SV-HUC-1人膀胱上皮永生化细胞系 复苏技术经验丰富

SV-HUC-1人膀胱上皮永生化细胞系 复苏技术经验丰富
细胞背景资料：详见相关文献介绍
L6细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：成肌细胞样；细胞传代方法：1：2传代
ZR-75-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：4-1：6传代；每周换液2-3次。
NCI-H1838细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞；细胞传代方法：1：3-1：4传代；每周换液2次。
QGY7703细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞培养实验中常见问题总结：1)一般客户拿到细胞后，应该注意什么？客户收到细胞后先不开盖，放在培养箱静置若干小时后(看细胞密度而定)在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照(建议受收细胞后观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各一张)，排除细胞本身污染的情况；收到细胞未开封，出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。收到细胞时如无异常情况，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养液吸出，留下10ml培养液继续培养；超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞，吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。细胞消化液建议使用PBS配制，慎用Hanks液配制；2)快递细胞多久能到，是寄冻存的细胞还是复苏好的细胞？我们采用快递发货，一般外地2--3天，寄细胞前请确认当地温度，如果气温低于4度的，则采用邮寄冻存细胞；3)可否使用与原先培养条件不同之培养基？不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活；4)可否使用与原先培养条件不同之血清种类？不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。
HMSC细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HKBML细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HFT-8810细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
CCF-STTG1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：星形胶质细胞；细胞传代方法：1：3—1：6传代；每周换液2-3次
Malme-3M细胞专业复苏；细胞生长特性：混合生长；细胞形态特性：成纤维细胞；细胞传代方法：1：2-1：4传代，2天换液1次。
T-HSC细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
M059K细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：成纤维细胞；细胞传代方法：1：6-1：8传代；每周换液2-3次。
Caco-2[Caco2]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
QSG-7701细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：消化3-5分钟，1：2,3天内可长满
NCI-H1435[H1435]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
SW900细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HUVEC-12细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞传代方法：1：2传代
梭菌增菌培养基，英文名：Clostridium Enrichment Medium，用途：用于梭菌的增菌培养
Elliker琼脂，英文名：Elliker Agar，用途：用于乳酸杆菌、乳酸链球菌的培养
淋病奈瑟菌琼脂培养基基础，英文名：N.gonorrhoeae Agar Medium Base，用途：用于淋病奈瑟菌的分离与培养,需添加7%无菌脱纤维绵羊全血
含甲基绿的DNA酶试验琼脂，英文名：Dnase Test Agar with Methyl Green，用途：用于核糖核酸酶检测,含0.2%DNA
番茄汁琼脂，英文名：Tomato Juice Agar，用途：用于乳酸菌的培养和计数
麦康凯肌醇阿东醇羧苄青霉素琼脂(MIAC)基础，英文名：MIAC Agar Base，用途：用于克雷伯氏菌选择性分离,每100ml添加1支羧苄青霉素
mpc-5细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长　；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2传代
