ATN-1人T细胞白血病细胞系 复苏技术经验丰富
细胞背景资料:详见相关文献介绍
MC3T3-E1 Subclone 24细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
SK-OV-3细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:上皮细胞样;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
RH35细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
KM-12-SM细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
造成实验室细胞污染常见情况总结:细胞培养中Z常见污染的是细菌、真菌和支原体污染。细胞一旦污染,大多数较难处理。那么,哪些情况我们不注意的话就会造成细胞污染呢?我们根据常见细胞培养实验分析总结下。【违规操作】1)为节省时间,有人已经用超净台四个多小时,不开紫外灭菌30min,酒精擦拭后直接开始试验;2)器材或者溶液很久没用,未检测是否污染而直接使用;离心管多次使用,枪头为了方便交叉使用;3)超净台不点酒精灯;点了酒精灯放在右上角,而你在左下角做试验;4)不带手套,徒手操作;5)细胞培养间配备枪式移液器、手术器械、离心机、冰箱等专用仪器设备以及专用的实验服和拖鞋,未定期消毒。专用物品被带出传代细胞使用。培养细胞过程中使用的所有实验用具,如移液管、一次性枪头、一次性塑料离心管、冻存管等未按要求灭菌使用(通常需121°C高压灭菌20分钟后37%烤干备用)。超净台和桌面,东西太多太乱:超净台不是储物箱,什么培养皿、各种规格的板子、枪头就不要堆在超净台!这样就会有许多紫外线顾不到的卫生死角。传代细胞其他的桌面,切忌东西堆积如山,不要将酒精棉球、标签纸、牛皮纸买来后全部堆在传代细胞!一不小心“飘”进你的细胞培养板里,细胞就会养的不好,啥时候死了都不知道!【培养箱太久没清洁】细胞污染了,并非直接扔了培养皿就不管了,首先你还得看看这个恒温培养箱里其他培养皿或孔板里的细胞是否污染,如果有而且好几个板子都有类似的污染块,那很可能是培养箱中的水或者空气污染了,得给培养箱做个大扫除,重新酒精消毒,照紫外;孵箱里的水,水没了要记得加,还得记得十天半个月的就用酒精擦擦托盘。【传代细胞人多口杂,难管理】在传代细胞这种卫生要求高,人多了,不确定因素多了,难以保证试验在无菌条件下操作。出入试验室,实验服当风衣穿,不扣纽扣,不戴,就容易造成细胞污染;超净台做实验时,喜欢说话聊着做试验,要是还不带口罩,里面就有很多细菌等着去攻击你的细胞呢!
GOTO细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:成纤维细胞;细胞传代方法:10^4 cells/ml
CAL-33细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
HPAEC细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
EC-GI-10细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
HCC70细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:上皮样;细胞传代方法:1:4-1:6传代;每周换液2-3次。
HULEC-5a细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
DAN-G细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
U-87MG细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
3T3 clone A31细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
YTMLC-90细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
HPAC细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:上皮样;细胞传代方法:1:2传代
GB-1细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:上皮细胞;细胞传代方法:1:2传代
细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
碱性胆盐琼脂,英文名:Alkaline Bile Salt Agar,用途:用于霍乱弧菌的选择性分离
选择性牛心汤增菌培养基,英文名:Selective Cattle Heart Enrichment Broth,用途:用于链球菌选择性增菌
蔗糖胰蛋白胨肉汤,英文名:Sucrose Tryptone Broth,用途:用于致病性嗜水气单胞菌的斑点酶联免疫试验
伊红美蓝琼脂(EMB),英文名:Levine Eosin-Methylene Blue-Agar Medium,用途:用于肠道菌选择性分离
选择性APS超级肉汤基础,英文名:Select APS Super Broth Base,用途:非动物源配方,用于培养重组大肠杆菌菌株,提高质粒
CCFA琼脂基础,英文名:Cycloserine Cefoxitin Fructose Agar Base,用途:用于艰难梭菌的选择性分离.每200ml添加1支D-环丝酸溶液、2支50%卵黄盐水悬液、1支头孢西丁溶液
