Pfeiffer人弥漫性大细胞淋巴瘤B淋巴细胞系 传代很慢要怎么操作

Pfeiffer人弥漫性大细胞淋巴瘤B淋巴细胞系 传代很慢要怎么操作
Kit225细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂(VRBDA)，英文名：Violet Red Bile Dextrose Agar，用途：肠道菌计数琼脂,不含乳糖,用于肠道菌分离和计数
肠道菌增菌液体培养基(肠道菌增菌肉汤/EE肉汤)，英文名：Enterobacteria Enrichment Broth Mossel，用途：用于肠道菌的增菌培养
Mueller-Hinton琼脂/MH琼脂，英文名：Mueller-Hinton Agar，用途：用于细菌药敏试验
细胞复苏后贴壁细胞较少的问题分析：总结1：复苏过程没有问题，是否是从液氮拿出直接放入温水，还有培养箱，二氧化碳浓度，培养基、PH值等环节。要么加高浓度FBS 15-20%，看看能否帮助贴壁，当然也需要考虑血清问题，还有确信拿来的细胞没问题。总结2：首先应该怀疑冻存，实际上复苏出问题的可能非常小，因为操作简单，而且死板。1、你冻存的时候是不是消化的时间过长，这是一般人所注意不到的，即使书上也不讲这个问题，太长的消化时间会让细胞复苏时失去贴壁能力，表现为先贴后死，原因是在你复苏的时候细胞已进入凋亡程序，不可逆转的死亡。2、你的冻存液好不好，是什么，甘油还是DMSO，质量非常重要，否则也会死亡。3、你的冻存液的量加的是不是太多，ATCC推荐是不超过7%，大于5%，太多也不好。4、你在冻存的时候是不是把DMSO混均匀，这个有一些影响，但不算太大。5、你的冻存是否按部就班，就是所温度梯度是不是把握严格，很多人容易忘却这个事情，因为这个东西流程长。6、如果你细胞污染，你是否能很快看到，我比我的导师能早一天看到污染。从这个角度讲建议去除离心这步。7、你的细胞在冻存前是否过密。还有，不赞成孵箱污染这个概念的，所有在一个孵箱里的细胞都污染一个细菌的话，这个细菌是源于孵箱的，但这不代表孵箱污染，因为孵箱无论你如何处理都有大量的细菌，问题在操作。每次污染的原因都要尽可能的找，以后就不犯同样的问题，这个很重要，不能靠猜，否则你就有可能细胞养绝换课题，这个见得太多了，别不当会事。
细胞背景资料：详见相关文献介绍
改良GC肉汤基础，英文名：Modified Giolitti-Cantoni Broth Base，用途：用于葡萄球菌MPN计数,需添加0.1ml1%亚碲酸钾溶液(1%亚碲酸钾溶液)
Nitsch&Nitsch培养基，英文名：Nitsch&Nitsch Medium，用途：Nitsch & Nitsch (1969) 含蔗糖不含琼脂
无盐麦康凯琼脂，英文名：MacConkey Agar Without Salt，用途：用于尿液中变形杆菌和大肠埃希氏菌的分离
改良MSRV肉汤培养基基础(MSRV肉汤培养基基础)，英文名：Rappaport-Vassiliadis Broth Medium, Modification，用途：用于沙门氏菌选择性分离,每100ml需添加2mg新生霉素
HCCC9810细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HumanWRO细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：3传代，2-3天换液一次
MDA-PCA-2B细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
小鼠β-半乳糖苷酶(GLb)ELISA试剂盒，英文名：Mouse GLb ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠重肽铁蛋白(FTH)ELISA试剂盒，英文名：Mouse FTH ELISA Kit，规格：48T/96T
人连接蛋白3(JPH3)ELISA试剂盒，英文名：Human JPH3 ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠血小板衍生生长因子受体样蛋白(PDGFRL)ELISA试剂盒，英文名：Mouse PDGFRL ELISA Kit，规格：48T/96T
改良高氏合成一号琼脂培养基，英文名：Gauze’s Synthetic Agar Medium,Modified，用途：用于放线菌的培养
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
SCDLP液体培养基基础，英文名：Soya Casein Digest Lecithin Polysorbate Broth Base，用途：用于样品的增菌,每升培养基添加1支吐温80
细胞培养实验中常见问题总结：1)一般客户拿到细胞后，应该注意什么？客户收到细胞后先不开盖，放在培养箱静置若干小时后(看细胞密度而定)在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照(建议受收细胞后观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各一张)，排除细胞本身污染的情况；收到细胞未开封，出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。收到细胞时如无异常情况，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养液吸出，留下10ml培养液继续培养；超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞，吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。细胞消化液建议使用PBS配制，慎用Hanks液配制；2)快递细胞多久能到，是寄冻存的细胞还是复苏好的细胞？我们采用快递发货，一般外地2--3天，寄细胞前请确认当地温度，如果气温低于4度的，则采用邮寄冻存细胞；3)可否使用与原先培养条件不同之培养基？不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活；4)可否使用与原先培养条件不同之血清种类？不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。
HuO9细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
