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解冻细胞常见实验问题分析及推荐解决方法:在解冻冻存细胞时,发现会出现存活率低、大量细胞碎片及生长缓慢等问题,究竟是什么原因导致,我们该怎么进行解决?以下是国内外细胞培养专家针对解冻细胞实验问题,总结的一些解决方案!出现低存活率的可能原因及推荐解决方案如下:1)解冻过程中细胞裂解,推荐的解决方案:可预期到一定量的细胞死亡,因此细胞的浓度应足够高,考虑到这一损失。起始浓度为1*10(6)至1*10(7)细胞/毫升;2)解冻过程中的问题,推荐的解决方案:在-70℃至-80℃下保存冷冻的培养物,保存时间为1-5天,但这不是保存的方法。在37℃充分解冻后应立即开始培养;3)对冷冻液过敏,推荐的解决方案:A.完全或部分更换培养基,减少培养基中冷冻液的量。在24小时后更换培养液体可全部去除冷冻液。B.留出更多时间供培养物恢复。有时细胞需要几周时间才能形成单层或密集的悬浮物,取决于冷冻时细胞的年龄或传代次数或在生长阶段中的位置。冷冻的条件在对数期;4)被冷冻的原种细胞的年龄或冷冻时培养物的年龄,推荐的解决方案:解冻Z近冷冻的细胞。细胞处于冷冻状态的时间越长,存活率越低。检查冷冻细胞的时间和方法。在冷冻时细胞应处于对数期。
人生长激素释放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)ELISA试剂盒,英文名:Human GHRP-Ghrelin ELISA Kit,规格:48T/96T
SMC-1细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
H2126细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
人糖原化酶同工酶MM(GP-MM)ELISA试剂盒,英文名:Human GP-MM ELISA Kit,规格:48T/96T
细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装:复苏形式:T25培养瓶(一瓶)或冻存形式:1ml冻存管(两支)
Hep G2细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
CHO-K1细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:上皮样;细胞传代方法:1:2传代
2V6.11细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
CMT167细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
Nthy-ori 3-1细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
韦荣氏球菌培养基基础,英文名:Veillonella Medium Base,用途:用于韦荣氏球菌的培养,每100ml添加2支60%乳酸钠溶液
庆大霉素琼脂基础,英文名:Gentamicin Agar Base,用途:用于霍乱弧菌选择性分离,每100ml添加1支庆大霉素琼脂基础添加剂
橄榄油培养基基础,英文名:olive oil medium for Malassezia,用途:用于马拉色菌的培养,每80ml添加3.2ml橄榄油
3%NaCl鸟酸脱羧酶试验培养基,英文名:Ornithine Decarboxylase Test Mediu with 3%NaCl,用途:用于弧菌的鸟酸脱羧酶试验
细胞形态特性:上皮样
平板计数琼脂(PCA),英文名:Plate Count Agar/ Standard Methods Agar,用途:用于细菌总数测定
酸琼脂(CAA),英文名:Caffeic Acid Agar,用途:用于新生隐球菌及其他隐球菌的培养
酵母基酸缺陷型合成琼脂培养基(色酸缺陷),英文名:Yeast Synthetic Drop-out Agar Medium without Trypt,用途:用于酵母杂交及遗传突变株的筛选和研究
庆大霉素琼脂基础,英文名:Gentamicin Agar Base,用途:用于霍乱弧菌选择性分离,每100ml添加1支庆大霉素琼脂基础添加剂
细胞的衰老:体外细胞培养实验证明:成纤维细胞:来自胎儿传代50次后衰老死亡,来自成人传代20次后衰老死亡(与具体年龄有关;来自小鼠传代14--28次后衰老死亡,来自乌龟传代90--125次后衰老死亡。细胞衰老过程中会发生一系列的变化,包括:蛋白质合成速度降低,已有蛋白质结构变化,特异蛋白质成份出现;同时,细胞核,线粒体,膜系统、骨架系统等都有结构、功能的改变。细胞衰老原因,尚无定论,出现过好几种理论与假说,其中得到较广泛认可的是“自由基损伤假说”。细胞凋亡:细胞的死亡是个体存活的正常现象,常见的细胞死亡形式有3种:坏死、凋亡和细胞毒性。多细胞生物的生命活动中,因为环境因素的突然变化或病原物的入侵,导致一部分细胞死去,称为细胞的病理死亡,或细胞坏死。坏死是细胞暴露于严重的物理或化学刺激时导致的细胞死亡;细胞毒性是由细胞或者化学物质引起的单纯的细胞杀伤事件,不依赖于其它两种细胞死亡机理,如杀伤T细胞的细胞毒性作用。还有一种情况,一部分细胞的死亡是生物个体正常生命活动(代谢、生长、发育、分化)的一个必要部分;似乎带有“牺牲局部,保全整体”的意味。