22(H22)小鼠肝癌细胞系 消化操作需要注意什么

22(H22)小鼠肝癌细胞系 消化操作需要注意什么
酵母基酸缺陷型合成液体培养基(亮酸缺陷)，英文名：Yeast Synthetic Drop-out Fluid Medium without Leuc，用途：用于酵母杂交及遗传突变株的筛选和研究
PW(蛋白胨水)，英文名：Peptone Water，用途：用于样品制备
DTA培养基，英文名：DTA Medium，用途：用于乳与乳制品中嗜热需氧芽孢数的测定
人脂肪酸去饱和酶3(FADS3)ELISA试剂盒，英文名：Human FADS3 ELISA Kit，规格：48T/96T
人突触回蛋白1(SYNGR1)ELISA试剂盒，英文名：Human SYNGR1 ELISA Kit，规格：48T/96T
沙堡液体培养基，英文名：Sabouraud’s Broth Medium，用途：用于真菌杀灭试验
细胞背景资料：详见相关文献介绍
酵母基酸缺陷型合成琼脂培养基(色酸缺陷)，英文名：Yeast Synthetic Drop-out Agar Medium without Trypt，用途：用于酵母杂交及遗传突变株的筛选和研究
小鼠血管内皮生长因子受体2(KDR)ELISA试剂盒，英文名：Mouse KDR ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠多巴胺转运体(DAT)ELISA试剂盒，英文名：Mouse DAT ELISA Kit，规格：48T/96T
Z近在培养细胞时，发现其状态不是很好，很容易扎堆生长，用胰酶消化的时候也是一团一团地被消化下来，很难把它们吹散成一个一个细胞。而且长得也挺快也挺不均匀的，传代的第二天，有些地方就长得满满的了。想请教一下这是为什么呢？你好，我养的细胞和你一样，消化下来也是一团的，但吹打以后就没有这样的情况了。建议你分皿前还是要吹匀，分皿后在镜下看一看，移动培养皿的时候尽量动作轻，避免晃动。细胞生长挺快，那么细胞的增殖能力应该较强。胰酶消化成团的问题我觉得有以下几种可能：一、细胞消化后吹打不均匀，造成细胞成团生长：二、细胞细化太过，细胞成片脱落，吹打时没有受力点，细胞聚团生长。解决办法：根据细胞生长的情况进行多次消化，将同次消化下来的细胞放在一个细胞培养瓶内。贴壁细胞传代培养：一般步骤为：真空泵吸走培养基，1XPBS漂洗两次，加入1mlEDTA-Tripsin（100mm皿为例），37度放置数分钟，轻拍培养瓶使细胞自瓶壁脱落，加入适量血清，以吸管上下吸放数次以打散细胞团块，离心后加入新鲜培养基，按比例转移至新皿。细胞的传代Z重要的是胰酶处理时间，若胰酶处理太久，容易造成细胞贴壁不紧，显微镜下观察立体感不强，严重的时候甚至会造成细胞死亡。我谈谈个人经验：HepG-2、A549、Hela、SGC-7901几种癌细胞处理时间可适当放长，一般处理5-6min，C2C12、COS-7、NIH-3T3比较容易脱落，2min足矣，P19Cl6和293细胞贴壁不紧，可在PBS漂洗后，直接换新鲜培养基打散。
细胞形态特性：详见细胞说明书
四号琼脂基础，英文名：No.4 Agar Base，用途：用于霍乱弧菌选择性分离,每200ml添加1支亚碲酸钾溶液
Bennett琼脂，英文名：Bennett Agar，用途：用于需氧放线菌孢子的产生
纤维素分解菌培养基(纤维素刚果红培养基)，英文名：Cellulose Decomposing Microorganisms Medium，用途：用于纤维素分解菌分离鉴别,纤维素分解菌周围有红色分解圈
硅酸盐细菌液体培养基，英文名：Silicate Bacteria Fluid Medium，用途：用于硅酸盐细菌的培养
抗生素培养基8号，英文名：Medium 8，用途：用于微生物方法测定抗生素效价
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
乙醇酸盐流体培养基(不含琼脂)，英文名：Fluid Thioglycollate Medium，用途：用于无菌检查
TEV-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
DOK细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
JEG细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
751-NA细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
库斯特琼脂基础，英文名：Kuster’s Agar Base(Kuster, 1963)，用途：用于链霉菌属的培养鉴定，每100ml添加1支甘油
蔗糖胰蛋白胨肉汤，英文名：Sucrose Tryptone Broth，用途：用于致病性嗜水气单胞菌的斑点酶联免疫试验
盐还原菌培养基B，英文名：Postgate’s Medium B for Sulfate Reducers，用途：用于脱微生物的分离与培养，每100ml添加1支35%乳酸钠溶液
细胞传代方法：1：2传代
BPH-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HUV-EC细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCI-H460细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：2传代