Hep3B细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:上皮样;细胞传代方法:1:4—1:6传代,每周换液2次
KYSE180细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
HHSteC细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
KMS11细胞专业复苏;细胞生长特性:悬浮;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装:复苏形式:T25培养瓶(一瓶)或冻存形式:1ml冻存管(两支)
WM-266-4细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2传代
HMEC-1细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
FBM细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
BT-B细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:上皮细胞样;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
为了防止因污染或技术原因使长期培养功亏一篑,考虑到培养细胞因传代而迟早会出现变异,有时因寄赠、交换和购买,培养细胞从一个实验室转运到另一个实验室,的策略是进行低温保存。这对于维持一些特殊细胞株的遗传特性极为重要。现简要介绍深低温保存法(-70℃~-196℃)的特点。细胞深低温保存的基本原理是:在-70℃以下时,细胞内的酶活性均己停止,即代谢处于完全停止状态,故可以长期保存。细胞低温保存的关键,在于通过0~20℃阶段的处理过程。在此温度范围内,水晶呈针状,极易招致细胞的严重损伤。冻存细胞的复苏:冻存细胞较脆弱,要轻柔操作。冻存细胞要快速融化,并直接加入完全生长培养基中。若细胞对冻存剂(DMSO或甘油)敏感,离心去除冻存培养基,然后加入完全生长培养基中。直接铺板方法:取出贮存细胞,37℃水浴中快速融化;直接用完全生长培养基铺板细胞。1ml冻存细胞使用10~20ml完全生长培养基。进行活细胞计数,细胞接种应该至少在3×10(5)活细胞/ml;培养细胞12到24小时,更换新鲜的完全生长培养基,去除冻存剂。离心方法:取出贮存细胞,37℃水浴中快速融化;把1到2ml冻存细胞加入到大约25ml完全生长培养基,轻轻混匀;以大约80x离心2到3分钟;弃去上清。在完全生长培养基轻轻再次悬浮细胞,并且进行活细胞计数。细胞铺板,细胞接种应该至少为3×10(5)活细胞/ml。细胞的分化:一个成年人全身细胞总数约1012个,可以区分为200多种不同类型的细胞:形态结构,代谢,行为,功能等各不相同。追根溯源,这么多种细胞均来自一个受精卵细胞。所以,通常把发育过程中,细胞后代在形态、结构和功能上发生差异的过程称为细胞分化。细胞分化发生在胚胎阶段,也发生在胎儿出生以后,乃至成人阶段。例如,人体血细胞的产生和分化,这个过程在人的一生中一直持续着。由旺盛生长不断分裂的细胞,转入分化,通常从细胞周期中G1期开始时一个确定的点G0点“逃逸”出细胞周期。旺盛生长分裂的细胞和各种分化了的细胞,它们的基因表达和代谢活动各不相同。
143TK-细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
人角蛋白14(KRT14)ELISA试剂盒,英文名:Human KRT14 ELISA Kit,规格:48T/96T
小鼠剪接因子3B亚基3(SF3B3)ELISA试剂盒,英文名:Mouse SF3B3 ELISA Kit,规格:48T/96T
小鼠嗜酸性白血球相关之RNA水解酵素家族成员12(EAR12)ELISA试剂盒,英文名:Mouse EAR12 ELISA Kit,规格:48T/96T
人溶血磷脂酶Ⅰ(LYPLA1)ELISA试剂盒,英文名:Human LYPLA1 ELISA Kit,规格:48T/96T
大鼠甲状腺素转运蛋白(TTR)ELISA试剂盒,英文名:TTR ELISA Kit,规格:48T/96T
人糖原蛋白1(GYG1)ELISA试剂盒,英文名:Human GYG1 ELISA Kit,规格:48T/96T
人PL7抗体/抗苏酰tRNA合成酶(PL7)ELISA试剂盒,英文名:Human PL7 ELISA Kit,规格:48T/96T
大鼠G蛋白β1(GNb1)ELISA试剂盒,英文名:GNb1 ELISA Kit,规格:48T/96T
大鼠β淀粉样蛋白(Aβ)ELISA试剂盒,英文名:Aβ ELISA Kit,规格:48T/96T
木糖-明胶培养基,英文名:Xylose-Gelatin Medium,用途:用于明胶液化试验
DCLS琼脂,英文名:Deoxycholate Citrate Lactose Sucrose Agar,用途:用于沙门氏、志贺氏菌选择性分离
Iso-Sensitest 肉汤,英文名:Iso-Sensitest Broth,用途:用于抗生素药敏试验
Schaedler肉汤,英文名:Schaedler Broth,用途:用于厌氧菌的增菌
293(HEK-293,HEK293)细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
Changliver细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:上皮细胞样;细胞传代方法:消化3-5分钟。1:2。3天内可长满。