HM细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
SW1417[SW-1417]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HCT-15细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：2传代
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装：复苏形式：T25培养瓶(一瓶)或冻存形式：1ml冻存管(两支)
SF-539细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
SW 900[SW-900,SW900]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HCC1806细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HCCIH02细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
冷冻细胞解冻程序：依据细胞株数据单指定之基础培养基种类、血清种类和其它指定之成份和比例，制备培养基。绝大多数之细胞均无法立即适应不同之基础培养基或不同之血清种类，若因实验需要，必须有所不同时，务必以缓慢比例渐次改变培养基组成，确定细胞适应后，方进行所需之实验。FBS(fetal bovine serum,胚牛血清), CS(calf serum,小牛血清)和HS(horse serum,马血清)，对细胞而言差异极大，请务必依据细胞株资料单指定之血清种类培养之。将培养基置于37°C水槽中回温，回温后喷以70%酒精并擦拭之，移入无菌操作台内。取出冷冻管，立即放入37°C水槽中快速解冻，水面高度不可接近或高过冷冻管之盖沿，否则易发生污染。轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化后，以70%ethanol擦拭冷冻管外部，移入无菌操作台内。依据细胞种类和浓度，于无菌操作台内取10ml培养基加至T25或T75flask中。取出已解冻之细胞悬浮液，缓缓加入T25或T75flask内之培养基，混合均匀，放入37°C，5%CO2培养箱培养。对绝大多数细胞而言，1%以下之冷冻保护剂DMSO，不会对细胞之贴附或活化有不良影响，不需立刻由解冻细胞中去除，待第二天确定细胞生长或贴附良好后再去除即可。惟对极少数因对DMSO敏感或会造成细胞分化之细胞，需立即去除DMSO者，则可将解冻后之细胞悬浮液放入5-10ml培养基中，离心300xg(约1000rpm)，5分钟，小心移去上清液，加入适量新鲜培养基，将细胞均匀混合后，转移至培养瓶中，再放入37°C，5%CO2培养箱培养。
HBVSMC细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
人白介素9受体(IL9R)ELISA试剂盒，英文名：Human IL9R ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠本周蛋白(BJP)ELISA试剂盒，英文名：BJP ELISA Kit，规格：48T/96T
人着丝粒蛋白H(CENPH)ELISA试剂盒，英文名：Human CENPH ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠基质金属蛋白酶2/明胶酶A(MMP-2/Gelatinase A)ELISA试剂盒，英文名：Mouse MMP-2/Gelatinase A ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠白介素25(IL25)ELISA试剂盒，英文名：IL25 ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠蛋白激酶C-γ(PKCg)ELISA试剂盒，英文名：PKCg ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠白介素1α(IL-1α)ELISA试剂盒，英文名：Mouse IL-1α ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠热休克因子1(HSF1)ELISA试剂盒，英文名：Mouse HSF1 ELISA Kit，规格：48T/96T
人微管关联蛋白1轻链3α(MAP1LC3α)ELISA试剂盒，英文名：Human MAP1LC3α ELISA Kit，规格：48T/96T
麦芽糖酵母浸粉琼脂，英文名：Maltose yeast extract agar (Okazaki and Okami, 197，用途：用于链霉菌属的培养鉴定
BBM琼脂培养基，英文名：Bold’s Basal Medium with Agar，用途：用于藻类尤其是绿藻的培养与保存
YPDA琼脂，英文名：Yeast Peptone Dextrose Adenine Agar，用途：用于分子生物学实验中酵母菌的培养
脑-心浸萃液态培养基，英文名：Brain-Heart Extraction Liquid Medium，用途：用于粪链球菌验证,也可用于苛养菌的培养
HIBEC细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
H441细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
