HBMEC人脑微血管内皮细胞系 消化操作需要注意什么

HBMEC人脑微血管内皮细胞系 消化操作需要注意什么
黄豆粉琼脂培养基，英文名：Bean Agar Medium，用途：用于放线杆菌的筛选和培养
橄榄油培养基基础，英文名：olive oil medium for Malassezia，用途：用于马拉色菌的培养，每80ml添加3.2ml橄榄油
改良Letheen琼脂基础，英文名：Letheen Agar Base, Modified，用途：用于卫生微生物检测,需添加7g/L吐温80
小鼠S100蛋白(S-100)ELISA试剂盒，英文名：Mouse S-100 ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠前列腺酸性酶(PAP)ELISA试剂盒，英文名：PAP ELISA Kit，规格：48T/96T
小牛浸液肉汤，英文名：Veal Infusion Broth，用途：用于苛养菌的培养
细胞背景资料：详见相关文献介绍
胰蛋白胨大豆琼脂/胰化大豆蛋白琼脂(TSA)，英文名：Tryptic Soy Agar，用途：用于细菌的计数和培养
人微管蛋白γ2(TUBγ2)ELISA试剂盒，英文名：Human TUBγ2 ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠免疫球蛋白样EGF样域酪酸激酶1(Tie1)ELISA试剂盒，英文名：Tie1 ELISA Kit，规格：48T/96T
为了防止因污染或技术原因使长期培养功亏一篑，考虑到培养细胞因传代而迟早会出现变异，有时因寄赠、交换和购买，培养细胞从一个实验室转运到另一个实验室，的策略是进行低温保存。这对于维持一些特殊细胞株的遗传特性极为重要。现简要介绍深低温保存法(-70℃~-196℃)的特点。细胞深低温保存的基本原理是：在-70℃以下时，细胞内的酶活性均己停止，即代谢处于完全停止状态，故可以长期保存。细胞低温保存的关键，在于通过0~20℃阶段的处理过程。在此温度范围内，水晶呈针状，极易招致细胞的严重损伤。冻存细胞的复苏：冻存细胞较脆弱，要轻柔操作。冻存细胞要快速融化，并直接加入完全生长培养基中。若细胞对冻存剂(DMSO或甘油)敏感，离心去除冻存培养基，然后加入完全生长培养基中。直接铺板方法：取出贮存细胞，37℃水浴中快速融化；直接用完全生长培养基铺板细胞。1ml冻存细胞使用10~20ml完全生长培养基。进行活细胞计数，细胞接种应该至少在3×10(5)活细胞/ml；培养细胞12到24小时，更换新鲜的完全生长培养基，去除冻存剂。离心方法：取出贮存细胞，37℃水浴中快速融化；把1到2ml冻存细胞加入到大约25ml完全生长培养基，轻轻混匀；以大约80x离心2到3分钟；弃去上清。在完全生长培养基轻轻再次悬浮细胞，并且进行活细胞计数。细胞铺板，细胞接种应该至少为3×10(5)活细胞/ml。细胞的分化：一个成年人全身细胞总数约1012个，可以区分为200多种不同类型的细胞：形态结构，代谢，行为，功能等各不相同。追根溯源，这么多种细胞均来自一个受精卵细胞。所以，通常把发育过程中，细胞后代在形态、结构和功能上发生差异的过程称为细胞分化。细胞分化发生在胚胎阶段，也发生在胎儿出生以后，乃至成人阶段。例如，人体血细胞的产生和分化，这个过程在人的一生中一直持续着。由旺盛生长不断分裂的细胞，转入分化，通常从细胞周期中G1期开始时一个确定的点G0点“逃逸”出细胞周期。旺盛生长分裂的细胞和各种分化了的细胞，它们的基因表达和代谢活动各不相同。
细胞形态特性：详见细胞说明书
乳酸菌霉素琼脂2，英文名：Lactobacillus Chloramphenicol Agar 2，用途：——用于干酪乳杆菌和乳酸片球菌的培养
抗生素培养基E(PH7.9)，英文名：Medium E（PH7.9），用途：用于抗生素检验
K氏培养基基础，英文名：K’s Medium Base，用途：用于饮料中耐热耐酸菌的检测,需使用苹果酸调节pH
连四盐肉汤培养基基础，英文名：Fluid Tetrathionate Medium Base，用途：用于沙门氏菌选择性分离,每100ml添加碘溶液、0.1%煌绿溶液各1支
麦康凯(MAC)琼脂，英文名：MacConey Agar，用途：含结晶紫，3号胆盐,用于肠道菌的选择性分离
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
GC琼脂基础，英文名：GC Agar Base，用途：用于致病性奈瑟氏菌的分离
PL-45细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCI-H1915[H1915]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
KP-N-RT-BM-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：成神经细胞；细胞传代方法：1：2传代
CAL-33细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
煌绿磺胺嘧啶琼脂(BGS琼脂)，英文名：Brilliant Green Agar with Sulfadiazine，用途：含磺胺嘧啶,用于沙门氏菌的选择性分离
葡萄球菌增菌肉汤基础，英文名：Staphylococcus Enrichment Broth Base，用途：用于凝固酶阳性葡萄球菌选择性增菌,每100ml添加1支1%亚碲酸钾溶液
Fraser肉汤增菌液基础，英文名：Fraser Enrichment Broth Base，用途：用于李斯特氏菌增菌
细胞传代方法：1：2传代
T98G细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：按1：3传代
MLA-144细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
WILL-2细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCTC clone 929(L929)细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
