B10BR小鼠永生化黑素细胞系 需要消化多久

B10BR小鼠永生化黑素细胞系 需要消化多久
细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
营养半固体琼脂(NSA)，英文名：Nutrient Semisolid Agar，用途：用于细菌鉴定试验 GB4789.31
麸皮液体培养基，英文名：Wheat Bran Medium，用途：用于细菌、真菌的培养
本尼特琼脂，英文名：Benett’s agar，用途：用于链霉菌属的培养鉴定
人阴离子/糖转运蛋白(AST)ELISA试剂盒，英文名：Human AST ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞背景资料：永生化黑素细胞
人间隙连接蛋白43(CX43)ELISA试剂盒，英文名：Human CX43 ELISA Kit，规格：48T/96T
NZCYM肉汤，英文名：NZCYM Broth，用途：用于大肠杆菌菌株培养,配方被推荐用于重组l噬菌体的复制
10%化钠胰酪胨大豆肉汤，英文名：10% Sodium Chloride Tryptic Soy Broth，用途：用于金黄色葡萄球菌的增菌和MPN试验
麦芽汁琼脂基础，英文名：Malt Extract Agar Base，用途：含1.275%麦芽糖,不含霉素,每升培养基添加2.35g甘油
DF-1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞常规培养传代流程(请严格遵照无菌操作)：1)吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加2-3ml 0.25%胰酶进行消化细胞(注意把握消化时间，通常控制在1-2min)；2)镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时(不建议消化到细胞漂浮)去掉胰酶，加6-8ml完全培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落，吹散；3)取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的完全培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养；4)注意培养基PH值变化情况，定期换液(每周2-3次)，待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存；特别注意：(如使用公共实验室或者初次接触细胞培养，建议添加双抗培养)1)收到细胞后请尽快更换为含15%血清的新鲜培养基，如因特殊情况需要继续使用原瓶，请在原瓶培养基中额外添加10%的血清，(原瓶培养基的继续使用时间Z长不宜超过72小时)；2)贴壁细胞收到当天切忌立刻消化，请将细胞换液后放置培养箱孵育到第二天再做消化传代，请优先选择直径6cm的培养皿进行传代培养；3)如签收时出现培养瓶壁破裂，漏液等情况请及时做好照片记录并联系实验室。
PZ-HPV-7细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
Hce-8693细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NRK细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
TYCSB培养基基础，英文名：Tryptone Yeast Cystine Sucrose Bacitracin Medium，用途：用于变异链球菌的分离, 每100ml添加1支杆菌肽
细胞来源说明：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
APT琼脂，英文名：APT Agar，用途：用于乳酸菌的分离培养
AC肉汤，英文名：AC Broth，用途：用于常见微生物的培养和不含防腐剂的样品的检测
THP1细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
TCAM-2细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
人Fas凋亡YZ分子3(FAIM3)ELISA试剂盒，英文名：Human FAIM3 ELISA Kit，规格：48T/96T
人矢车菊苷γ1(CENTγ1)ELISA试剂盒，英文名：Human CENTγ1 ELISA Kit，规格：48T/96T
人Ⅶ型胶原(COL7)ELISA试剂盒，英文名：Human COL7 ELISA Kit，规格：48T/96T
大鼠性别决定区Y框蛋白2(SOX2)ELISA试剂盒，英文名：SOX2 ELISA Kit，规格：48T/96T
细胞培养中支原体污染的经验分享：支原体是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物，大小一般在0.3-0.5um之间，呈高度多形性，有球形、杆形、丝状、分枝状等多种形态。它不同于细胞，也不同于病毒。支原体用普通染色法不易着色，用姬姆萨染色很浅，革兰染色为阴性。支原体可在鸡胚绒毛尿囊膜上或细胞培养中生长，营养要求比细菌高。细胞培养(特别是传代细胞)被支原体污染是个世界性问题。在细胞培养中支原体感染发生率达到63%，支原体感染发生后能改变细胞的DNA,RNA及蛋白表达，又不能通过可视法对其进行检测，而且它对细胞的生长率影响较小，不易引起注意。国内外研究表明，95%以上是以下四种支原体：口腔支原体(M.orale)、精酸支原体(M.arginini)、猪鼻支原体(M.hyorhinis)和莱氏无胆甾原体(A.laidlawii)，为牛源性。以上是Z常见的污染细胞培养的支原体菌群，但能够污染细胞的支原体种类是很多的，国外调查证明，大约有二十多种支原体能污染细胞，有的细胞株可以同时污染两种以上的支原体。支原体污染的来源包括工作环境的污染、操作者本身的污染(一些支原体在人体是正常菌群)、培养基的污染、污染支原体的细胞造成的交叉污染、实验器材带来的污染和用来制备细胞的原始组织或器官的污染。组织细胞培养工作中，主要从以下几个方面来预防支原体的污染：控制环境污染;严格实验操作；细胞培养基和器材要保证无菌；在细胞培养基中加入适量的抗生素。支原体污染细胞后，特别是重要的细胞株，有必要清除支原体，常用方法有抗生素处理、抗血清处理、抗生素加抗血清和补体联合处理。支原体Z突出的结构特征是没有细胞壁，一般来讲，对作用于细胞壁生物合成的抗生素，如万古霉素等完全不敏感；对多粘菌素(polymycin)、利福平、磺胺药物普遍耐药。对支原体Z有YZ活性及常用于支原体感染ZL的抗生素是四环素类、大环内酯类及一些喹诺酮;其他类抗生素如基糖苷类、霉素对支原体有较小YZ作用，所以常不用来作为支原体感染的化学ZL剂。
