英文名：Dextrose Semisolid Agar，用途：用于葡萄糖利用(产酸、产气)实验
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
化钠营养琼脂，英文名：NaCl Nutrient Agar，用途：用于副溶血性弧菌的纯化
造成实验室细胞污染常见情况总结：细胞培养中Z常见污染的是细菌、真菌和支原体污染。细胞一旦污染，大多数较难处理。那么，哪些情况我们不注意的话就会造成细胞污染呢？我们根据常见细胞培养实验分析总结下。【违规操作】1)为节省时间，有人已经用超净台四个多小时，不开紫外灭菌30min,酒精擦拭后直接开始试验；2)器材或者溶液很久没用，未检测是否污染而直接使用；离心管多次使用，枪头为了方便交叉使用；3)超净台不点酒精灯；点了酒精灯放在右上角，而你在左下角做试验；4)不带手套，徒手操作；5)细胞培养间配备枪式移液器、手术器械、离心机、冰箱等专用仪器设备以及专用的实验服和拖鞋，未定期消毒。专用物品被带出传代细胞使用。培养细胞过程中使用的所有实验用具，如移液管、一次性枪头、一次性塑料离心管、冻存管等未按要求灭菌使用(通常需121°C高压灭菌20分钟后37％烤干备用)。超净台和桌面，东西太多太乱：超净台不是储物箱，什么培养皿、各种规格的板子、枪头就不要堆在超净台！这样就会有许多紫外线顾不到的卫生死角。传代细胞其他的桌面，切忌东西堆积如山，不要将酒精棉球、标签纸、牛皮纸买来后全部堆在传代细胞！一不小心“飘”进你的细胞培养板里，细胞就会养的不好，啥时候死了都不知道！【培养箱太久没清洁】细胞污染了，并非直接扔了培养皿就不管了，首先你还得看看这个恒温培养箱里其他培养皿或孔板里的细胞是否污染，如果有而且好几个板子都有类似的污染块，那很可能是培养箱中的水或者空气污染了，得给培养箱做个大扫除，重新酒精消毒，照紫外；孵箱里的水，水没了要记得加，还得记得十天半个月的就用酒精擦擦托盘。【传代细胞人多口杂，难管理】在传代细胞这种卫生要求高，人多了，不确定因素多了，难以保证试验在无菌条件下操作。出入试验室，实验服当风衣穿，不扣纽扣，不戴，就容易造成细胞污染；超净台做实验时，喜欢说话聊着做试验，要是还不带口罩，里面就有很多细菌等着去攻击你的细胞呢！
HASMC细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
Z138细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCI-H2081细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长；细胞形态特性：聚团悬浮；细胞传代方法：随细胞的密度而增加
SK-LU-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞样；细胞传代方法：1：2传代；每周换液2次。
NG108-15 [108CC15]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：成纤维细胞样　；细胞传代方法：1：6-1：10传代，每周换液2-3次
MDA-PCA-2B细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
传代培养及其操作步骤：原代细胞培养成功以后，需要进行分离培养，否则细胞会因生存空间不足或密度过大，营养障碍，影响细胞生长。细胞由原培养瓶内分离稀释后传到新的培养瓶中培养的过程称之为传代培养。传代细胞允许培养的细胞扩增(形成细胞株)，可以进行细胞克隆，易于保存，但可能丧失一些特殊的细胞和分化特征。传代细胞形成细胞株的利处在于提供了大量持久的实验材料，便于实验。传代细胞培养操作步骤：1)吸掉或倒掉培养瓶内旧培养液；2)向瓶内加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆盖培养瓶底为宜；3)置37℃孵箱或室温(25℃温度)下进行消化，2-5min后把培养瓶放在倒置显微镜下进行观察，当发现胞质回缩、细胞间隙增大后，应立即中止消化；4)吸出消化液，向瓶内加入Hanks液少量，轻轻转动培养瓶，把残留消化液冲掉，然后再加培养液。如果仅使用胰蛋白酶消化，在吸除胰蛋白液后，可直接加入少量含血清的培养液，终止消化；5)使用弯头吸管，吸取瓶内培养液，按顺序反复轻轻吹打瓶壁细胞，使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。吹打时动作要轻柔，以防用力过猛损伤细胞；6)用计数板计数后，分别接种于新的培养瓶中，置CO2培养箱中进行培养；7)细胞培养换液时间应根据细胞生长的状态和实验要求来确定。一般2-3d后应换一次生长液。待细胞铺满器皿底面，即可使用；也可继续传代扩大培养或换成维持液。
细胞传代方法：1：2传代
NCI-H498细胞专业复苏；细胞生长特性：半贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
PLA-802细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2传代
HUASMC细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
Hs68细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
解脲支原体琼脂基础，英文名：Ureaplasma urealyticum Agar Base，用途：用于解脲支原体培养,需添加尿素、小牛血清及YJ剂
TGY肉汤培养基，英文名：Tryptone Glucose Yeast Broth Medium，用途：用于芽孢菌的培养
马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)(日本标准用)，英文名：Potato dextrose agar，用途：用于霉菌和酵母菌计数
3%NaCl精酸双水解酶试验培养基，英文名：Double-arginine Hydrolase Test Medium with 3%NaCl，用途：用于弧菌的精酸双水解酶试验
巴尔斯氏培养基基础，英文名：Baar,s Medium for Sulfate Reducers，用途：用于脱肠球菌等盐还原细菌的培养，每100ml添加1支35%乳酸钠溶液
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
NCI-H748[H748]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
LLC-PK1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
MPP 89细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
BL琼脂基础，英文名：BL Agar Base，用途：用于双歧杆菌的分离和培养,需添加5%脱纤维马血
脑心浸出液肉汤(BHI/BHIB)，英文名：Brain Heart Infusion Broth，用途：用于细菌尤其是葡萄球菌的增菌和培养（SN/ISO）
亚铁琼脂，英文名：Ferrous sulfate Agar，用途：用于细菌试验
细胞产品包装：复苏形式：T25培养瓶(一瓶)或冻存形式：1ml冻存管(两支)
吡嗪酰胺酶检测酪蛋白大豆琼脂，英文名：Casein Digest Soybean Agar for Pzase Test，用途：用于吡嗪酰胺酶检测，溶解于Tris-马来酸缓冲液(0.2mol/L,pH6)中
大鼠B细胞淋巴瘤因子3(Bcl3)ELISA试剂盒，英文名：Bcl3 ELISA Kit，规格：48T/96T
人p21蛋白激活激酶4(PAK4)ELISA试剂盒，英文名：Human PAK4 ELISA Kit，规格：48T/96T
兔血浆纤维蛋白原(RPF)琼脂培养基基础，英文名：RPF Agar Medium Base，用途：用于凝固酶阳性葡萄球菌检测,需添加兔血浆和YJ剂
细胞生长特性：贴壁生长
细胞形态特性：上皮细胞样
Andrade氏糖类肉汤基础，英文名：Andrade′s Carbohydrate Broth Base，用途：用于细菌的糖发酵试验,需加糖
NCI-H596细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：4-1：8传代；每周换液2-3次。
ABC-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞样；细胞传代方法：每周换液2次。
SW 1990细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；多角形；细胞传代方法：1：2传代；3天传代一次。
人结合蛋白3(CALB3)ELISA试剂盒，英文名：Human CALB3 ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠可溶性CD8(sCd8)ELISA试剂盒，英文名：Mouse sCd8 ELISA Kit，规格：48T/96T