NCI-H3122人非小细胞肺癌细胞系 复苏技术经验丰富

NCI-H3122人非小细胞肺癌细胞系 复苏技术经验丰富
细胞背景资料：详见相关文献介绍
HCC-78细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长　；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2传代
Hs 863.T细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：成纤维细胞；细胞传代方法：1：2-1：4传代；每周换液2-3次。
H522细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
CNE1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
购买的细胞死亡或细胞存活率不佳可能原因？研究人员在细胞培养时出现存活率不佳，原因比较复杂，常见原因可归纳为：培养基使用错误或培养基品质不佳；血清使用错误或血清的品质不佳；解冻过程错误；冷冻细胞解冻后，加以洗涤细胞和离心；悬浑细胞误认为死细胞；培养温度使用错误；细胞置于-80℃太久等。建议严格参照ATCC的标准操作规程进行细胞复苏、冻存等工作。欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速?欲回收动物细胞，其离心速率一般为300×g(约1OOOrpm),5-10分钟，转速过高或离心时间过长都将造成细胞死亡。合适的离心转速是根据相对离心力决定。RCF=1.119×105×r×(rpm)2，其中r为离心机转轴ZX与离心套管底部内壁的距离；rpm为离心机每分钟的转数；RCF(relative centrifugal force)为相对离心力，以重力加速度g(980.66cm/s2)的倍数来表示单位。
HCC-78细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长　；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2传代
MDA-MB-435S细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：纺锤形；细胞传代方法：消化3-5分钟，1：2,3天内可长满
MH-S细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
SCC7细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
Pt K1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
MC116细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长 ；细胞形态特性：淋巴母细胞样；细胞传代方法：每周换液2-3次。
EAhy926细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞样；细胞传代方法：1：2传代
HCC1569细胞专业复苏；细胞生长特性：混合生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：4—1：6传代，每周换液2—3次
L2细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
6-10B细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
Hs578bst细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长　；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2传代
RMC细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞传代方法：1：2传代
MS培养基(1/2蔗糖、不含琼脂)，英文名：Murashige & Skoog Medium without Agar (1/2 Sucrose，用途：不含琼脂，蔗糖15g/L，用于植物组织培养
SBG磺胺增菌液，英文名：SBG Sulfa Enrichment，用途：含磺胺嘧啶,用于沙门氏菌选择性增菌
酵母浸膏葡萄糖土霉素琼脂培养基基础，英文名：OGYE Agar Base，用途：用于霉菌、酵母菌计数,葡萄糖20g/L,每100ml添加1支土霉素溶液
RSMA培养基，英文名：Ruthenium Skim Milk Agar Medium，用途：用于乳酸杆菌、乳酸链球菌的选择性分离
CW琼脂基础(不含卡那霉素)，英文名：Clostridium Welchii Agar Base without Kanamycin，用途：用于加热材料魏氏梭菌检验,每250ml培养基需加2支50%卵黄盐水悬液或15ml无菌脱纤维绵羊全血
酵母氮源基础(YNB)，英文名：Yeast Nitrogen Base，用途：用于通过碳源的利用对酵母菌进行分类
SF763细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
SACC83细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
Hs 729细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：成纤维细胞；细胞传代方法：1：2传代；每周换液2-3次。
SW579[SW579,SW-579]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装：复苏形式：T25培养瓶(一瓶)或冻存形式：1ml冻存管(两支)
GT38细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCI-H1876细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞样；细胞传代方法：每周换液2次。
LL2细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
293H细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞传代的一般方法：开始细胞传代前，仔细检查细胞传代所需的仪器和试剂是否齐全：一般主要有：细胞(单层细胞，镜检适合)、培养液(MEM-0.2%LH培养液或MEM培养液或199等适合细胞有要求的培养液)、灭活小牛血清、庆大霉素溶液（1万单位）、7.5％NaHC03溶液、0.25％胰蛋白酶、PBS洗液。用具：小方瓶(100m1)、克氏瓶、胶塞、吸管(10ml、1m1）、细胞吹打管（20ml）(以上用具需经121℃至少15分钟高压灭菌)、C02 孵箱、超净台、倒置显微镜、4℃、-20℃冰箱；操作步骤：镜检细胞，挑选生长状态良好，细胞界限清晰，具有立体感，形态好无污染、无异常及可疑病变细胞。配制细胞培养液：按以下配比配制MEM-0.2%LH培养液100ml内，加入灭活小牛血清10m1，庆大霉素溶液0.3m1，7.5%碳酸钠溶液3ml。（仅供一般参考）。消化细胞；先用PBS洗液冲洗细胞表面1-2次，每次10m1，弃去洗液，向细胞瓶内加入0.25％胰蛋白酶溶液，每瓶1m1，细胞瓶平放，使消化液完全覆盖细胞表面。至细胞完全脱落到胰酶中。每瓶加入10m1细胞培养液吹打分散细胞，按所需的传代比例分装于小方瓶(100m1)中，再加入10m1细胞培养液重复吹打一次后分装，然后补加至所需培养量。加塞，置于37±1℃孵箱培养。约2～4天成片。(由细胞接种浓度决定)；填写传代记录。
hRMECs细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
