RCC10RGB人肾细胞癌细胞系 复苏技术经验丰富

RCC10RGB人肾细胞癌细胞系 复苏技术经验丰富
细胞背景资料：详见相关文献介绍
RL-952细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
BV2细胞专业复苏；细胞生长特性：半贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
SCC-25细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞；细胞传代方法：1：3-1：10传代，2-3天换液1次。
NP69细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞培养实验中常见问题总结：1)一般客户拿到细胞后，应该注意什么？客户收到细胞后先不开盖，放在培养箱静置若干小时后(看细胞密度而定)在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照(建议受收细胞后观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各一张)，排除细胞本身污染的情况；收到细胞未开封，出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。收到细胞时如无异常情况，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养液吸出，留下10ml培养液继续培养；超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞，吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。细胞消化液建议使用PBS配制，慎用Hanks液配制；2)快递细胞多久能到，是寄冻存的细胞还是复苏好的细胞？我们采用快递发货，一般外地2--3天，寄细胞前请确认当地温度，如果气温低于4度的，则采用邮寄冻存细胞；3)可否使用与原先培养条件不同之培养基？不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活；4)可否使用与原先培养条件不同之血清种类？不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。
Kasumi-6细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
MeWo细胞专业复苏；细胞生长特性：混合生长；细胞形态特性：成纤维细胞；细胞传代方法：1：3-1：5传代，2-3天换液1次。
CCD-1112sk细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCI-H735[H735]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NEI-H209细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
293AD细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
SW 982细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
SCC-090细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
LIXC-002细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞样；细胞传代方法：1：3传代,3-4天传1次
M21细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
SW-900细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞；细胞传代方法：1：2传代；每周换液2-3次。
NCL-H460细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
MH肉汤Ⅱ(阳离子调节)/CAMHB，英文名：Mueller Hinton Ⅱ Broth（Cation-Adjusted）/CAMHB，用途：即CAMHB,用于细菌的敏感性试验
兔血浆纤维蛋白原(RPF)琼脂培养基基础，英文名：RPF Agar Medium Base，用途：用于凝固酶阳性葡萄球菌检测,需添加兔血浆和YJ剂
Andrade氏糖类肉汤基础，英文名：Andrade′s Carbohydrate Broth Base，用途：用于细菌的糖发酵试验,需加糖
葡萄糖半固体琼脂，英文名：Dextrose Semisolid Agar，用途：用于葡萄糖利用(产酸、产气)实验
化钠营养琼脂，英文名：NaCl Nutrient Agar，用途：用于副溶血性弧菌的纯化
BL琼脂基础，英文名：BL Agar Base，用途：用于双歧杆菌的分离和培养,需添加5%脱纤维马血
MN60细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
JeKo-1细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
OVISE细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞；细胞传代方法：5 x 10^4 cells/ml
HCC1954 BL细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装：复苏形式：T25培养瓶(一瓶)或冻存形式：1ml冻存管(两支)
MDCK[NBL-2]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCI-H146细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长；细胞形态特性：上皮细胞；细胞传代方法：1：2—1：6传代，每周换液2-3次
NCI-H1404[H1404]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
3T3swiss细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞培养中支原体污染的经验分享：支原体是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物，大小一般在0.3-0.5um之间，呈高度多形性，有球形、杆形、丝状、分枝状等多种形态。它不同于细胞，也不同于病毒。支原体用普通染色法不易着色，用姬姆萨染色很浅，革兰染色为阴性。支原体可在鸡胚绒毛尿囊膜上或细胞培养中生长，营养要求比细菌高。细胞培养(特别是传代细胞)被支原体污染是个世界性问题。在细胞培养中支原体感染发生率达到63%，支原体感染发生后能改变细胞的DNA,RNA及蛋白表达，又不能通过可视法对其进行检测，而且它对细胞的生长率影响较小，不易引起注意。国内外研究表明，95%以上是以下四种支原体：口腔支原体(M.orale)、精酸支原体(M.arginini)、猪鼻支原体(M.hyorhinis)和莱氏无胆甾原体(A.laidlawii)，为牛源性。以上是Z常见的污染细胞培养的支原体菌群，但能够污染细胞的支原体种类是很多的，国外调查证明，大约有二十多种支原体能污染细胞，有的细胞株可以同时污染两种以上的支原体。支原体污染的来源包括工作环境的污染、操作者本身的污染(一些支原体在人体是正常菌群)、培养基的污染、污染支原体的细胞造成的交叉污染、实验器材带来的污染和用来制备细胞的原始组织或器官的污染。组织细胞培养工作中，主要从以下几个方面来预防支原体的污染：控制环境污染;严格实验操作；细胞培养基和器材要保证无菌；在细胞培养基中加入适量的抗生素。支原体污染细胞后，特别是重要的细胞株，有必要清除支原体，常用方法有抗生素处理、抗血清处理、抗生素加抗血清和补体联合处理。支原体Z突出的结构特征是没有细胞壁，一般来讲，对作用于细胞壁生物合成的抗生素，如万古霉素等完全不敏感；对多粘菌素(polymycin)、利福平、磺胺药物普遍耐药。对支原体Z有YZ活性及常用于支原体感染ZL的抗生素是四环素类、大环内酯类及一些喹诺酮;其他类抗生素如基糖苷类、霉素对支原体有较小YZ作用，所以常不用来作为支原体感染的化学ZL剂。
