16HBE人支气管上皮样细胞系 复苏技术经验丰富

16HBE人支气管上皮样细胞系 复苏技术经验丰富
细胞背景资料：详见相关文献介绍
NCI-H520[H520]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
SK-MES-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：2传代
Tregs细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
TMNE细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
造成实验室细胞污染常见情况总结：细胞培养中Z常见污染的是细菌、真菌和支原体污染。细胞一旦污染，大多数较难处理。那么，哪些情况我们不注意的话就会造成细胞污染呢？我们根据常见细胞培养实验分析总结下。【违规操作】1)为节省时间，有人已经用超净台四个多小时，不开紫外灭菌30min,酒精擦拭后直接开始试验；2)器材或者溶液很久没用，未检测是否污染而直接使用；离心管多次使用，枪头为了方便交叉使用；3)超净台不点酒精灯；点了酒精灯放在右上角，而你在左下角做试验；4)不带手套，徒手操作；5)细胞培养间配备枪式移液器、手术器械、离心机、冰箱等专用仪器设备以及专用的实验服和拖鞋，未定期消毒。专用物品被带出传代细胞使用。培养细胞过程中使用的所有实验用具，如移液管、一次性枪头、一次性塑料离心管、冻存管等未按要求灭菌使用(通常需121°C高压灭菌20分钟后37％烤干备用)。超净台和桌面，东西太多太乱：超净台不是储物箱，什么培养皿、各种规格的板子、枪头就不要堆在超净台！这样就会有许多紫外线顾不到的卫生死角。传代细胞其他的桌面，切忌东西堆积如山，不要将酒精棉球、标签纸、牛皮纸买来后全部堆在传代细胞！一不小心“飘”进你的细胞培养板里，细胞就会养的不好，啥时候死了都不知道！【培养箱太久没清洁】细胞污染了，并非直接扔了培养皿就不管了，首先你还得看看这个恒温培养箱里其他培养皿或孔板里的细胞是否污染，如果有而且好几个板子都有类似的污染块，那很可能是培养箱中的水或者空气污染了，得给培养箱做个大扫除，重新酒精消毒，照紫外；孵箱里的水，水没了要记得加，还得记得十天半个月的就用酒精擦擦托盘。【传代细胞人多口杂，难管理】在传代细胞这种卫生要求高，人多了，不确定因素多了，难以保证试验在无菌条件下操作。出入试验室，实验服当风衣穿，不扣纽扣，不戴，就容易造成细胞污染；超净台做实验时，喜欢说话聊着做试验，要是还不带口罩，里面就有很多细菌等着去攻击你的细胞呢！
MPC5细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
RS1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长　；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2传代
M145细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
RPMI-8226[RPMI8826]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
Rca-B细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
LIC-0903细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
FHC细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
BEL7404细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞样；细胞传代方法：消化3-5分钟。1：2。3天内可长满。
SUP-B1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
KYSE70细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：5传代
KOPN-8细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCI-H929细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞传代方法：1：2传代
马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)(日本标准用)，英文名：Potato dextrose agar，用途：用于霉菌和酵母菌计数
精酸葡萄糖斜面琼脂(AGS)，英文名：Arginine Glucose Slant Agar，用途：用于霍乱弧菌的复合生化试验
DTA培养基，英文名：DTA Medium，用途：用于乳与乳制品中嗜热需氧芽孢数的测定
m-HPC琼脂，英文名：Heterotrophic Plate Count Agar，用途：用于菌落总数测定，每100ml培养基添加1ml甘油 (甘油)
阴沟肠杆菌分离琼脂(ECIA)，英文名：Enterobacter Cloacae Isolation Agar，用途：用于阴沟肠杆菌的分离
马铃薯葡萄糖半固体琼脂，英文名：Potato Dextrose Semisolid Agar，用途：用于椰毒假单胞菌酵米面亚种检验
