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解冻细胞常见实验问题分析及推荐解决方法：在解冻冻存细胞时，发现会出现存活率低、大量细胞碎片及生长缓慢等问题，究竟是什么原因导致，我们该怎么进行解决？以下是国内外细胞培养专家针对解冻细胞实验问题，总结的一些解决方案！出现低存活率的可能原因及推荐解决方案如下：1)解冻过程中细胞裂解，推荐的解决方案：可预期到一定量的细胞死亡，因此细胞的浓度应足够高，考虑到这一损失。起始浓度为1*10(6)至1*10(7)细胞/毫升；2)解冻过程中的问题，推荐的解决方案：在-70℃至-80℃下保存冷冻的培养物，保存时间为1-5天，但这不是保存的方法。在37℃充分解冻后应立即开始培养；3)对冷冻液过敏，推荐的解决方案：A.完全或部分更换培养基，减少培养基中冷冻液的量。在24小时后更换培养液体可全部去除冷冻液。B.留出更多时间供培养物恢复。有时细胞需要几周时间才能形成单层或密集的悬浮物，取决于冷冻时细胞的年龄或传代次数或在生长阶段中的位置。冷冻的条件在对数期；4)被冷冻的原种细胞的年龄或冷冻时培养物的年龄，推荐的解决方案：解冻Z近冷冻的细胞。细胞处于冷冻状态的时间越长，存活率越低。检查冷冻细胞的时间和方法。在冷冻时细胞应处于对数期。
大鼠膀胱肿瘤抗原(BTA)ELISA试剂盒，英文名：BTA ELISA Kit，规格：48T/96T
HA细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：消化3-5分钟，1：2,3天内可长满
MH-S细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
小鼠5脂加氧酶(5-LO)ELISA试剂盒，英文名：Mouse 5-LO ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装：复苏形式：T25培养瓶(一瓶)或冻存形式：1ml冻存管(两支)
NCI-H1666细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长，松散；细胞形态特性：上皮细胞；细胞传代方法：1：2-1：4传代；每周换液2次。
OVCAR10细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
OK细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
MPC细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
TMD8细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
改良CCD琼脂基础，英文名：Modified CCD Agar Base，用途：用于弯曲菌选择性分离,每100ml添加1支 弯曲菌分离琼脂添加剂(头孢哌酮、两性霉素B、利福平)
克氏双糖铁琼脂(KI)，英文名：Kligler Iron Agar，用途：用于细菌的复合生化试验
TGC流体培养基，英文名：TGC Medium ,Fluid，用途：——用于无菌检验
APA培养基基础，英文名：APA Medium Base，用途：用于嗜盐菌的培养，灭菌后需添加1%无菌碳酸钠
细胞形态特性：上皮样
番茄汁特制琼脂，英文名：Tomato Juice Agar Special，用途：用于唾液和其他标本中乳酸菌等嗜酸微生物的培养
改良Gorodkowa琼脂，英文名：Modified Gorodkowa Agar，用途：用于酵母孢子的形成和培养
吡哆醇Y培养基，英文名：Pyridoxine Y medium，用途：用于吡哆醇测定
苏通琼脂培养基基础，英文名：Sauton Agar Medium Base，用途：用于结核杆菌的增菌培养和卡介苗的制备
冷冻细胞解冻程序：依据细胞株数据单指定之基础培养基种类、血清种类和其它指定之成份和比例，制备培养基。绝大多数之细胞均无法立即适应不同之基础培养基或不同之血清种类，若因实验需要，必须有所不同时，务必以缓慢比例渐次改变培养基组成，确定细胞适应后，方进行所需之实验。FBS(fetal bovine serum,胚牛血清), CS(calf serum,小牛血清)和HS(horse serum,马血清)，对细胞而言差异极大，请务必依据细胞株资料单指定之血清种类培养之。将培养基置于37°C水槽中回温，回温后喷以70%酒精并擦拭之，移入无菌操作台内。取出冷冻管，立即放入37°C水槽中快速解冻，水面高度不可接近或高过冷冻管之盖沿，否则易发生污染。轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化后，以70%ethanol擦拭冷冻管外部，移入无菌操作台内。依据细胞种类和浓度，于无菌操作台内取10ml培养基加至T25或T75flask中。取出已解冻之细胞悬浮液，缓缓加入T25或T75flask内之培养基，混合均匀，放入37°C，5%CO2培养箱培养。对绝大多数细胞而言，1%以下之冷冻保护剂DMSO，不会对细胞之贴附或活化有不良影响，不需立刻由解冻细胞中去除，待第二天确定细胞生长或贴附良好后再去除即可。惟对极少数因对DMSO敏感或会造成细胞分化之细胞，需立即去除DMSO者，则可将解冻后之细胞悬浮液放入5-10ml培养基中，离心300xg(约1000rpm)，5分钟，小心移去上清液，加入适量新鲜培养基，将细胞均匀混合后，转移至培养瓶中，再放入37°C，5%CO2培养箱培养。
小鼠凝血酶原肽段1+2(F1+2)ELISA试剂盒，英文名：Mouse F1+2 ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠晶体蛋白β(Cryβ)ELISA试剂盒，英文名：Cryβ ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠尿蛋白1(UP1)ELISA试剂盒，英文名：UP1 ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞背景资料：该细胞系来自8岁男性黑人的组织。其染色体模式数目为60，在裸鼠中能致瘤。已知该细胞系含有与人类疾病有关的因子，需在2级生物安全防护下操作。
细胞培养过程中相关问题总结：悬浮性细胞应如何继代处理？一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，可将培养角瓶口端稍微抬高，直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养角瓶，加入新鲜培养基稀释至适当浓度，重复前述步骤即可。欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速？欲回收动物细胞，其离心速率一般为300xg(约1,000rpm)，5-10分钟，过高之转速，将造成细胞死亡；细胞之接种密度为何？依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因；细胞冷冻培养基之成份为何？动物细胞冷冻保存时Z常使用的冷冻培养基是含5-10%DMSO(dimethyl sulfoxide)和90-95%原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之。注意：由于DMSO稀释时会放出大量热能，故不可将DMSO直接加入细胞液中，必须使用前先行配制完成；DMSO之等级和无菌过滤之方式为何？冷冻保存使用之DMSO等级，必须为Tissue culture grade之DMSO，其本身即为无菌状况，次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于4°C，避免反复冷冻解冻造成DMSO之裂解而释出有害物质，并可减少污染之机会。若要过滤DMSO，则须使用耐DMSO之Nylon材质滤膜；冷冻保存细胞之方法？冷冻保存方法一：冷冻管置于4°C 30~60分钟→ (-20°C 30分钟)→-80°C 16~18小时(或隔夜)→液氮槽vaporphase长期储存。冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3°C至–80°C以下，再放入液氮槽vapor phase长期储存。-20°C不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80°C冰箱中，惟存活率稍微降低一些；细胞欲冷冻保存时，细胞冷冻管内应有多少细胞浓度？冷冻管内细胞数目一般为1x10(6)cells/ml vial，融合瘤细胞则以5x10(6)cells/ml vial为宜；应如何避免细胞污染？细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之Z好方法；如果细胞发生微生物污染时，应如何处理？直接灭菌后丢弃之。
