RPTEC Cell人肾近端小管上皮细胞系 复苏技术经验丰富

RPTEC Cell人肾近端小管上皮细胞系 复苏技术经验丰富
细胞背景资料：详见相关文献介绍
TU212细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长　；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2传代
HESMC细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCI-H522 [H522]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
LC-1sq细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞培养实验中常见问题总结：1)一般客户拿到细胞后，应该注意什么？客户收到细胞后先不开盖，放在培养箱静置若干小时后(看细胞密度而定)在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照(建议受收细胞后观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各一张)，排除细胞本身污染的情况；收到细胞未开封，出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。收到细胞时如无异常情况，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养液吸出，留下10ml培养液继续培养；超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞，吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。细胞消化液建议使用PBS配制，慎用Hanks液配制；2)快递细胞多久能到，是寄冻存的细胞还是复苏好的细胞？我们采用快递发货，一般外地2--3天，寄细胞前请确认当地温度，如果气温低于4度的，则采用邮寄冻存细胞；3)可否使用与原先培养条件不同之培养基？不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活；4)可否使用与原先培养条件不同之血清种类？不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。
HFT-8810细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
CHRF细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
TGW细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：神经元细胞；细胞传代方法：1：2传代
NCI-H2228细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
JeKo-1细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
COS-6细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
BHP 10-3细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HTMC细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
UMNSAH/DF-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：成纤维母细胞样；细胞传代方法：1：2传代
NCI-H1648细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞；细胞传代方法：1：3-1：6传代
TE-8细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：消化3-5分钟。1：2。3天内可长满。
MCF10A细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：2传代
细胞传代方法：1：3—1：4传代，每周换液2—3次
阿须贝氏无氮培养基，英文名：Ashby’s Nitrogen-Free Agar，用途：用于固氮菌的培养
3.5%化钠三糖铁琼脂，英文名：3.5% TSI Agar，用途：用于弧菌生化筛选
固氮螺菌液体培养基，英文名：Azospirillum Broth Medium，用途：用于固氮螺菌的培养
TYM培养基基础，英文名：Diamond’s TrypticaseYeast Extract Maltose Complete，用途：用于阴道毛滴虫等寄生虫培养,需添加10%动物血清
巧克力血琼脂培养基基础，英文名：Chocolate Blood Agar Medium Base，用途：用于奈瑟球菌、流感嗜血杆菌的培养,需添5%~10%无菌脱纤维绵羊全血
3%NaCl基酸脱羧酶试验对照培养基，英文名：Aminoacid Decarboxylase Test Medium controls with，用途：用于弧菌的基酸试验对照
COLO-678细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HLF-a细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：成纤维细胞；细胞传代方法：1：2-1：4传代；每周换液2次。