SMMC-7721细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：3传代，2-3天换液一次
IOSE80细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NAMALWA细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长 ；细胞形态特性：淋巴母细胞样；细胞传代方法：1：2传代。3天内可长满。
SUDHL-5细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装：复苏形式：T25培养瓶(一瓶)或冻存形式：1ml冻存管(两支)
LOVO细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：3传代，2-3天换液一次
HS766T细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HCC2935细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞样；细胞传代方法：1：4-1：6传代，每周2-3次。
HT-1080细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：4-1：8传代；2-3天换液1次。
细胞的冻存：为避免污染造成的损失，Z小化连续细胞系的遗传改变和避免有限细胞系的老化和转化，需要冻存哺乳细胞。冻存细胞前，细胞应该特性化并检查是否污染。有几种普通培养基用来冻存细胞。对于包含有血清的培养基，成分可能如下：包含10%甘油的完全培养基；包含10%二甲基亚砜(DMSO)的完全培养基；50%细胞条件培养基和50%含有10%甘油的新鲜培养基或50%细胞条件培养基和50%含有10%二甲基亚砜的新鲜培养基。对于无血清培养基，一些普通的培养基成分可能是：50%细胞条件无血清培养基和50%包含有7.5%二甲基亚砜的新鲜的无血清培养基或包含有7.5%二甲基亚砜和10%细胞培养级BSA的新鲜无血清培养基。悬浮细胞冻存：计数将要冻存的活细胞。细胞应该处于对数生长期。以大约200～400g离心5分钟沉淀细胞，使用移液管移去上清到Z小体积，不要搅乱细胞。以1×10(7)到5×10(7)细胞/ml密度，在包含有血清的冷冻培养基中再次悬浮细胞，或者以0.5×10(7)到1×10(7)在无血清培养基中，再次悬浮细胞。分装进冻存管，将冻存管置于湿冰上或放入4℃冰箱中，5分钟内开始冷冻步骤。细胞以1℃/分钟进行冷冻，可以通过可编程序的冷冻器进行或者把隔离盒中的冻存管放到-70℃到-90℃的冰箱中，然后转移到液氮中贮存。贴壁细胞冻存：使用分离试剂从基层分离细胞，分离时尽可能温和，使对细胞的损伤减少到Z小。在完全生长培养基中，再次悬浮分离细胞，确定有活力细胞数。以大约200g离心5分钟沉淀细胞。使用移液管移去上清到Z小体积，不要搅乱细胞。以5×10(6)到1×10(6)细胞/ml密度，在冻存液中悬浮细胞。分装进冻存管，将冻存管置于湿的冰上或放入4℃冰箱中，5分钟内开始冷冻步骤。细胞以1℃/分钟进行冷冻，可以通过可编程序的冷冻器进行或者把隔离盒中的冻存管放到-70℃到-90℃的冰箱中，然后转移到液氮中贮存。
Hs 604.T细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：成纤维细胞；细胞传代方法：1：2传代；每周换液2-3次。
人Apelin(Apelin)ELISA试剂盒，英文名：Human Apelin ELISA Kit，规格：48T/96T
人半胱酸蛋白酶YZ剂A(CSTA)ELISA试剂盒，英文名：Human CSTA ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠神经软骨蛋白(NCDN)ELISA试剂盒，英文名：NCDN ELISA Kit，规格：48T/96T
人FK506结合蛋白12雷帕霉素关联蛋白(FRAP)ELISA试剂盒，英文名：Human FRAP ELISA Kit，规格：48T/96T
人基质细胞衍生因子1α(SDF1α)ELISA试剂盒，英文名：Human SDF1α ELISA Kit，规格：48T/96T
人成纤维细胞生长因子受体2(FGFR2)ELISA试剂盒，英文名：Human FGFR2 ELISA Kit，规格：48T/96T
人尿嘧啶核糖转移酶(UPRT)ELISA试剂盒，英文名：Human UPRT ELISA Kit，规格：48T/96T
人Ⅸ型胶原α1(COL9α1)ELISA试剂盒，英文名：Human COL9α1 ELISA Kit，规格：48T/96T
人突触囊泡蛋白Ⅷ(SYT8)ELISA试剂盒，英文名：Human SYT8 ELISA Kit，规格：48T/96T
LB肉汤(Lennox)，英文名：LB Broth,Lennox，用途：用于分子生物学中大肠杆菌的培养
发根农杆菌液体培养基，英文名：Agrobacterium rhizogene Broth Medium，用途：用于发根农杆菌的培养
3%NaCl赖酸脱羧酶试验培养基，英文名：Lysine-decarboxylase Test Medium with 3%NaCl，用途：用于弧菌的赖基酸脱羧酶试验
EF-18琼脂基础，英文名：EF-18 Agar Base，用途：用于沙门氏菌滤膜法检验,每100ml中添加1支新生霉素溶液
NCI-H526细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长 ；细胞形态特性：上皮细胞；细胞传代方法：每周换液2-3次。