N1E-115细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
MCF-7B细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
EB-3细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长；细胞形态特性：淋巴母细胞样；细胞传代方法：1：2-1：4传代，每周2-3次。
A-72细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
FHC细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
传代培养及其操作步骤：原代细胞培养成功以后，需要进行分离培养，否则细胞会因生存空间不足或密度过大，营养障碍，影响细胞生长。细胞由原培养瓶内分离稀释后传到新的培养瓶中培养的过程称之为传代培养。传代细胞允许培养的细胞扩增(形成细胞株)，可以进行细胞克隆，易于保存，但可能丧失一些特殊的细胞和分化特征。传代细胞形成细胞株的利处在于提供了大量持久的实验材料，便于实验。传代细胞培养操作步骤：1)吸掉或倒掉培养瓶内旧培养液；2)向瓶内加入胰蛋白酶液和EDTA混合液少量。以能覆盖培养瓶底为宜；3)置37℃孵箱或室温(25℃温度)下进行消化，2-5min后把培养瓶放在倒置显微镜下进行观察，当发现胞质回缩、细胞间隙增大后，应立即中止消化；4)吸出消化液，向瓶内加入Hanks液少量，轻轻转动培养瓶，把残留消化液冲掉，然后再加培养液。如果仅使用胰蛋白酶消化，在吸除胰蛋白液后，可直接加入少量含血清的培养液，终止消化；5)使用弯头吸管，吸取瓶内培养液，按顺序反复轻轻吹打瓶壁细胞，使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。吹打时动作要轻柔，以防用力过猛损伤细胞；6)用计数板计数后，分别接种于新的培养瓶中，置CO2培养箱中进行培养；7)细胞培养换液时间应根据细胞生长的状态和实验要求来确定。一般2-3d后应换一次生长液。待细胞铺满器皿底面，即可使用；也可继续传代扩大培养或换成维持液。
细胞传代方法：1：2传代
HSC-2细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HUTU-80细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：上皮细胞样；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
184A1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCI-H2405细胞专业复苏；细胞生长特性：混合生长；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：5-1：8传代
DTM培养基基础，英文名：Dermatophyte Test Medium Base，用途：用于皮肤真菌的培养
菌种培养基，英文名：Strain Medium，用途：用于菌种培养与保存(pH6.5)
改良胰蛋白胨大豆肉汤(mTSB)/(mTSB+N基础)，英文名：mTSB Broth with Novobiocin Base，用途：用于O157菌选择性增菌,每225ml中添加1支新生霉素储备液组成含新生霉素的改良胰蛋白胨大豆肉汤(mTSB+N)
麦康凯(MAC)琼脂，英文名：MacConey Agar，用途：含结晶紫，3号胆盐,用于肠道菌的选择性分离
Slantz and Bartley 培养基，英文名：Slantz and Bartley medium，用途：用于肠球菌、粪链球菌的分离和培养
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
NE-4C细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
LTPA细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：2传代
PC-12(低分化)细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：多角形；细胞传代方法：消化3-5分钟。1：2。3天内可长满。
LB琼脂(Lennox)，英文名：LB Agar,Lennox，用途：用于分子生物学中大肠杆菌的培养
马铃薯葡萄糖半固体琼脂，英文名：Potato Dextrose Semisolid Agar，用途：用于椰毒假单胞菌酵米面亚种检验
维生素B12测定用培养基，英文名：Vitamin B12 Assay Broth，用途：用于维生素B12的测定
细胞产品包装：复苏形式：T25培养瓶(一瓶)或冻存形式：1ml冻存管(两支)
M9CA肉汤，英文名：M9CA Broth，用途：用于培养重组大肠杆菌菌株
小鼠视网膜母细胞瘤YZ蛋白(PRB)ELISA试剂盒，英文名：Mouse PRB ELISA Kit，规格：48T/96T
人白介素9(IL-9)ELISA试剂盒，英文名：Human IL-9 ELISA Kit，规格：48T/96T
PYG液体培养基基础，英文名：PYG Broth Medium Base，用途：用于双歧杆菌乙酸和乳酸代谢物测定,每20ml培养基中添加1支化血红素溶液和2支化血红素溶液
细胞生长特性：悬浮生长
细胞形态特性：淋巴母细胞样
T1N1琼脂，英文名：T1N1 Agar，用途：用于霍乱弧菌的纯化
BT-483细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞样；细胞传代方法：1：2传代，2—3天换液一次
VERO细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：2传代
GEO细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
大鼠B细胞活化因子(BAFF)ELISA试剂盒，英文名：BAFF ELISA Kit，规格：48T/96T
人可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)ELISA试剂盒，英文名：Human sICAM-1 ELISA Kit，规格：48T/96T