M1细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞复苏后贴壁细胞较少的问题分析：总结1：复苏过程没有问题，是否是从液氮拿出直接放入温水，还有培养箱，二氧化碳浓度，培养基、PH值等环节。要么加高浓度FBS 15-20%，看看能否帮助贴壁，当然也需要考虑血清问题，还有确信拿来的细胞没问题。总结2：首先应该怀疑冻存，实际上复苏出问题的可能非常小，因为操作简单，而且死板。1、你冻存的时候是不是消化的时间过长，这是一般人所注意不到的，即使书上也不讲这个问题，太长的消化时间会让细胞复苏时失去贴壁能力，表现为先贴后死，原因是在你复苏的时候细胞已进入凋亡程序，不可逆转的死亡。2、你的冻存液好不好，是什么，甘油还是DMSO，质量非常重要，否则也会死亡。3、你的冻存液的量加的是不是太多，ATCC推荐是不超过7%，大于5%，太多也不好。4、你在冻存的时候是不是把DMSO混均匀，这个有一些影响，但不算太大。5、你的冻存是否按部就班，就是所温度梯度是不是把握严格，很多人容易忘却这个事情，因为这个东西流程长。6、如果你细胞污染，你是否能很快看到，我比我的导师能早一天看到污染。从这个角度讲建议去除离心这步。7、你的细胞在冻存前是否过密。还有，不赞成孵箱污染这个概念的，所有在一个孵箱里的细胞都污染一个细菌的话，这个细菌是源于孵箱的，但这不代表孵箱污染，因为孵箱无论你如何处理都有大量的细菌，问题在操作。每次污染的原因都要尽可能的找，以后就不犯同样的问题，这个很重要，不能靠猜，否则你就有可能细胞养绝换课题，这个见得太多了，别不当会事。
抗生素培养基13号，英文名：Medium 13（Sabouraud LiquidBroth,Modified），用途：用于微生物方法测定抗生素效价
酵母浸粉葡萄糖琼脂，英文名：Yeast Extract Glucose Agar，用途：用于地衣芽孢杆菌、芽孢菌、密执安棍状杆菌、金黄杆菌、蜂房哈夫尼菌、荧光假单胞菌和粘质沙雷氏菌的培养
人视网膜蛋白(CR)ELISA试剂盒，英文名：Human CR ELISA Kit，规格：48T/96T
人醛糖还原酶相似蛋白1(ARL1)ELISA试剂盒，英文名：Human ARL1 ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
水琼脂培养基，英文名：Water Agar Medium，用途：用于饲料细菌总数测定中覆盖用
COV504细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞；细胞传代方法：1：2传代
细胞培养实验中常见问题总结：1)一般客户拿到细胞后，应该注意什么？客户收到细胞后先不开盖，放在培养箱静置若干小时后(看细胞密度而定)在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照(建议受收细胞后观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各一张)，排除细胞本身污染的情况；收到细胞未开封，出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。收到细胞时如无异常情况，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养液吸出，留下10ml培养液继续培养；超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞，吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。细胞消化液建议使用PBS配制，慎用Hanks液配制；2)快递细胞多久能到，是寄冻存的细胞还是复苏好的细胞？我们采用快递发货，一般外地2--3天，寄细胞前请确认当地温度，如果气温低于4度的，则采用邮寄冻存细胞；3)可否使用与原先培养条件不同之培养基？不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活；4)可否使用与原先培养条件不同之血清种类？不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。
LP1细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HuT 78细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
BDCM细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长；细胞形态特性：淋巴母细胞；细胞传代方法：每周2-3次。
细胞产品包装：复苏形式：T25培养瓶(一瓶)或冻存形式：1ml冻存管(两支)
TCBS琼脂，英文名：Thiosulfate Citrate Bile Salts Sucrous Agar，用途：用于副溶血性弧菌选择性分离
麦芽汁琼脂培养基，英文名：Malt Agar Medium，用途：含3%麦芽浸粉,不含霉素,用于霉菌和酵母菌的分离和培养
酵母基酸缺陷型合成琼脂培养基(组酸缺陷)，英文名：Yeast Synthetic Drop-out Agar Medium without Histi，用途：用于酵母杂交及遗传突变株的筛选和研究
细胞生长特性：贴壁生长　
Rat Kidney Podocytes细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
Tca-8113[Tca8113]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
人弹性蛋白酶(Elastase)ELISA试剂盒，英文名：Human Elastase ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠胰淀素(Amylin)ELISA试剂盒，英文名：Mouse Amylin ELISA Kit，规格：48T/96T
人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体-R4(STRAIL-R4)ELISA试剂盒，英文名：Human STRAIL-R4 ELISA Kit，规格：48T/96T
人蛋白酶3(CAPN3)ELISA试剂盒，英文名：Human CAPN3 ELISA Kit，规格：48T/96T