DCS细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCI-H747[H747]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞传代培养实验：体外培养的原代细胞或细胞株要在体外持续地培养就必须传代，以便获得稳定的细胞株或得到大量的同种细胞，并维持细胞种的延续。培养的细胞形成单层汇合以后，由于密度过大生存空间不足而引起营养枯竭，将培养的细胞分散，从容器中取出，以1:2或1:3以上的比率转移到另外的容器中进行培养，即为传代培养；细胞“一代”指从细胞接种到分离再培养的一段期间，与细胞世代或倍增不同。在一代中，细胞培增3～6次。细胞传代后，一般经过三个阶段：游离期、指数增生期和停止期。常用细胞分裂指数表示细胞增殖的旺盛程度，即细胞群的分裂相数/100个细胞。一般细胞分裂指数介于0.2％～0.5％，肿瘤细胞可达3～5％；细胞接种2～3天分裂增殖旺盛，是活力Z好时期，称指数增生期(对数生长期)，适宜进行各种试验。实验步骤：1.将长成的培养细胞从二氧化碳培养箱中取出，在超净工作台中倒掉瓶内的培养液，加入少许消化液。(以液面盖住细胞为宜)，静置5～10分钟。2.在倒置镜下观察被消化的细胞，如果细胞变圆，相互之间不再连接成片，这时应立即在超净台中将消化液倒掉，加入3～5ml新鲜培养液，吹打，制成细胞悬液。3.将细胞悬液吸出2ml左右，加到另一个培养瓶中并向每个瓶中分别加3ml左右培养液，盖好瓶塞，送回二氧化碳培养箱中，继续进行培养。一般情况，传代后的细胞在2小时左右就能附着在培养瓶壁上，2～4天就可在瓶内形成单层，需要再次进行传代。
改良克氏柠檬酸盐琼脂，英文名：Christensen Citrate Agar , Modified，用途：——用于柠檬酸盐利用实验
苛养厌氧菌琼脂，英文名：Fastidious Anaerobe Agar (FAA)，用途：用于厌氧菌的培养
大鼠GATA结合蛋白1(GATA1)ELISA试剂盒，英文名：GATA1 ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠酪酸酶(TRY)ELISA试剂盒，英文名：Mouse TRY ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
酵母基酸缺陷型合成琼脂培养基(尿嘧啶缺陷/ SC-Ura)，英文名：Yeast Synthetic Drop-out Agar Medium without Uraci，用途：用于酵母杂交及遗传突变株的筛选和研究
Kert-3细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞冻存的步骤：1)选择处于对数生长期的细胞，在冻存前一天Z好换液。将多个培养瓶中的细胞培养液去掉，用0.25% 胰蛋白酶消化。适时去掉胰蛋白酶，加入少量新培养液。用吸管吸取培养液反复吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液。悬浮生产细胞则不要消化处理。然后将细胞收集于离心管中离心(1000r/min，10分钟)；2)去上清液，加入含20%小牛血清的完全培养基，于4℃预冷15分钟后，逐滴加入已无菌的DMSO或甘油，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，细胞浓度为5×106～1×107/mL之间。(冻存培养液的配置是不是一定要用小牛血清呢？答案是不一定的，具体要看培养的细胞类型来选择；3)将分装上述细胞悬液于2ml冻存管中，每管0.25ml。冻存管要将盖子盖紧，并标记好细胞名称和冻存日期，同时作好登记(日期、细胞种类及代次、冻存支数)；4)将装好细胞的冻存管放到冻存盒中，-80℃冰箱过夜。；如果有程序降温器(放在-80℃冰箱过夜，放入液氮罐)Z好;或者可以在4℃，2h;然后转到-20℃，2h;-80℃，2h;放入液氮罐；5)细胞冻存在液氮中可以长期保存，但为妥善起见，冻存半年后，Z好取出一只冻存管细胞复苏培养，观察生长情况，然后再继续冻存。
CCF-STTG1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：星形胶质细胞；细胞传代方法：1：3—1：6传代；每周换液2-3次
HL-7702细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：消化3-5分钟，1：2,3天内可长满
SC细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞产品包装：复苏形式：T25培养瓶(一瓶)或冻存形式：1ml冻存管(两支)
小川氏培养基基础，英文名：Ogawa Medium Base，用途：用于结核杆菌的药敏试验、分离和培养,需添加甘油和全蛋液
霍乱双糖铁琼脂，英文名：Cholera Double Sugar Iron Agar，用途：用于霍乱弧菌生化试验
菌种培养基，英文名：Strain Medium，用途：用于菌种培养与保存(pH6.5)
细胞生长特性：悬浮
THLE-3细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
SCaBER细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞；细胞传代方法：1：3-1：6传代，2-3天换液1次。
人血管紧张素Ⅱ受体Ⅰa型(AgtrⅠa)ELISA试剂盒，英文名：Human AgtrⅠa ELISA Kit，规格：48T/96T
人甘油-O-酰基转移酶(GNPAT)ELISA试剂盒，英文名：Human GNPAT ELISA Kit，规格：48T/96T
人6-羟多巴胺(6-OHDA)ELISA试剂盒，英文名：Human 6-OHDA ELISA Kit，规格：48T/96T
人层粘连蛋白γ2(LAMγ2)ELISA试剂盒，英文名：Human LAMγ2 ELISA Kit，规格：48T/96T