B16-F1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞样；细胞传代方法：1：2传代
SBC-3细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装：复苏形式：T25培养瓶(一瓶)或冻存形式：1ml冻存管(两支)
CCD-19Lu细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
COLO 320DM细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮+贴壁；细胞形态特性：淋巴细胞；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
TE354.T细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长　；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2传代
HPAF2细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
为了防止因污染或技术原因使长期培养功亏一篑，考虑到培养细胞因传代而迟早会出现变异，有时因寄赠、交换和购买，培养细胞从一个实验室转运到另一个实验室，的策略是进行低温保存。这对于维持一些特殊细胞株的遗传特性极为重要。现简要介绍深低温保存法(-70℃~-196℃)的特点。细胞深低温保存的基本原理是：在-70℃以下时，细胞内的酶活性均己停止，即代谢处于完全停止状态，故可以长期保存。细胞低温保存的关键，在于通过0~20℃阶段的处理过程。在此温度范围内，水晶呈针状，极易招致细胞的严重损伤。冻存细胞的复苏：冻存细胞较脆弱，要轻柔操作。冻存细胞要快速融化，并直接加入完全生长培养基中。若细胞对冻存剂(DMSO或甘油)敏感，离心去除冻存培养基，然后加入完全生长培养基中。直接铺板方法：取出贮存细胞，37℃水浴中快速融化；直接用完全生长培养基铺板细胞。1ml冻存细胞使用10~20ml完全生长培养基。进行活细胞计数，细胞接种应该至少在3×10(5)活细胞/ml；培养细胞12到24小时，更换新鲜的完全生长培养基，去除冻存剂。离心方法：取出贮存细胞，37℃水浴中快速融化；把1到2ml冻存细胞加入到大约25ml完全生长培养基，轻轻混匀；以大约80x离心2到3分钟；弃去上清。在完全生长培养基轻轻再次悬浮细胞，并且进行活细胞计数。细胞铺板，细胞接种应该至少为3×10(5)活细胞/ml。细胞的分化：一个成年人全身细胞总数约1012个，可以区分为200多种不同类型的细胞：形态结构，代谢，行为，功能等各不相同。追根溯源，这么多种细胞均来自一个受精卵细胞。所以，通常把发育过程中，细胞后代在形态、结构和功能上发生差异的过程称为细胞分化。细胞分化发生在胚胎阶段，也发生在胎儿出生以后，乃至成人阶段。例如，人体血细胞的产生和分化，这个过程在人的一生中一直持续着。由旺盛生长不断分裂的细胞，转入分化，通常从细胞周期中G1期开始时一个确定的点G0点“逃逸”出细胞周期。旺盛生长分裂的细胞和各种分化了的细胞，它们的基因表达和代谢活动各不相同。
HMC细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2传代
人前列腺素还原酶1(PTGR1)ELISA试剂盒，英文名：Human PTGR1 ELISA Kit，规格：48T/96T
人丝蛋白Cγ(FLNC)ELISA试剂盒，英文名：Human FLNC ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠α-骨胶原交联(α-CTx)ELISA试剂盒，英文名：Mouse α-CTx ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠磷脂爬行酶2(PLSCR2)ELISA试剂盒，英文名：Mouse PLSCR2 ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠破伤风抗体(TA)ELISA试剂盒，英文名：Mouse TA ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠GATA结合蛋白4(GATA4)ELISA试剂盒，英文名：Mouse GATA4 ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠D-乳酸脱酶(D-LDH)ELISA试剂盒，英文名：Mouse D-LDH ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠肌球蛋白ⅤA(MYO)ELISA试剂盒，英文名：Mouse MYO ELISA Kit，规格：48T/96T
人孕酮(PROG)ELISA试剂盒，英文名：Human PROG ELISA Kit，规格：48T/96T
WL营养琼脂(WLN琼脂)/WL鉴别培养基基础(WLD培养基基础)，英文名：Wallerstein Laboratory Nutrient Agar，用途：制成WL鉴别培养基
Karmali氏弯曲杆菌琼脂培养基基础，英文名：Karmali’s Campylobacter Medium，用途：用于弯曲菌的选择性分离培养,每100ml添加1支Karmali氏弯曲杆菌琼脂培养基添加剂（含头孢哌酮、化血红素、万古霉素）
马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)(日本标准用)，英文名：Potato dextrose agar，用途：用于霉菌和酵母菌计数
LB肉汤(Lennox)，英文名：LB Broth,Lennox，用途：用于分子生物学中大肠杆菌的培养