这种情况下的细胞死亡,明显地受遗传控制,称为细胞凋亡。凋亡(Apoptosis)则是程序性的、正常的细胞死亡,是机体清除无用的或者不想要的细胞的手段。它与细胞坏死是两个截然不同的过程,无论从形态学、生物学还是生化的特征来说,都有明显的区别。细胞凋亡现象普遍存在于生物界。细胞凋亡与细胞增殖、分化和衰老起着互补与平衡的作用,在多细胞动物的发育、形态建成与维持中扮演至关重要的角色。作为细胞的一种基本生命现象,凋亡失控的结果将是可怕的:凋亡不足时,易发生癌变、病毒性疾病和自身免疫疾病;而凋亡过量则可能产生获得性免疫缺陷综合征(HIV)、重症肝炎与退行性神经疾病,如老年性痴呆症(Alzheimer"s disease)、帕金森氏症(Parkinson"s disease)。因此研究细胞凋亡及其机理具有重要的理论和实践意义。
人可溶性凋亡相关因子(SFAS/Apo-1)ELISA试剂盒,英文名:Human SFAS/Apo-1 ELISA Kit,规格:48T/96T
小鼠高迁移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA试剂盒,英文名:Mouse HMGB-1 ELISA Kit,规格:48T/96T
人催产素受体(OXTR)ELISA试剂盒,英文名:Human OXTR ELISA Kit,规格:48T/96T
细胞背景资料:详见相关文献介绍
细胞培养过程中相关问题总结:悬浮性细胞应如何继代处理?一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中,稀释细胞浓度即可,若培养液太多时,可将培养角瓶口端稍微抬高,直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养角瓶,加入新鲜培养基稀释至适当浓度,重复前述步骤即可。欲将一般动物细胞离心下来,其离心速率应为多少转速?欲回收动物细胞,其离心速率一般为300xg(约1,000rpm),5-10分钟,过高之转速,将造成细胞死亡;细胞之接种密度为何?依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因;细胞冷冻培养基之成份为何?动物细胞冷冻保存时Z常使用的冷冻培养基是含5-10%DMSO(dimethyl sulfoxide)和90-95%原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之。注意:由于DMSO稀释时会放出大量热能,故不可将DMSO直接加入细胞液中,必须使用前先行配制完成;DMSO之等级和无菌过滤之方式为何?冷冻保存使用之DMSO等级,必须为Tissue culture grade之DMSO,其本身即为无菌状况,次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中,保存于4°C,避免反复冷冻解冻造成DMSO之裂解而释出有害物质,并可减少污染之机会。若要过滤DMSO,则须使用耐DMSO之Nylon材质滤膜;冷冻保存细胞之方法?冷冻保存方法一:冷冻管置于4°C 30~60分钟→ (-20°C 30分钟)→-80°C 16~18小时(或隔夜)→液氮槽vaporphase长期储存。冷冻保存方法二:冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3°C至–80°C以下,再放入液氮槽vapor phase长期储存。-20°C不可超过1小时,以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80°C冰箱中,惟存活率稍微降低一些;细胞欲冷冻保存时,细胞冷冻管内应有多少细胞浓度?冷冻管内细胞数目一般为1x10(6)cells/ml vial,融合瘤细胞则以5x10(6)cells/ml vial为宜;应如何避免细胞污染?细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之Z好方法;如果细胞发生微生物污染时,应如何处理?直接灭菌后丢弃之。
OCI-AML4细胞专业复苏;细胞生长特性:悬浮;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
769-P细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:上皮细胞样;细胞传代方法:1:4—1:12传代,2—3天换液一次
RPTC细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
低限肉汤(不含葡萄糖),英文名:Minimal Broth Davis without Dextrose,用途:用于分离和表现营养突变型大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的特性
淀粉铵盐培养基,英文名:Starch Ammonium Salt Medium,用途:用于放线菌的分离和计数
脑心浸出液琼脂(BHIA),英文名:Brain Heart Infusion Agar,用途:用于细菌尤其是苛养菌的培养
发根农杆菌培养基(YEB),英文名:Agrobacterium rhizogene Medium,用途:用于发根农杆菌的培养
