BDCM急性髓系细胞白血病细胞系 复苏技术经验丰富

BDCM急性髓系细胞白血病细胞系 复苏技术经验丰富
细胞背景资料：详见相关文献介绍
CAL-62细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HS683细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
BDCM细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长；细胞形态特性：淋巴母细胞；细胞传代方法：每周2-3次。
SG231细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞冻存的步骤：1)选择处于对数生长期的细胞，在冻存前一天Z好换液。将多个培养瓶中的细胞培养液去掉，用0.25% 胰蛋白酶消化。适时去掉胰蛋白酶，加入少量新培养液。用吸管吸取培养液反复吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液。悬浮生产细胞则不要消化处理。然后将细胞收集于离心管中离心(1000r/min，10分钟)；2)去上清液，加入含20%小牛血清的完全培养基，于4℃预冷15分钟后，逐滴加入已无菌的DMSO或甘油，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，细胞浓度为5×106～1×107/mL之间。(冻存培养液的配置是不是一定要用小牛血清呢？答案是不一定的，具体要看培养的细胞类型来选择；3)将分装上述细胞悬液于2ml冻存管中，每管0.25ml。冻存管要将盖子盖紧，并标记好细胞名称和冻存日期，同时作好登记(日期、细胞种类及代次、冻存支数)；4)将装好细胞的冻存管放到冻存盒中，-80℃冰箱过夜。；如果有程序降温器(放在-80℃冰箱过夜，放入液氮罐)Z好;或者可以在4℃，2h;然后转到-20℃，2h;-80℃，2h;放入液氮罐；5)细胞冻存在液氮中可以长期保存，但为妥善起见，冻存半年后，Z好取出一只冻存管细胞复苏培养，观察生长情况，然后再继续冻存。
HCE-2 [50.B1]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
A-431[A431]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
OVHM细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
gpc-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
TMK-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
SNU-620细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HepG2/C3A细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：3—1：6传代，每周换液2次
SJCRH30[RC13,RMS 13,SJRH30]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCI-H847[H847]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
CCC-ESF-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCI-H1694[H1694]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NT2/D1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞传代方法：每周2-3次。
SSDC培养基/沙门氏菌-志贺氏菌琼脂(含脱氧胆盐化钠)，英文名：SSDC Medium，用途：用于小肠结肠炎耶尔森氏菌的选择性分离
SE培养基，英文名：SE Medium，用途：用于小球藻的培养，每100ml需添加4ml土壤提取液（土壤提取液）
GC肉汤基础，英文名：GC Broth Base，用途：用于致病性奈瑟氏菌的分离培养,每100ml添加IsoVitaleX添加剂、V-C-NYJ剂（VCN）、无菌血红蛋白各1支
M17琼脂，英文名：M17 Agar，用途：用于牛奶和乳制品中乳酸菌检测及分离被噬菌体感染的乳酸菌，每100ml添加1支10%乳糖溶液
T1N3肉汤，英文名：T1N3 Broth，用途：用于霍乱弧菌的生长试验
营养半固体琼脂(NSA)，英文名：Nutrient Semisolid Agar，用途：用于细菌鉴定试验 GB4789.31
PC-3M细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长　；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2传代
KMB17细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HP615615细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
Caco2细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：2传代
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
细胞产品包装：复苏形式：T25培养瓶(一瓶)或冻存形式：1ml冻存管(两支)
LS180细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
HEC-1-A细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：消化3-5分钟，1：2,3天内可长满
LAN-5细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
SFPAC-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞复苏基本方法：1．从液氮罐中取出安剖；有时因安剖未封严，浸入了液氮，取出后因安剖内液氮迅速气化而发生爆炸，因此应带有防护眼睛和手套。2．迅速放入盛有36℃～37℃水的搪瓷罐中，扣上盖并不时摇动，尽快解冻。3．剪开纱布口袋，取出安剖，用70％酒精擦拭消毒后，净化台上打开盖，用吸管吸出细胞悬液，装入离心管中，再补加10ml培养液，吹打使细胞悬浮。4．低速离心（500～1000转/分）5分钟，取上清后再重复用培养液漂洗、离心。5．加入培养液适当稀释后，再移装入培养瓶中，置温箱培养，次日更换一次培养液后再继续培养。收到T25 flask细胞时，处理方式为：在寄送过程中，为避免起泡造成细胞脱落死亡，T25 flask均加满培养基。请检查flask外观，并于显微镜下观察细胞生长状况和有无污染现象，若有任何问题，不要打开盖子，请立即通知细胞实验室。将原封之T25 flask静置于37°C，5%CO2培养箱中，使细胞回温至37°C，并让运送过程中少数脱落的细胞可再附着生长。隔天后，于无菌操作箱内取出flask内之培养基(取出之培养基可以再使用)，仅留约5-10ml培养基于flask内，依一般培养方式再将细胞置入培养箱中，或细胞已长满盘，则将细胞做传代培养。
RPC细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