MONOMAC6细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞生长特性：贴壁生长　
PPLO 琼脂基础，英文名：PPLO Agar Base，用途：无红,用于支原体的培养
YPDA琼脂，英文名：Yeast Peptone Dextrose Adenine Agar，用途：用于分子生物学实验中酵母菌的培养
普通琼脂，英文名：Routine Agar，用途：含0.1%二钾,用于致病性嗜水气单胞菌的纯化
固氮螺菌培养基，英文名：Azospirillum Medium，用途：用于固氮螺菌的计数培养
杜氏缓冲液(不含、镁离子)，英文名：Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline(D-PBS)，用途：用于细胞的洗涤、保存和培养,也用于微生物的培养
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
细胞形态特性：详见细胞说明书
BHK-21[C-13]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HSC-5细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
人内收蛋白1(ADD1)ELISA试剂盒，英文名：Human ADD1 ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠蛋白激酶YZ因子β(PKIβ)ELISA试剂盒，英文名：PKIβ ELISA Kit，规格：48T/96T
人赖酰氧化酶样蛋白2(LOXL2)ELISA试剂盒，英文名：Human LOXL2 ELISA Kit，规格：48T/96T
人血小板反应蛋白解整合素金属肽酶4(ADAMTS4)ELISA试剂盒，英文名：Human ADAMTS4 ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠组织因子途径YZ因子2(TFPI2)ELISA试剂盒，英文名：Mouse TFPI2 ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞传代时消化的问题：可以这样说，对于需要消化传代的细胞，每一次的消化都是对这个细胞存活与否，状态好与不好Z至关重要的考验。很多同学都遇到过这个问题，自己养的细胞开始的几代长的还挺好的，可是穿过几代之后就发现自己的细胞，状态越来越差劲了。对于这个问题，可以非常肯定地说，你的消化环节出问题了。你每一次的消化都让细胞受到较大损伤了。所以，越长越差。在消化的过程中，你加入胰酶后，所有细胞都在被胰酶消化着，但是我们忽视了一个问题就是，细胞的生长状态是不一样的，每一个细胞的贴壁情况也是不一样的，有的贴壁牢固，有的贴壁没有那么牢固的，所以，让所有的细胞消化同样的时间对细胞是不公平的，他们受到了差别待遇当然会有脾气啊。我后来对消化的方法进行了改良。争取做到因材施教呵呵。我称之为“四步消化法”。（以难消化细胞为例）；具体操作：1)首先不加胰酶，倒掉旧培养基加入少量新培养基洗1-2遍，（这是前奏，即为步，目的是将漂浮着的死细胞之类尽量洗掉。2)然后再加入少量新培养基直接吹打一遍，这一遍是把贴壁不牢固的细胞吹打下来。再用培养基洗一遍，两次所得悬液混合传入新瓶。即为第二步（你可以将这些传入新瓶培养，以与后面胰酶消化过的细胞对比观察看谁长的更好一点就知道该细胞对胰酶的敏感度了。）3)吸干净瓶内剩余液体，加入0.3ml左右的胰酶润洗一遍，吸掉弃之，再加入1ml左右的胰酶消化。消化的同时置于显微镜下观察，待细胞与细胞之间间隙明显的时候立即吸掉胰酶与干净ZDT里备用，加入新培养基开始吹打，吹打2-3遍后吸取悬液于试管或新瓶暂存。用2ml左右新培养基洗一遍与前面的混合。（你也可以传入新瓶培养，以与后面及前面的做对比。）这是第三步。4)然后把前面刚吸出来的胰酶重新加进去瓶里继续消化剩余的贴壁牢固的细胞。当然你也可以用新的胰酶，如果你们那比较富裕的话，呵呵。继续镜下观察，待剩余细胞间隙明显，细胞独立开来的时候，吸掉胰酶，加入新培养基吹打。悬液传入新瓶培养（根据实际情况你自己把握）。这是第四步。其实还可以有第五步，对于特别难消化的细胞和对胰酶特别敏感的细胞的话，你可以继续加第五步甚至第六步。为了细胞更好的状态，更漂亮的样子，没办法，你必须分多批多次消化，这样才能限度地将胰酶对细胞的损伤降到，保证细胞的状态能够。当然了，如果细胞是属于那种很容易消化的细胞，像RAW264.7，仅仅第二步就搞定了。就没必要第三步第四步了。这个是需要你在实验中能够自己用心去体会的。建议你接受一个新细胞时把各步消化的细胞分别培养起来做比较，去摸索好细胞对胰酶的要求。便于你后续实验的开展。将细胞消化分成这几步，除了是为了避免胰酶对细胞的损伤之外，还有一个更重要的作用就是，可以程度地把细胞吹打成单个单个的状态，不成片不连体。
脑-心浸萃琼脂培养基，英文名：Brain-Heart Extraction Agar Medium，用途：用于粪链球菌验证,也可用于苛养菌的培养
TPY琼脂培养基，英文名：TPY Agar Medium，用途：用于双歧杆菌的分离培养
Wilkins-Chalgren厌氧菌琼脂，英文名：Wilkins-Chalgren Anaerobe Agar，用途：用于厌氧菌的培养和药敏试验
Amies运送培养基(含活性碳)，英文名：Amies Transport Medium with carbon，用途：用于致病菌标本的采集、运输和保存
葡萄糖胰蛋白胨琼脂，英文名：Glucose Tryptone Agar，用途：用于嗜热菌芽孢计数