RD细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：梭型和大的多核细胞；细胞传代方法：1：2-1：4传代，3-4天换液1次。
KLM1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞生长特性：贴壁生长　
TYA培养基基础，英文名：TYA Medium Base，用途：用于厌氧菌的培养,每升培养基中需添加3g醋酸铵
蔗糖胰蛋白胨肉汤，英文名：Sucrose Tryptone Broth，用途：用于致病性嗜水气单胞菌的斑点酶联免疫试验
甘油甘酸琼脂基础，英文名：Glycerol glycine agar (Okazaki and Okami, 1976)，用途：用于链霉菌属的培养鉴定，每100ml添加2支甘油
精酸支原体琼脂培养基，英文名：Mycoplasma Agar Medium with Arginine，用途：——用于支原体的培养
Amies运送培养基，英文名：Amies Transport Medium，用途：用于致病菌标本的采集、运输和保存
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
细胞形态特性：详见细胞说明书
NAMALWA细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长 ；细胞形态特性：淋巴母细胞样；细胞传代方法：1：2传代。3天内可长满。
KP-N-RT-BM-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：成神经细胞；细胞传代方法：1：2传代
人Sciellin蛋白(SCEL)ELISA试剂盒，英文名：Human SCEL ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠E黏蛋白/上皮黏蛋白(E-Cad)ELISA试剂盒，英文名：E-Cad ELISA Kit，规格：48T/96T
人丛状蛋白A4(PLXNA4)ELISA试剂盒，英文名：Human PLXNA4 ELISA Kit，规格：48T/96T
人巨噬细胞集落刺激因子受体(M-CSFR)ELISA试剂盒，英文名：Human M-CSFR ELISA Kit，规格：48T/96T
人细胞膜表面免疫球蛋白(SmIg)ELISA试剂盒，英文名：Human SmIg ELISA Kit，规格：48T/96T
因为细胞生长的时候肯定是要相互联系，大部分的细胞都是要成片生长的，尤其是对于贴壁细胞，单个细胞贴壁之后长着长着就长到一片去了。但是如果是成片的细胞抱团的话，传代后细胞是不能贴壁的，这样抱团的细胞就会死亡。所以，消化传代的时候一定要将细胞消化成单个单个的独立状态，这个啊是非常考究你的功夫的！细胞一旦脱落入悬液里你很难再将他吹打成单个，因为他没有受力点了。很难找到受力点让你对他吹打的力分散开细胞。所以必须要在细胞未脱落之前将其吹打开，受力点就是细胞贴壁的地方。这样你就必须要严格控制好消化的程度啊，这和大师做饭掌握好火候是一样的道理啊。既要消化到容易吹打下来，又不能太过，一吹就整片脱落，要单个单个地往下掉。所以我才要分批分次地加胰酶消化就是为了保证不同生长状态贴壁程度的细胞能够都维持在好的受力点分散开。这个是很重要的一点。尤其是对于某些细胞这一点就是他活去死的致命点。像Caco-2细胞就是如此。另外关于传代很重要一点就是一定不能等到细胞长满的时候才去消化传代。要在细胞长到70%左右的时候就要传代了，一旦发现细胞生长中已经有叠层生长的时候就要立即进行消化传代。不能再拖了。关于换液传代时候洗瓶的问题。对于用DMEM培养基培养的细胞，你在洗的时候如果是用无血清1640去洗细胞在随即后的几次中会比用DMEM洗的长的要好。同样，用1640培养的也有这个现象。如果不嫌麻烦的话，可以用PBS来洗，洗的效果和用无血清培养基洗的效果基本上是一样的，对于有些细胞会更胜一筹。洗的目的主要是洗去培养瓶里残留的血清，防止它对胰酶的影响。这样能够保证胰酶的消化能力优先，是很关键的一点。先补充这么多，还会后续更新。再补充一点：传代时PBS洗是很重要的一步，Z近发现，用PBS就可以把细胞消化开来。加入PBS放置10-15分钟，有些需要更长的时间，等到细胞一个个分离开来的时候，就可以直接吹打下来，但是和胰酶消化一样，要控制好时间，不能时间太过了，要不然损伤细胞，细胞不容易成活，状态容易不好。这个方法对于某些细胞是很管用的。有些细胞用胰酶消化不容易消化成单个的时候，或者临时没有胰酶了，可以选用此方法。不过一定要试试，看是否适合你的细胞。
盐蛋白胨水培养基，英文名：Nitrate peptone water Medium，用途：用于细菌的盐分解试验
盐还原菌培养基B，英文名：Postgate’s Medium B for Sulfate Reducers，用途：用于脱微生物的分离与培养，每100ml添加1支35%乳酸钠溶液
乳糖发酵培养基/乳糖复发酵培养基，英文名：Lactose Broth，用途：乳糖复发酵培养基,用于大肠菌群的测定
WL营养琼脂(WLN琼脂)/WL鉴别培养基基础(WLD培养基基础)，英文名：Wallerstein Laboratory Nutrient Agar，用途：制成WL鉴别培养基
Karmali氏弯曲杆菌琼脂培养基基础，英文名：Karmali’s Campylobacter Medium，用途：用于弯曲菌的选择性分离培养,每100ml添加1支Karmali氏弯曲杆菌琼脂培养基添加剂（含头孢哌酮、化血红素、万古霉素）