小鼠补体片段3a受体1(C3aR1)ELISA试剂盒，英文名：Mouse C3aR1 ELISA Kit，规格：48T/96T
人透明质酸酶(HAase)ELISA试剂盒，英文名：Human HAase ELISA Kit，规格：48T/96T
人肺炎衣原体抗体IgD(CPn IgD A)ELISA试剂盒，英文名：Human CPn IgD A ELISA Kit，规格：48T/96T
人连接桥粒斑珠蛋白(JUP)ELISA试剂盒，英文名：Human JUP ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠N-乙酰半乳糖胺-6-酸酯酶(GAS)ELISA试剂盒，英文名：GAS ELISA Kit，规格：48T/96T
人整合素αM(ITGαM)ELISA试剂盒，英文名：Human ITGαM ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠V-Rel网状内皮增生病毒癌基因同源物B(RELB)ELISA试剂盒，英文名：Mouse RELB ELISA Kit，规格：48T/96T
人生长因子受体结合蛋白10(Grb10)ELISA试剂盒，英文名：Human Grb10 ELISA Kit，规格：48T/96T
人GATA结合蛋白3(GATA3)ELISA试剂盒，英文名：Human GATA3 ELISA Kit，规格：48T/96T
CHO培养基基础，英文名：CHO Medium Base，用途：加入不同碳源用于厌氧菌的鉴别试验
乳糖肉汤培养基，英文名：Lactose Broth，用途：含麝香草蓝,用于大肠菌群的测定
三糖铁琼脂培养基，英文名：Triple Sugar-Iron-Agar Medium，用途：用于肠杆菌科细菌生化试验
M17琼脂(进口原料)，英文名：M17 Agar，用途：用于牛奶和乳制品中乳酸菌检测及分离被噬菌体感染的乳酸菌，每100ml添加1支10%乳糖溶液
C-33A细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：上皮细胞样；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
Human podocyte细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HEI193细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞生长特性：贴壁生长　
去氧胆酸盐琼脂，英文名：Desoxycholate Agar，用途：用于肠道致病菌及大肠杆菌的选择性分离和计数
马铃薯浸出液琼脂，英文名：Potato Infusion Agar，用途：用于布鲁氏菌的培养
抗生素培养基C(PH7.0)，英文名：Medium C（PH7.0），用途：用于抗生素检测
胰蛋白胨生理盐水溶液(TPS)，英文名：Tryptone Physiology Solution，用途：用于样品的制备
抗生素培养基5号，英文名：Medium 5（Streptomycin Assay Agar），用途：用于微生物方法测定抗生素效价
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
细胞形态特性：详见细胞说明书
L- cell细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：成纤维细胞；细胞传代方法：1：4-1：10传代；2-3天换液1次。
HEC-251细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
大鼠软骨糖蛋白39(GP39)ELISA试剂盒，英文名：GP39 ELISA Kit，规格：48T/96T
人泛素D(UBD)ELISA试剂盒，英文名：Human UBD ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠Ⅰ型胶原(COL1)ELISA试剂盒，英文名：Mouse COL1 ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠谷酸脱羧酶循环自身抗体(GAD)ELISA试剂盒，英文名：GAD ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠突触素(SYP)ELISA试剂盒，英文名：SYP ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞培养过程中相关问题总结：悬浮性细胞应如何继代处理？一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，可将培养角瓶口端稍微抬高，直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养角瓶，加入新鲜培养基稀释至适当浓度，重复前述步骤即可。欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速？欲回收动物细胞，其离心速率一般为300xg(约1,000rpm)，5-10分钟，过高之转速，将造成细胞死亡；细胞之接种密度为何？依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因；细胞冷冻培养基之成份为何？动物细胞冷冻保存时Z常使用的冷冻培养基是含5-10%DMSO(dimethyl sulfoxide)和90-95%原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之。注意：由于DMSO稀释时会放出大量热能，故不可将DMSO直接加入细胞液中，必须使用前先行配制完成；DMSO之等级和无菌过滤之方式为何？冷冻保存使用之DMSO等级，必须为Tissue culture grade之DMSO，其本身即为无菌状况，次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于4°C，避免反复冷冻解冻造成DMSO之裂解而释出有害物质，并可减少污染之机会。若要过滤DMSO，则须使用耐DMSO之Nylon材质滤膜；冷冻保存细胞之方法？冷冻保存方法一：冷冻管置于4°C 30~60分钟→ (-20°C 30分钟)→-80°C 16~18小时(或隔夜)→液氮槽vaporphase长期储存。冷冻保存方法二：冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3°C至–80°C以下，再放入液氮槽vapor phase长期储存。-20°C不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80°C冰箱中，惟存活率稍微降低一些；细胞欲冷冻保存时，细胞冷冻管内应有多少细胞浓度？冷冻管内细胞数目一般为1x10(6)cells/ml vial，融合瘤细胞则以5x10(6)cells/ml vial为宜；应如何避免细胞污染？细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之Z好方法；如果细胞发生微生物污染时，应如何处理？直接灭菌后丢弃之。
厌氧菌肉汤MIC，英文名：Anaerobe Broth MIC，用途：用于肉汤微量稀释法测定厌氧菌敏感性养和厌氧菌培养
碳琼脂，英文名：Charcoal Agar，用途：用于苛氧菌尤其是百日咳博鲍特氏菌培养
胆盐乳琼脂培养基(DHL)，英文名：Deoxycholate Hydrogen Sulfide Lactose Medium，用途：用于肠道菌选择性分离
煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB)，英文名：Brilliant Green Lactose Bile Broth，用途：用于大肠杆菌和大肠菌群的测定
胆汁七叶苷琼脂(BEA)，英文名：Bile Esculin Agar，用途：用于肠球菌确证和培养