人丛状蛋白A2(PLXNA2)ELISA试剂盒,英文名:Human PLXNA2 ELISA Kit,规格:48T/96T
小鼠纤维连接素相关抗原(FRA)ELISA试剂盒,英文名:Mouse FRA ELISA Kit,规格:48T/96T
大鼠多聚ADP核糖聚合酶(PARP)ELISA试剂盒,英文名:PARP ELISA Kit,规格:48T/96T
大鼠谷胱甘肽S转移酶A1(GSTa1)ELISA试剂盒,英文名:GSTa1 ELISA Kit,规格:48T/96T
细胞来源说明:细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
C-33A细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:上皮细胞样;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
PG-LH7细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
OVCAR8细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
OK细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
NCI-H747[H747]细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
RKN细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
MFC细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
小鼠干细胞因子(SCF)ELISA试剂盒,英文名:Mouse SCF ELISA Kit,规格:48T/96T
细胞传代方法:1:4传代,每周换液2次
95D细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
3T3细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
293H(HEK-293)细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
EC97076细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
VEROC1008(E6)细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:上皮细胞样;细胞传代方法:消化3-5分钟。1:2。3天内可长满。
Hep G2[HEPG2]细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
NOK细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
赖酸培养基(LYS),英文名:Lysine Medium,用途:用于啤酒野生酵母检验,需添加乳酸钾并使用乳酸校正酸碱度
小牛浸液琼脂,英文名:Veal Infusion Agar,用途:用于苛养菌的培养
EEM培养基,英文名:Enterobacteriaceae Enrichment Mannitol Medium,用途:用于肠道致病菌的增菌
沙氏脑心浸液琼脂基础,英文名:Sabouraud Brain Heart Infusion Agar Base,用途:用于真菌的选择性分离,每100ml培养基中添加1支霉素溶液
细胞生长特性:贴壁生长
HGMC细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
SL-1细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
143BTK-细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
B16-F10细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:消化3-5分钟。1:2。3天内可长满。
A1847细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
Calu-1细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:上皮样;细胞传代方法:消化10分钟。1:2。3-4天长满
Amies运送培养基,英文名:Amies Transport Medium,用途:用于致病菌标本的采集、运输和保存
MKTTn肉汤基础,英文名:Muller Kauffmann Tetrathionate Novobiocin Broth Ba,用途:用于沙门氏菌增菌,每100ml中添加1支碘溶液和2支新生霉素储备液
抗生素培养基41号,英文名:Medium 41,用途:用于微生物方法测定抗生素效价
SCCRAM肉汤,英文名:SCCRAM Broth,用途:用于沙门氏菌前增菌
人白细胞抗原A(HLA-A)ELISA试剂盒,英文名:Human HLA-A ELISA Kit,规格:48T/96T