细胞产品包装：复苏形式：T25培养瓶(一瓶)或冻存形式：1ml冻存管(两支)
KF链球菌琼脂，英文名：KF Streptococcus Agar，用途：用于肠球菌、链球菌滤膜法计数和检验，每100ml培养基添加1支1%TTC溶液
标准Ⅰ号营养琼脂，英文名：StandaredⅠNutrient Agar，用途：用于细菌培养,营养丰富
去氧胆酸盐柠檬酸盐琼脂，英文名：Deoxycholate Citrate Agar，用途：用于沙门氏菌选择性分离
肉肝琼脂，英文名：Meat Liver Agar，用途：用于厌氧菌的培养
乳酸菌霉素肉汤1，英文名：Lactobacillus Chloramphenicol Broth 1，用途：——用于干酪乳杆菌的培养
小牛浸液琼脂，英文名：Veal Infusion Agar，用途：用于苛养菌的培养
MPP 89细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁或悬浮，详见细胞说明书部分；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
细胞生长特性：贴壁
L1210细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长；细胞形态特性：淋巴母细胞样；细胞传代方法：1：2传代
no.11细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁生长；细胞形态特性：上皮样；细胞传代方法：1：2传代
AAV-293细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：上皮细胞样；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
EC肉汤，英文名：EC Broth，用途：用于大肠杆菌和粪大肠菌群的测定
NGKG琼脂基础，英文名：NGKG Agar Base，用途：用于蜡样芽胞杆菌的检测,每200ml添加2支50%卵黄盐水悬液和1支多粘菌素B溶液
3%NaCl赖酸脱羧酶试验培养基，英文名：Lysine-decarboxylase Test Medium with 3%NaCl，用途：用于弧菌的赖基酸脱羧酶试验
细胞形态特性：详见细胞说明书
NCI-H1993细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
NCI-H378细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
RAMSCs细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
UT-7细胞专业复苏；细胞生长特性：悬浮生长，有1%~2%的细胞可轻微贴壁。；细胞形态特性：圆形；细胞传代方法：维持细胞浓度在1.0-1.5×106cells/ml，1：2传代，2-3天1次。
F81细胞专业复苏；细胞生长特性：贴壁；细胞形态特性：详见细胞说明书；细胞传代方法：1：2-1：3传代；每周换液2-3次。
贴壁细胞消化传代时通常采用两种方法：一、加入胰酶等细胞脱落后，再加培养基中止胰酶作用，离心传代；二、加入胰酶后，镜下观察待细胞始脱落时，弃胰酶，加培养液分瓶。但前者太麻烦，而后者有可能对细胞施加胰酶选择，因为总是贴壁不牢的细胞先脱落，对肿瘤细胞来说，这部分细胞有可能是恶性程度较高的细胞亚群。一种简单的消化传代方法。加入PBS洗去血清或加入胰酶先中和血清的作用(30s)，弃之，再加入适量胰酶作用10s-40s(根据细胞消化的难易程度)，弃之，这样依赖残余的胰酶就可将细胞消化单细胞。对于较难消化的细胞，可以用2%利多卡因消化5-8分钟，然后再弃去，加培养基吹打也可以，对细胞的影响不大。不用PBS也不用Hanks洗，只要把旧培养液吸的干净一点，直接加酶消化应该不会有什么问题。弃培养液后，用0.04%的EDTA冲洗一次，再用1/4v的0.04%的EDTA室温孵育5min，弃取大部分EDTA，加入与剩余EDTA等量的胰酶(预热)总体积1/10v。消化到有细胞脱落。不过有人说EDTA对细胞不好，有证据吗？培养的BASMC：倒掉旧培养液加入少量胰酶冲一下，倒掉再加入0.125-0.25%胰酶约6-10滴或1ml(25ml bottle)消化再加入适量新培养基中和，并分瓶这种方法简单、省事；效果很好并且不损失细胞！
细胞物种来源：人源或鼠源等其它物种来源
克氏柠檬酸盐琼脂，英文名：Christensen Citrate Agar，用途：——用于柠檬酸盐利用实验
SCDLP琼脂培养基基础，英文名：Soya Casein Digest Lecithin Polysorbate Agar Base，用途：用于细菌总数的测定,每升培养基添加1支吐温80
人解整合素金属蛋白酶12(ADAM12)ELISA试剂盒，英文名：Human ADAM12 ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠三碘甲状腺原酸(T3)ELISA试剂盒，英文名：Mouse T3 ELISA Kit，规格：48T/96T
人肺表面活性物质相关蛋白C(SP-C)ELISA试剂盒，英文名：Human SP-C ELISA Kit，规格：48T/96T
小鼠原纤蛋白2(FBN2)ELISA试剂盒，英文名：Mouse FBN2 ELISA Kit，规格：48T/96T