RAW264.7[RAW264.7]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
143B TK细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
Jeko-1细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长；细胞形态特性：淋巴母细胞样；细胞传代方法：1：2传代。3天内可长满。
细胞生长特性：贴壁生长
EF-18琼脂基础，英文名：EF-18 Agar Base，用途：用于沙门氏菌滤膜法检验,每100ml中添加1支新生霉素溶液
盐蛋白胨水培养基，英文名：Nitrate peptone water Medium，用途：用于细菌的盐分解试验
盐还原菌培养基B，英文名：Postgate’s Medium B for Sulfate Reducers，用途：用于脱微生物的分离与培养，每100ml添加1支35%乳酸钠溶液
TYA培养基基础，英文名：TYA Medium Base，用途：用于厌氧菌的培养,每升培养基中需添加3g醋酸铵
桔汁肉汤(10倍浓缩)，英文名：Orange Serum Broth Concentrate 10×，用途：用于耐酸细菌的培养
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
细胞形态特性：上皮样
A-72细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
RMD9细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
人转化生长因子受体(TGFR)ELISA试剂盒，英文名：Human TGFR ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠促肾上腺皮质素释放激素受体(CRH-R)ELISA试剂盒，英文名：Mouse CRH-R ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠肝肾骨碱性酶(ALPL)ELISA试剂盒，英文名：ALPL ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠肿瘤蛋白p63(TP63)ELISA试剂盒，英文名：TP63 ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠基质Gla蛋白(MGP)ELISA试剂盒，英文名：Mouse MGP ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞消化过程总结：其实绝大部分细胞消化的时候是只要用胰酶润洗一遍即可，吸去胰酶后，残留的那些无法计算体积的附着在细胞表面的微量胰酶在37度一般不到2min足够消化细胞（绝大部分1min不到）。对于这些细胞原则上不要用胰酶孵育细胞，连续这样传代，对细胞伤害很大。简单的程序是PBS润洗吸去，胰酶润洗吸去，然后37度消化。2，什么算是消化好了呢？不是细胞全部成间隔分布很离散的单个圆形才算消化好了，一般你肉眼观察贴壁细胞层，只要能移动了，多半呈沙壮移动，其实已经可以了，很多人喜欢把细胞消化或者吹打成完全分离细胞，这是没有必要的。一般能移动了，说明细胞与培养基质材料的附着已经消失了，细胞之间的附着也已经消失了，细胞已经独立分布了（虽然没有呈现很广的离散分布）。这个时候应该停止消化，不要等到看到镜下所有细胞都分离得非常好，间隙很大，才停止。细胞就是完全成单个细胞悬液，之后在贴壁的过程中仍然会聚集，这个是贴壁培养的细胞，尤其是肿瘤细胞的一个特性，无论死活的细胞都是如此，你可以尝试，准备的单个细胞悬液，贴壁后观察细胞，仍然是几个几个细胞聚集在一起。一些悬浮培养细胞也是如此，容易聚集，不要去尝试过几个小时就拿出来吹打成单细胞悬液（不要笑，这个是初养悬浮细胞的人常犯的错误，以为悬浮培养就是一个一个分开）。细胞只要能从基质上脱离下来，这个时候即使是成片的（比如Calu-3细胞），吹打不超过20次后（一般10次即可），成小规模聚集（10个细胞左右），是正常的，不要试图再去延长消化时间，或者像有的同学那样吹打1h，等待单细胞悬液出现。比较难消化的细胞（润洗方法5min还不能消化），比如HCT15, LS411和KM12，这样的细胞一般需要用少量胰酶孵育，但也不需要很多，一般100mm dish，一次Z多加入500ul，就足够了，一般我加300ul。即使这样难消化的细胞，一般不超过5min，即可见细胞成片移动，就应该停止消化。一些正常细胞也会有难消化的时候，比如tsDC细胞，但也只要用少量胰酶孵育，3min左右即可看到成片沙状移动。
发根农杆菌液体培养基，英文名：Agrobacterium rhizogene Broth Medium，用途：用于发根农杆菌的培养
3%NaCl赖酸脱羧酶试验培养基，英文名：Lysine-decarboxylase Test Medium with 3%NaCl，用途：用于弧菌的赖基酸脱羧酶试验
紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基/结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂，英文名：Violet Red Bile Glucose Agar，用途：用于肠道菌计数
Starky代钠琼脂培养基，英文名：Starky -Na2S2O3 Agar Medium，用途：用于氧化杆菌的培养
乳糖TTC琼脂基础，英文名：Lactose TTC Agar Base，用途：用于水中大肠菌群的滤膜法测定,每200ml添加1支0.5%TTC溶液