人耐扭蛋白2A(TOR2A)ELISA试剂盒，英文名：Human TOR2A ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠蛋白激酶Cα(PKCα)ELISA试剂盒，英文名：PKCα ELISA Kit，规格：48T/96T
人周期素依赖性激酶4(CDK-4)ELISA试剂盒，英文名：Human CDK-4 ELISA Kit，规格：48T/96T
人凝血因子Ⅱ(F2)ELISA试剂盒，英文名：Human F2 ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠嗜铬蛋白B(CHGB)ELISA试剂盒，英文名：Mouse CHGB ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠高分子量细胞角蛋白(CK-HMW)ELISA试剂盒，英文名：Mouse CK-HMW ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠血小板衍生生长因子B(PDGF-B)ELISA试剂盒，英文名：PDGF-B ELISA Kit，规格：48T/96T
人O-唾液酸糖蛋白内肽酶(OSGEP)ELISA试剂盒，英文名：Human OSGEP ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠磷脂酰肌醇蛋白聚糖1(GPC1)ELISA试剂盒，英文名：GPC1 ELISA Kit，规格：48T/96T
模拟葡萄汁培养基(MSM)基础，英文名：MSM medium Base，用途：用于摸拟葡萄汁对真菌的培养，每升培养基添加1支脂肪酸溶液
酵母基酸缺陷型合成液体培养基(组酸/亮酸/色酸缺陷)，英文名：Yeast Synthetic Drop-out Fluid Medium，用途：用于酵母杂交及遗传突变株的筛选和研究
酵母基酸缺陷型合成液体培养基(尿嘧啶缺陷)，英文名：Yeast Synthetic Drop-out Fluid Medium without Urac，用途：用于酵母杂交及遗传突变株的筛选和研究
杜氏缓冲液(不含、镁离子)，英文名：Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline(D-PBS)，用途：用于细胞的洗涤、保存和培养,也用于微生物的培养
HSAEC1-KT细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
CCD-33Co细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
LX-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：3传代，2-3天换液一次
细胞生长特性：悬浮生长
B12肉汤培养基，英文名：B12 Assay Medium，用途：用于维生素B12检测
抗生素培养基5号，英文名：Medium 5（Streptomycin Assay Agar），用途：用于微生物方法测定抗生素效价
Aliz-gal琼脂，英文名：Aliz-gal Agar，用途：用于大肠菌群快速检测
改良McBride琼脂基础(MMA)，英文名：McBride Agar Base,Modified，用途：用于李斯特氏菌的选择性分离
3%NaCl甘露醇发酵培养基，英文名：Mannitol Fermentation Medium with 3%Nacl，用途：用于弧菌的甘露醇发酵试验
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
细胞形态特性：淋巴母细胞
KMS18细胞专业复苏；细胞生长特性：半贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
KYSE70细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：5传代
人钾中间小电导激活通道蛋白亚家族N成员2(KCNN2)ELISA试剂盒，英文名：Human KCNN2 ELISA Kit，规格：48T/96T
人高迁移率族蛋白1(HMG1)ELISA试剂盒，英文名：Human HMG1 ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠己糖激酶3(HK3)ELISA试剂盒，英文名：Mouse HK3 ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠胱天蛋白酶8(CASP8)ELISA试剂盒，英文名：Mouse CASP8 ELISA Kit，规格：48T/96T
人腺苷酸环化酶4(ADCY4)ELISA试剂盒，英文名：Human ADCY4 ELISA Kit，规格：48T/96T
因为细胞生长的时候肯定是要相互联系，大部分的细胞都是要成片生长的，尤其是对于贴壁细胞，单个细胞贴壁之后长着长着就长到一片去了。但是如果是成片的细胞抱团的话，传代后细胞是不能贴壁的，这样抱团的细胞就会死亡。所以，消化传代的时候一定要将细胞消化成单个单个的独立状态，这个啊是非常考究你的功夫的！细胞一旦脱落入悬液里你很难再将他吹打成单个，因为他没有受力点了。很难找到受力点让你对他吹打的力分散开细胞。所以必须要在细胞未脱落之前将其吹打开，受力点就是细胞贴壁的地方。这样你就必须要严格控制好消化的程度啊，这和大师做饭掌握好火候是一样的道理啊。既要消化到容易吹打下来，又不能太过，一吹就整片脱落，要单个单个地往下掉。所以我才要分批分次地加胰酶消化就是为了保证不同生长状态贴壁程度的细胞能够都维持在好的受力点分散开。这个是很重要的一点。尤其是对于某些细胞这一点就是他活去死的致命点。像Caco-2细胞就是如此。另外关于传代很重要一点就是一定不能等到细胞长满的时候才去消化传代。要在细胞长到70%左右的时候就要传代了，一旦发现细胞生长中已经有叠层生长的时候就要立即进行消化传代。不能再拖了。关于换液传代时候洗瓶的问题。对于用DMEM培养基培养的细胞，你在洗的时候如果是用无血清1640去洗细胞在随即后的几次中会比用DMEM洗的长的要好。同样，用1640培养的也有这个现象。如果不嫌麻烦的话，可以用PBS来洗，洗的效果和用无血清培养基洗的效果基本上是一样的，对于有些细胞会更胜一筹。洗的目的主要是洗去培养瓶里残留的血清，防止它对胰酶的影响。这样能够保证胰酶的消化能力优先，是很关键的一点。先补充这么多，还会后续更新。再补充一点：传代时PBS洗是很重要的一步，Z近发现，用PBS就可以把细胞消化开来。加入PBS放置10-15分钟，有些需要更长的时间，等到细胞一个个分离开来的时候，就可以直接吹打下来，但是和胰酶消化一样，要控制好时间，不能时间太过了，要不然损伤细胞，细胞不容易成活，状态容易不好。这个方法对于某些细胞是很管用的。有些细胞用胰酶消化不容易消化成单个的时候，或者临时没有胰酶了，可以选用此方法。不过一定要试试，看是否适合你的细胞。
抗生素培养基8号，英文名：Medium 8，用途：用于微生物方法测定抗生素效价
B12测试培养基，英文名：B12 Assay Medium，用途：用于维生素B12检测
B5培养基(不含琼脂)，英文名：B5 Medium without Agar，用途：含蔗糖20g/L，适合于愈伤组织和悬浮细胞培养
普通肉汤培养基，英文名：Routine Broth Medium，用途：用于金黄色葡萄球菌及其他细菌的增菌
M17肉汤，英文名：M17 Broth，用途：用于牛奶和乳制品中乳酸菌的检测，每100ml添加1支10%乳糖溶液