B10BR小鼠永生化黑素细胞系 消化多久合适

B10BR小鼠永生化黑素细胞系 消化多久合适
细胞背景资料：永生化黑素细胞
细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
SW900细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
RPMI-8226细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长；细胞形态特性：淋巴母细胞样；细胞传代方法：按1：2传代，5-6小时可以看到细胞分裂
RAG细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
很多朋友讨论细胞培养问题，见到很多很好的经验总结，这里说一些我个人的经验，因为一些比较特殊的原因，我自己培养接触过近300种细胞，常用于做实验的，累积有百余种，可以说遇到过许多各式各样古怪的细胞。这里挑细胞消化开始做我的篇ZT，并不是因为细胞消化Z重要，而是近期看到大家频繁讨论这个话题，我就抛砖引玉，下面几点拙见，可能与其它朋友总结的一些经验有点出入，仅供大家参考。许多同学对细胞消化做了许多研究，得出了很多有价值的经验，也见到很多人的困惑。其实细胞培养，尤其是细胞系的培养，就消化而言，不是太难，做得多了，善于总结经验，就能把细胞越养越好。一般的程序步骤，细节操作，我这里就不讲了，只讲一些基本操作背后的知识，如果不对之处，欢迎指正，总结下来，细胞培养中消化很重要，但其实消化并不是细胞培养的关键所在(虽然很重要)，关键所在是细胞来源，血清质量和水源(自己配制溶液的话)。我看到版上许多人养细胞遇到各种各样的问题，很多时候bottleneck没有找到，虽然通过其它方法有所改善，但仍然是事倍功半。因为人们往往注意自己的操作，总觉得自己没有经验，而忽视试剂，溶液尤其是细胞的质量，后者其实才是许多细胞培养实验室常见的问题。
改良CCD琼脂基础，英文名：Modified CCD Agar Base，用途：用于弯曲菌选择性分离,每100ml添加1支 弯曲菌分离琼脂添加剂(头孢哌酮、两性霉素B、利福平)
克氏双糖铁琼脂(KI)，英文名：Kligler Iron Agar，用途：用于细菌的复合生化试验
TGC流体培养基，英文名：TGC Medium ,Fluid，用途：——用于无菌检验
人鸟嘌呤脱酶(GDA)ELISA试剂盒，英文名：Human GDA ELISA Kit，规格：48T/96T
TGW细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：神经元细胞；细胞传代方法：1：2传代
RAT2细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
F9细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCI-H1404[H1404]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
L615细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞消化过程总结：其实绝大部分细胞消化的时候是只要用胰酶润洗一遍即可，吸去胰酶后，残留的那些无法计算体积的附着在细胞表面的微量胰酶在37度一般不到2min足够消化细胞（绝大部分1min不到）。对于这些细胞原则上不要用胰酶孵育细胞，连续这样传代，对细胞伤害很大。简单的程序是PBS润洗吸去，胰酶润洗吸去，然后37度消化。2，什么算是消化好了呢？不是细胞全部成间隔分布很离散的单个圆形才算消化好了，一般你肉眼观察贴壁细胞层，只要能移动了，多半呈沙壮移动，其实已经可以了，很多人喜欢把细胞消化或者吹打成完全分离细胞，这是没有必要的。一般能移动了，说明细胞与培养基质材料的附着已经消失了，细胞之间的附着也已经消失了，细胞已经独立分布了（虽然没有呈现很广的离散分布）。这个时候应该停止消化，不要等到看到镜下所有细胞都分离得非常好，间隙很大，才停止。细胞就是完全成单个细胞悬液，之后在贴壁的过程中仍然会聚集，这个是贴壁培养的细胞，尤其是肿瘤细胞的一个特性，无论死活的细胞都是如此，你可以尝试，准备的单个细胞悬液，贴壁后观察细胞，仍然是几个几个细胞聚集在一起。一些悬浮培养细胞也是如此，容易聚集，不要去尝试过几个小时就拿出来吹打成单细胞悬液（不要笑，这个是初养悬浮细胞的人常犯的错误，以为悬浮培养就是一个一个分开）。细胞只要能从基质上脱离下来，这个时候即使是成片的（比如Calu-3细胞），吹打不超过20次后（一般10次即可），成小规模聚集（10个细胞左右），是正常的，不要试图再去延长消化时间，或者像有的同学那样吹打1h，等待单细胞悬液出现。比较难消化的细胞（润洗方法5min还不能消化），比如HCT15, LS411和KM12，这样的细胞一般需要用少量胰酶孵育，但也不需要很多，一般100mm dish，一次Z多加入500ul，就足够了，一般我加300ul。即使这样难消化的细胞，一般不超过5min，即可见细胞成片移动，就应该停止消化。一些正常细胞也会有难消化的时候，比如tsDC细胞，但也只要用少量胰酶孵育，3min左右即可看到成片沙状移动。
酵母粉葡萄糖霉素琼脂(YGC)，英文名：Yeast Extract Glucose Chloramphenicol Agar，用途：用于霉菌酵母菌的分离和计数
TYA培养基基础，英文名：TYA Medium Base，用途：用于厌氧菌的培养,每升培养基中需添加3g醋酸铵
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
无盐麦康凯琼脂，英文名：MacConkey Agar Without Salt，用途：用于尿液中变形杆菌和大肠埃希氏菌的分离
pH7.0化钠-蛋白胨缓冲液，英文名：Buffered Sodium Chloride-peptone Solution pH 7.0，用途：用于样品制备
大鼠磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)ELISA试剂盒，英文名：GPC3 ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠糖皮质激素受体β(GR-β)ELISA试剂盒，英文名：Mouse GR-β ELISA Kit，规格：48T/96T