V79-4细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分
曙红亚甲蓝琼脂培养基(EMB),英文名:Eosin-Methylene Blue Lactose Agar,用途:用于大肠菌群测定
杜氏缓冲液,英文名:Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline(D-PBS),用途:用于细胞的洗涤、保存和培养,也用于微生物的培养
结晶紫中性红胆盐琼脂(含葡萄糖和乳糖),英文名:Violet Red Bile Agar with Glucose and Lactose,用途:用于肠道菌选择性分离和计数
马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基(含霉素),英文名:Potato Dextrose Agar with Chloramphenicol,用途:用于霉菌和酵母菌计数
抗生素培养基A(PH7.0),英文名:Medium A(PH7.0),用途:用于抗生素检测
细胞来源说明:细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
细胞形态特性:详见细胞说明书
AAV293细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
NCI-H1341细胞专业复苏;细胞生长特性:悬浮生长;细胞形态特性:圆形细胞;细胞传代方法:3-4天换液1次。
大鼠骨形成蛋白1(BMP1)ELISA试剂盒,英文名:BMP1 ELISA Kit,规格:48T/96T
人细胞外信号调节激酶3(ERK3)ELISA试剂盒,英文名:Human ERK3 ELISA Kit,规格:48T/96T
大鼠A109958 Citron蛋白(Cit)ELISA试剂盒,英文名:Cit ELISA Kit,规格:48T/96T
人半胱酸蛋白酶YZ剂B(CSTB)ELISA试剂盒,英文名:Human CSTB ELISA Kit,规格:48T/96T
大鼠组蛋白乙酰基转移酶1(HAT1)ELISA试剂盒,英文名:HAT1 ELISA Kit,规格:48T/96T
细胞培养过程中相关问题总结:悬浮性细胞应如何继代处理?一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中,稀释细胞浓度即可,若培养液太多时,可将培养角瓶口端稍微抬高,直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养角瓶,加入新鲜培养基稀释至适当浓度,重复前述步骤即可。欲将一般动物细胞离心下来,其离心速率应为多少转速?欲回收动物细胞,其离心速率一般为300xg(约1,000rpm),5-10分钟,过高之转速,将造成细胞死亡;细胞之接种密度为何?依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因;细胞冷冻培养基之成份为何?动物细胞冷冻保存时Z常使用的冷冻培养基是含5-10%DMSO(dimethyl sulfoxide)和90-95%原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之。注意:由于DMSO稀释时会放出大量热能,故不可将DMSO直接加入细胞液中,必须使用前先行配制完成;DMSO之等级和无菌过滤之方式为何?冷冻保存使用之DMSO等级,必须为Tissue culture grade之DMSO,其本身即为无菌状况,次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中,保存于4°C,避免反复冷冻解冻造成DMSO之裂解而释出有害物质,并可减少污染之机会。若要过滤DMSO,则须使用耐DMSO之Nylon材质滤膜;冷冻保存细胞之方法?冷冻保存方法一:冷冻管置于4°C 30~60分钟→ (-20°C 30分钟)→-80°C 16~18小时(或隔夜)→液氮槽vaporphase长期储存。冷冻保存方法二:冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3°C至–80°C以下,再放入液氮槽vapor phase长期储存。-20°C不可超过1小时,以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80°C冰箱中,惟存活率稍微降低一些;细胞欲冷冻保存时,细胞冷冻管内应有多少细胞浓度?冷冻管内细胞数目一般为1x10(6)cells/ml vial,融合瘤细胞则以5x10(6)cells/ml vial为宜;应如何避免细胞污染?细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之Z好方法;如果细胞发生微生物污染时,应如何处理?直接灭菌后丢弃之。
酵母基酸缺陷型合成琼脂培养基(尿嘧啶/亮酸/色酸缺陷),英文名:Yeast Synthetic Drop-out Agar Medium,用途:用于酵母杂交及遗传突变株的筛选和研究
改良Y培养基,英文名:Modified Y Medium,用途:用于小肠结肠炎耶尔森氏菌分离
pH7.4盐缓冲液(PBS),英文名:pH7.4 PBS Broth,用途:用于样品制备
枯草芽孢杆菌优化培养基,英文名:Bacillus Subtilis Optimization Medium,用途:用于枯草芽孢杆菌优化培养(含麸皮)
DPD培养基,英文名:DPD Medium,用途:用于原生质体的培养