SHP-77细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长，少量贴壁；细胞形态特性：上皮细胞；细胞传代方法：3-4天换液1次。
NCI-H1092[H1092]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
IPEC-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
厌氧菌琼脂，英文名：Anaerobic Agar，用途：用于厌氧微生物的培养
乳酸杆菌选择性肉汤(LBS肉汤)，英文名：Lactobacillus Selective Broth，用途：用于乳酸菌的选择性培养,每升需添加1.32ml冰乙酸
WS琼脂，英文名：WS Agar，用途：用于沙门氏菌选择性分离
酵母基酸缺陷型合成琼脂培养基(尿嘧啶/亮酸/色酸缺陷)，英文名：Yeast Synthetic Drop-out Agar Medium，用途：用于酵母杂交及遗传突变株的筛选和研究
小鼠抗心磷脂抗体IgG(ACA-IgG)ELISA试剂盒，英文名：Mouse ACA-IgG ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠丝切蛋白2(CFL2)ELISA试剂盒，英文名：CFL2 ELISA Kit，规格：48T/96T
人表面膜免疫球蛋白D(mIgD)ELISA试剂盒，英文名：Human mIgD ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠环腺苷反应元件结合蛋白(CREB)ELISA试剂盒，英文名：CREB ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
ECV-304细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HCT-116细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：3传代，3-4天换液一次
HuNS1细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长 ；细胞形态特性：淋巴母细胞样；细胞传代方法：2-3天换液1次。
GLC-15细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
SR-786细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
D407细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长 ；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2传代
HSC-4细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞；细胞传代方法：1 x 10^5 cells/10cm dish
人化物细胞内通道蛋白1(CLIC1)ELISA试剂盒，英文名：Human CLIC1 ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞传代方法：消化3-5分钟，1：2,3天内可长满
HSAEC1-KT细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
RS4;11细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长；细胞形态特性：成淋巴细胞；细胞传代方法：每周2-3次
BCECs细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
gpc-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
P3X63Ag8细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
SDBMSC细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
clone 9细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
酵母粉葡萄糖霉素琼脂(YGC)，英文名：Yeast Extract Glucose Chloramphenicol Agar，用途：用于霉菌酵母菌的分离和计数
TYA培养基基础，英文名：TYA Medium Base，用途：用于厌氧菌的培养,每升培养基中需添加3g醋酸铵
无盐麦康凯琼脂，英文名：MacConkey Agar Without Salt，用途：用于尿液中变形杆菌和大肠埃希氏菌的分离
pH7.0化钠-蛋白胨缓冲液，英文名：Buffered Sodium Chloride-peptone Solution pH 7.0，用途：用于样品制备
细胞生长特性：贴壁生长
Hs865.Sk细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：成纤维细胞样；细胞传代方法：1：2传代
NCI-H650细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长；细胞形态特性：球形的；细胞传代方法：1：3-1：6传代；
HRPTEpiC细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCI-H217细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长 ；细胞形态特性：上皮细胞样；细胞传代方法：1：2-1：4传代，每周2-3次。
CCD-841 CoTr细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
KPL-4细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
脑-心浸萃液态培养基，英文名：Brain-Heart Extraction Liquid Medium，用途：用于粪链球菌验证,也可用于苛养菌的培养
肌醇测定培养基，英文名：Inositol Assay Broth，用途：用于肌醇的测定
支原体肉汤培养基，英文名：Mycoplasma Broth Medium，用途：用于支原体的培养
大豆酪蛋白肉汤培养基(胰酪大豆胨液体培养基)，英文名：Fluid Soybean-Casein Digest Broth，用途：用于无菌检查和细菌培养
人角蛋白18(KRT18)ELISA试剂盒，英文名：Human KRT18 ELISA Kit，规格：48T/96T