HSC细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
Detroit 562细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮细胞；细胞传代方法：1：2-1：4传代，2-3天换液1次。
BV2细胞专业复苏；细胞生长特性：半贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
K7M2-WT细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
YPD肉汤，英文名：YPD Broth，用途：用于分子生物学实验中酵母菌的培养和保存
改良卵磷脂琼脂基础，英文名：Modified Letheen Agar Base，用途：用于中菌落总数计数，每升培养基需添加7g吐温80
细胞生长特性：贴壁
MH肉汤，英文名：Mueller-Hinton Broth，用途：用于稀释法进行药敏试验
Iso-Sensitest 肉汤，英文名：Iso-Sensitest Broth，用途：用于抗生素药敏试验
APA培养基基础，英文名：APA Medium Base，用途：用于嗜盐菌的培养，灭菌后需添加1%无菌碳酸钠
厌氧菌琼脂，英文名：Anaerobic Agar，用途：用于厌氧微生物的培养
乳酸杆菌选择性肉汤(LBS肉汤)，英文名：Lactobacillus Selective Broth，用途：用于乳酸菌的选择性培养,每升需添加1.32ml冰乙酸
大鼠叉头框蛋白P3(FOXP3)ELISA试剂盒，英文名：FOXP3 ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠激活T-细胞核因子1(NFATC1)ELISA试剂盒，英文名：Mouse NFATC1 ELISA Kit，规格：48T/96T
人丝酸蛋白酶肽酶YZ因子B支成员13(SERPINB13)ELISA试剂盒，英文名：Human SERPINB13 ELISA Kit，规格：48T/96T
人胆碱转移酶1(CHPT1)ELISA试剂盒，英文名：Human CHPT1 ELISA Kit，规格：48T/96T
肉浸液琼脂，英文名：Meat Infusion Agar，用途：用于细菌的培养
Eugon LT 100肉汤基础，英文名：Eugon LT 100 Broth Base，用途：用于中细菌总数的测定,每200ml添加1支吐温80
抗生素培养基13号，英文名：Medium 13（Sabouraud LiquidBroth,Modified），用途：用于微生物方法测定抗生素效价
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
小鼠C4结合蛋白α(C4BPα)ELISA试剂盒，英文名：Mouse C4BPα ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠肝脏糖原化酶(PYGL)ELISA试剂盒，英文名：Mouse PYGL ELISA Kit，规格：48T/96T
目前，跟公司签订长期战略合作伙伴的科研单位有山西中医学院、福建医科大学附属第二医院、上海市第六人民医院、北京大学医学部、同济大学、四平ZX医院、广州中医药大学、中科院上海生命科学研究院生化与细胞研究所、解放军第306医院、江南大学、西南医院、吉首大学、西南大学化学化工学院、宁波大学、福建医科大学附属医院、苏州市同济医院、中南大学、延安大学附属医院、ZG科学院上海药物研究所、天津市儿童医院、江苏省中医药研究院、湘雅医学院、第四军医大学预防系劳动与环境教研室、扬州大学、上海交通大学、ZG医科大学、浙江省立同德医院、ZG人民解放军第150ZX医院、苏州大学、四川大学华西医院、云南大学、扬州大学兽医学院、上海交通大学医学院附属第九人民医院、海南医学院、江苏肿瘤医院、上海市闵行区ZX医院、大连医科大学附属医院、ZG科学院广州生物医药与健康研究院、沈阳药科大学、广州市第八人民医院、南京大学、浙江中医药大学、兰州大学、上海中医药大学、ZG农业科学院饲料研究所、厦门市妇幼保健院、大学、南京军区总医院、天津市人民医院、北京医学科学肿瘤医院、上海市同济医院、江苏大学、桂林医学院附属医院、ZG科学院化学研究所
VRE肉汤基础，英文名：VRE Broth Base，用途：用于分离抗万古霉素的肠球菌(VRE)和高耐基糖苷类抗生素的肠球(HLARE）
细胞形态特性：详见细胞说明书
细胞产品包装：复苏形式：T25培养瓶(一瓶)或冻存形式：1ml冻存管(两支)
抗生素培养基B(PH7.3)，英文名：Medium B（PH7.3），用途：用于抗生素检测，每100ml需添加1支吐温80
GAM琼脂，英文名：Glfu Anaerobic Medium Agar，用途：用于厌氧菌的培养
CCRF-CEM [CCRF CEM]细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
SW 1573细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：4-1：10传代；每周换液2-3次。
PAN-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
BC-021细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
SW 780[SW-780,SW780]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
MC3T3-L1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：成纤维细胞样；细胞传代方法：1：2传代
HepG2[HepG2]细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
CEM-C7细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
人多巴胺脱羧酶(DDC)ELISA试剂盒，英文名：Human DDC ELISA Kit，规格：48T/96T
人神经纤维网蛋白2(NRP2)ELISA试剂盒，英文名：Human NRP2 ELISA Kit，规格：48T/96T