HT22小鼠海马神经元细胞系 消化操作需要注意什么

HT22小鼠海马神经元细胞系 消化操作需要注意什么
胰酪大豆胨琼脂培养基/大豆酪蛋白琼脂培养基，英文名：Soybean-Casein Digest Agar Medium，用途：用于无菌检查和细菌培养
4-甲基伞形酮葡糖苷酸(MUG)培养基，英文名：MUG Medium，用途：用于大肠埃希氏菌检验(ChP)
哥伦比亚CNA琼脂/哥伦比亚CNA血琼脂基础，英文名：Columbia CNA Agar，用途：用于G+球菌的选择性分离,添加羊血制备哥伦比亚CNA血琼脂
人可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1/CD54)ELISA试剂盒，英文名：Human sICAM-1/CD54 ELISA Kit，规格：48T/96T
人水痘带状疱疹病毒IgM(VZV-IgM)ELISA试剂盒，英文名：Human VZV-IgM ELISA Kit，规格：48T/96T
酵母基酸缺陷型合成琼脂培养基(组酸/亮酸/色酸/尿嘧啶缺陷)，英文名：Yeast Synthetic Drop-out Agar Medium，用途：用于酵母杂交及遗传突变株的筛选和研究
细胞背景资料：详见相关文献介绍
盐还原菌培养基E，英文名：Postgate’s Medium E for Sulfate Reducers，用途：含琼脂,用于脱微生物的培养和计数,每100ml添加1支35%乳酸钠溶液
小鼠抗信号识别颗粒抗体(SRP)ELISA试剂盒，英文名：Mouse SRP ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠白介素11(IL-11)ELISA试剂盒，英文名：Mouse IL-11 ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞的冻存：为避免污染造成的损失，Z小化连续细胞系的遗传改变和避免有限细胞系的老化和转化，需要冻存哺乳细胞。冻存细胞前，细胞应该特性化并检查是否污染。有几种普通培养基用来冻存细胞。对于包含有血清的培养基，成分可能如下：包含10%甘油的完全培养基；包含10%二甲基亚砜(DMSO)的完全培养基；50%细胞条件培养基和50%含有10%甘油的新鲜培养基或50%细胞条件培养基和50%含有10%二甲基亚砜的新鲜培养基。对于无血清培养基，一些普通的培养基成分可能是：50%细胞条件无血清培养基和50%包含有7.5%二甲基亚砜的新鲜的无血清培养基或包含有7.5%二甲基亚砜和10%细胞培养级BSA的新鲜无血清培养基。悬浮细胞冻存：计数将要冻存的活细胞。细胞应该处于对数生长期。以大约200～400g离心5分钟沉淀细胞，使用移液管移去上清到Z小体积，不要搅乱细胞。以1×10(7)到5×10(7)细胞/ml密度，在包含有血清的冷冻培养基中再次悬浮细胞，或者以0.5×10(7)到1×10(7)在无血清培养基中，再次悬浮细胞。分装进冻存管，将冻存管置于湿冰上或放入4℃冰箱中，5分钟内开始冷冻步骤。细胞以1℃/分钟进行冷冻，可以通过可编程序的冷冻器进行或者把隔离盒中的冻存管放到-70℃到-90℃的冰箱中，然后转移到液氮中贮存。贴壁细胞冻存：使用分离试剂从基层分离细胞，分离时尽可能温和，使对细胞的损伤减少到Z小。在完全生长培养基中，再次悬浮分离细胞，确定有活力细胞数。以大约200g离心5分钟沉淀细胞。使用移液管移去上清到Z小体积，不要搅乱细胞。以5×10(6)到1×10(6)细胞/ml密度，在冻存液中悬浮细胞。分装进冻存管，将冻存管置于湿的冰上或放入4℃冰箱中，5分钟内开始冷冻步骤。细胞以1℃/分钟进行冷冻，可以通过可编程序的冷冻器进行或者把隔离盒中的冻存管放到-70℃到-90℃的冰箱中，然后转移到液氮中贮存。
细胞形态特性：详见细胞说明书
明胶培养基，英文名：Gelatin Medium，用途：用于生化试验（兽药典用）
抗生素培养基39号，英文名：Medium39，用途：用于微生物方法测定抗生素效价
SCDLP琼脂培养基基础，英文名：Soya Casein Digest Lecithin Polysorbate Agar Base，用途：用于细菌总数的测定,每升培养基添加1支吐温80
缓冲MUG琼脂(BMA)，英文名：Buffered MUG Agar，用途：用于滤膜法测定大肠杆菌
M17肉汤(进口原料)，英文名：M17 Broth，用途：用于牛奶和乳制品中乳酸菌的检测，每100ml添加1支10%乳糖溶液
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
赫奇逊琼脂培养基，英文名：Hutchison Agar Medium，用途：用于纤维素分解菌的测定
293H(HEK-293)细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
EC97076细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
VEROC1008(E6)细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞样；细胞传代方法：消化3-5分钟。1：2。3天内可长满。
Hep G2[HEPG2]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
GC琼脂基础，英文名：GC Agar Base，用途：用于致病性奈瑟氏菌的分离
乳糖蛋白胨培养液，英文名：Lactose Peptone Broth，用途：用于水中总大肠菌群的测定
SS琼脂，英文名：Salmonella Shigella Agar，用途：用于肠道菌选择性分离
细胞传代方法：1：2传代