GH3细胞专业复苏；细胞生长特性：疏松贴壁，有漂浮的细胞簇；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：2传代
大鼠胰岛淀粉样多肽(IAPP)ELISA试剂盒，英文名：IAPP ELISA Kit，规格：48T/96T
人核仁蛋白14(NOL14)ELISA试剂盒，英文名：Human NOL14 ELISA Kit，规格：48T/96T
人睾酮受体(TR)ELISA试剂盒，英文名：Human TR ELISA Kit，规格：48T/96T
人Sideroflexin人1蛋白(SFXN1)ELISA试剂盒，英文名：Human SFXN1 ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠磷蛋白关联鞘糖脂微区2(PAG2)ELISA试剂盒，英文名：Mouse PAG2 ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠巨噬细胞炎症蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISA试剂盒，英文名：MIP-1α/CCL3 ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体-R4(STRAIL-R4)ELISA试剂盒，英文名：STRAIL-R4 ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠重肽神经丝蛋白(NEFH)ELISA试剂盒，英文名：NEFH ELISA Kit，规格：48T/96T
人三叶因子3(TFF3)ELISA试剂盒，英文名：Human TFF3 ELISA Kit，规格：48T/96T
毛藓菌琼脂1号，英文名：Trichophyton Agar #1，用途：用于毛藓菌属的鉴定
葡萄糖肉浸液肉汤，英文名：Dextrose Meat Infusion Broth，用途：用于溶血性链球菌增菌
B5培养基，英文名：B5 Medium，用途：含蔗糖20g/L，适合于愈伤组织和悬浮细胞培养
B5培养基(不含琼脂)，英文名：B5 Medium without Agar，用途：含蔗糖20g/L，适合于愈伤组织和悬浮细胞培养
DiFi细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
RKO-E6细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
GTL16细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分
肠毒素产毒培养基(不含琼脂)，英文名：Enterotoxin toxin-producing medium without Agar，用途：用于葡萄球菌产毒素检验
巴尔斯氏培养基基础，英文名：Baar,s Medium for Sulfate Reducers，用途：用于脱肠球菌等盐还原细菌的培养，每100ml添加1支35%乳酸钠溶液
缓冲MUG琼脂(BMA)，英文名：Buffered MUG Agar，用途：用于滤膜法测定大肠杆菌
MRS培养基(改良MRS培养基基础)，英文名：MRS Medium(Modified MRS Medium Base)，用途：用于乳酸菌计数,改良MRS培养基每100ml需添加1支莫匹罗星锂盐储备液
脑心浸出液肉汤(BHI/BHIB)，英文名：Brain Heart Infusion Broth，用途：用于细菌尤其是葡萄球菌的增菌和培养（SN/ISO）
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
细胞形态特性：详见细胞说明书
DMS153[DMS153]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
COLO 320HSR细胞专业复苏；细胞生长特性：半贴壁生长；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2传代。3天内可长满。
大鼠表皮脂肪酸结合蛋白5(Efabp5)ELISA试剂盒，英文名：Efabp5 ELISA Kit，规格：48T/96T
人趋化因子C-C-基元受体1(CCR1)ELISA试剂盒，英文名：Human CCR1 ELISA Kit，规格：48T/96T
人抗卵巢抗体(AOAb)ELISA试剂盒，英文名：Human AOAb ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠补体调节蛋白(CCP)ELISA试剂盒，英文名：CCP ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠YZ素βA(INB-βA)ELISA试剂盒，英文名：Mouse INB-βA ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞培养过程中相关问题总结：悬浮性细胞应如何继代处理？一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，可将培养角瓶口端稍微抬高，直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养角瓶，加入新鲜培养基稀释至适当浓度，重复前述步骤即可。欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速？欲回收动物细胞，其离心速率一般为300xg(约1,000rpm)，5-10分钟，过高之转速，将造成细胞死亡；细胞之接种密度为何？依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因；细胞冷冻培养基之成份为何？动物细胞冷冻保存时Z常使用的冷冻培养基是含5-10%DMSO(dimethyl sulfoxide)和90-95%原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之。注意：由于DMSO稀释时会放出大量热能，故不可将DMSO直接加入细胞液中，必须使用前先行配制完成；DMSO之等级和无菌过滤之方式为何？冷冻保存使用之DMSO等级，必须为Tissue culture grade之DMSO，其本身即为无菌状况，次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于4°C，避免反复冷冻解冻造成DMSO之裂解而释出有害物质，并可减少污染之机会。若要过滤DMSO，则须使用耐DMSO之Nylon材质滤膜；冷冻保存细胞之方法？冷冻保存方法一：冷冻管置于4°C 30~60分钟→ (-20°C 30分钟)→-80°C 16~18小时(或隔夜)→液氮槽vaporphase长期储存。冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3°C至–80°C以下，再放入液氮槽vapor phase长期储存。-20°C不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80°C冰箱中，惟存活率稍微降低一些；细胞欲冷冻保存时，细胞冷冻管内应有多少细胞浓度？冷冻管内细胞数目一般为1x10(6)cells/ml vial，融合瘤细胞则以5x10(6)cells/ml vial为宜；应如何避免细胞污染？细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之Z好方法；如果细胞发生微生物污染时，应如何处理？直接灭菌后丢弃之。
淀粉酪蛋白琼脂(SCA)，英文名：Starch Casein Agar(Kuster and Williams, 1964)，用途：用于链霉菌属的培养鉴定
精酸葡萄糖斜面琼脂(AGS)，英文名：Arginine Glucose Slant Agar，用途：用于霍乱弧菌的复合生化试验
亚铁琼脂，英文名：Ferrous sulfate Agar，用途：用于细菌试验
T1N3肉汤，英文名：T1N3 Broth，用途：用于霍乱弧菌的生长试验
L型细菌高渗盐增菌培养基，英文名：L-Bacterial Hypertonic Salt Broth，用途：用于样本中L型细菌增菌培养