NOK细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HEL299细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HEP 3B细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
H522细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
293H(HEK-293)细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞株(系)的使用，为医学研究和测试工作带来了极大的方便。但细胞的传代是有限制的，长期连续传代的细胞，不仅消耗大量的人力和物力，而且细胞的生长与形态等会有一定退变或转化，因而细胞失去原有的遗传特性，有时还会由于细胞污染而造成传代中断，种子丢失。因此，在实际工作中常需冻存一定数量的细胞，以备替换使用。细胞冷冻与复苏是细胞培养 室的常规工作和通用技术。目前，细胞冻存Z常用的技术是液氮冷冻保存法，主要采用加适量保护剂的缓慢冷冻法冻存细胞。细胞在不加任何保护剂的情况下直接冷冻，细胞内外的水分会很快形成冰晶，从而引起一系列不良反应。如细胞脱水使局部电解质浓度ZG，pH值改变，部分蛋白质由于上述原因而变性，引起细胞内部空间结构紊乱，溶酶体膜由此遭到损伤而释放出溶酶体酶，使细胞内结构成分造成破坏，线粒体肿胀，功能丢失，并造成能量代谢障碍。胞膜上的类脂蛋白复合体也易破坏引起细胞膜通透性的改变，使细胞内容物丢失。如果细胞内冰晶形成较多，随冷冻温度的降低，冰晶体积膨胀造成细胞核DNA空间构型发生不可逆的损伤，而致细胞死亡。因此，细胞冷冻技术的关键是尽可能地减少细胞内水分，减少细胞内冰晶的形成。采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质分子量小，溶解度大，易穿透细胞，可以使冰点下降，提高细胞膜对水的通透性，且对细胞无明显毒性。慢速冷冻方法又可使细胞内的水分渗出细胞外，减少胞内形成冰结晶的机会，从而减少冰晶对细胞的损伤。
吡嗪酰胺酶检测酪蛋白大豆琼脂，英文名：Casein Digest Soybean Agar for Pzase Test，用途：用于吡嗪酰胺酶检测，溶解于Tris-马来酸缓冲液(0.2mol/L,pH6)中
血琼脂基础2号，英文名：Blood Agar Base No2，用途：用于细菌的培养,需添加无菌脱纤维绵羊全血
小鼠睾酮激素(TESTO)ELISA试剂盒，英文名：Mouse TESTO ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠热休克蛋白β2(HSPβ2)ELISA试剂盒，英文名：HSPβ2 ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
营养半固体琼脂(NSA)，英文名：Nutrient Semisolid Agar，用途：用于细菌鉴定试验 GB4789.31
CMT167细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
购买的细胞死亡或细胞存活率不佳可能原因？研究人员在细胞培养时出现存活率不佳，原因比较复杂，常见原因可归纳为：培养基使用错误或培养基品质不佳；血清使用错误或血清的品质不佳；解冻过程错误；冷冻细胞解冻后，加以洗涤细胞和离心；悬浑细胞误认为死细胞；培养温度使用错误；细胞置于-80℃太久等。建议严格参照ATCC的标准操作规程进行细胞复苏、冻存等工作。欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速?欲回收动物细胞，其离心速率一般为300×g(约1OOOrpm),5-10分钟，转速过高或离心时间过长都将造成细胞死亡。合适的离心转速是根据相对离心力决定。RCF=1.119×105×r×(rpm)2，其中r为离心机转轴ZX与离心套管底部内壁的距离；rpm为离心机每分钟的转数；RCF(relative centrifugal force)为相对离心力，以重力加速度g(980.66cm/s2)的倍数来表示单位。
Nthy-ori 3-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
95D细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
3T3细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞产品包装：复苏形式：T25培养瓶(一瓶)或冻存形式：1ml冻存管(两支)
赫奇逊液体培养基，英文名：Hutchison Fluid Medium，用途：用于纤维素分解菌的培养
蛋白胨水培养基，英文名：Peptone Water Medium，用途：用于细菌靛基质试验
化钠结晶紫增菌液，英文名：Sodium Chloride Violet purple Enrichment Broth，用途：用于副溶血性弧菌的选择性增菌
细胞生长特性：贴壁生长　
B16BL6细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
RAW264.7细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：不规则圆形；细胞传代方法：1：2传代
人蛋白激酶Cδ(PKCd)ELISA试剂盒，英文名：Human PKCd ELISA Kit，规格：48T/96T
人D-二聚体(D2D)ELISA试剂盒，英文名：Human D2D ELISA Kit，规格：48T/96T
人N-乙酰谷酸合酶(NAGS)ELISA试剂盒，英文名：Human NAGS ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠Smad同源物1(Smad1)ELISA试剂盒，英文名：Smad1 ELISA Kit，规格：48T/96T