293 [HEK-293]人胚肾细胞系 用什么培养条件
细胞背景资料:胚肾;5型腺病毒转化;女性
为了防止因污染或技术原因使长期培养功亏一篑,考虑到培养细胞因传代而迟早会出现变异,有时因寄赠、交换和购买,培养细胞从一个实验室转运到另一个实验室,的策略是进行低温保存。这对于维持一些特殊细胞株的遗传特性极为重要。现简要介绍深低温保存法(-70℃~-196℃)的特点。细胞深低温保存的基本原理是:在-70℃以下时,细胞内的酶活性均己停止,即代谢处于完全停止状态,故可以长期保存。细胞低温保存的关键,在于通过0~20℃阶段的处理过程。在此温度范围内,水晶呈针状,极易招致细胞的严重损伤。冻存细胞的复苏:冻存细胞较脆弱,要轻柔操作。冻存细胞要快速融化,并直接加入完全生长培养基中。若细胞对冻存剂(DMSO或甘油)敏感,离心去除冻存培养基,然后加入完全生长培养基中。直接铺板方法:取出贮存细胞,37℃水浴中快速融化;直接用完全生长培养基铺板细胞。1ml冻存细胞使用10~20ml完全生长培养基。进行活细胞计数,细胞接种应该至少在3×10(5)活细胞/ml;培养细胞12到24小时,更换新鲜的完全生长培养基,去除冻存剂。离心方法:取出贮存细胞,37℃水浴中快速融化;把1到2ml冻存细胞加入到大约25ml完全生长培养基,轻轻混匀;以大约80x离心2到3分钟;弃去上清。在完全生长培养基轻轻再次悬浮细胞,并且进行活细胞计数。细胞铺板,细胞接种应该至少为3×10(5)活细胞/ml。细胞的分化:一个成年人全身细胞总数约1012个,可以区分为200多种不同类型的细胞:形态结构,代谢,行为,功能等各不相同。追根溯源,这么多种细胞均来自一个受精卵细胞。所以,通常把发育过程中,细胞后代在形态、结构和功能上发生差异的过程称为细胞分化。细胞分化发生在胚胎阶段,也发生在胎儿出生以后,乃至成人阶段。例如,人体血细胞的产生和分化,这个过程在人的一生中一直持续着。由旺盛生长不断分裂的细胞,转入分化,通常从细胞周期中G1期开始时一个确定的点G0点“逃逸”出细胞周期。旺盛生长分裂的细胞和各种分化了的细胞,它们的基因表达和代谢活动各不相同。
TGY肉汤培养基,英文名:Tryptone Glucose Yeast Broth Medium,用途:用于芽孢菌的培养
MRS培养基(改良MRS培养基基础),英文名:MRS Medium(Modified MRS Medium Base),用途:用于乳酸菌计数,改良MRS培养基每100ml需添加1支莫匹罗星锂盐储备液
哥伦比亚血琼脂基础,英文名:Columbia Blood Agar Base,用途:广泛用于细菌,尤其是苛养菌的培养,添加无菌脱纤维绵羊全血
人脂生蛋白(ADIG)ELISA试剂盒,英文名:Human ADIG ELISA Kit,规格:48T/96T
小鼠抗核小体抗体IgG(AnuA-IgG)ELISA试剂盒,英文名:Mouse AnuA-IgG ELISA Kit,规格:48T/96T
小鼠组胺H4受体(HRH4)ELISA试剂盒,英文名:Mouse HRH4 ELISA Kit,规格:48T/96T
细胞冻存的步骤:1)选择处于对数生长期的细胞,在冻存前一天Z好换液。将多个培养瓶中的细胞培养液去掉,用0.25% 胰蛋白酶消化。适时去掉胰蛋白酶,加入少量新培养液。用吸管吸取培养液反复吹打瓶壁上的细胞,使其成为均匀分散的细胞悬液。悬浮生产细胞则不要消化处理。然后将细胞收集于离心管中离心(1000r/min,10分钟);2)去上清液,加入含20%小牛血清的完全培养基,于4℃预冷15分钟后,逐滴加入已无菌的DMSO或甘油,用吸管轻轻吹打使细胞均匀,细胞浓度为5×106~1×107/mL之间。(冻存培养液的配置是不是一定要用小牛血清呢?答案是不一定的,具体要看培养的细胞类型来选择;3)将分装上述细胞悬液于2ml冻存管中,每管0.25ml。冻存管要将盖子盖紧,并标记好细胞名称和冻存日期,同时作好登记(日期、细胞种类及代次、冻存支数);4)将装好细胞的冻存管放到冻存盒中,-80℃冰箱过夜。;如果有程序降温器(放在-80℃冰箱过夜,放入液氮罐)Z好;或者可以在4℃,2h;然后转到-20℃,2h;-80℃,2h;放入液氮罐;5)细胞冻存在液氮中可以长期保存,但为妥善起见,冻存半年后,Z好取出一只冻存管细胞复苏培养,观察生长情况,然后再继续冻存。
SNU16细胞专业复苏;细胞生长特性:悬浮;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
HCCC9810细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
LNCaP clone FGC细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:上皮细胞;细胞传代方法:消化3-5分钟。1:2。3天内可长满。
Mv 1Lu(NBL-7)细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
CTV-1细胞专业复苏;细胞生长特性:悬浮;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
CCD-18Co细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
细胞形态特性:详见细胞说明书
毛藓菌琼脂6号,英文名:Trichophyton Agar #6,用途:用于毛藓菌属的鉴定
霉菌琼脂培养基,英文名:Mould Agar Medium,用途:含琼脂,用于霉菌分离培养
化十六烷三甲铵琼脂培养基基础,英文名:Cetrimide Agar Base,用途:用于铜绿假单胞菌选择性分离,每100ml添加1ml甘油(甘油)
细胞传代培养实验:体外培养的原代细胞或细胞株要在体外持续地培养就必须传代,以便获得稳定的细胞株或得到大量的同种细胞,并维持细胞种的延续。培养的细胞形成单层汇合以后,由于密度过大生存空间不足而引起营养枯竭,将培养的细胞分散,从容器中取出,以1:2或1:3以上的比率转移到另外的容器中进行培养,即为传代培养;细胞“一代”指从细胞接种到分离再培养的一段期间,与细胞世代或倍增不同。在一代中,细胞培增3~6次。细胞传代后,一般经过三个阶段:游离期、指数增生期和停止期。常用细胞分裂指数表示细胞增殖的旺盛程度,即细胞群的分裂相数/100个细胞。一般细胞分裂指数介于0.2%~0.5%,肿瘤细胞可达3~5%;细胞接种2~3天分裂增殖旺盛,是活力Z好时期,称指数增生期(对数生长期),适宜进行各种试验。实验步骤:1.将长成的培养细胞从二氧化碳培养箱中取出,在超净工作台中倒掉瓶内的培养液,加入少许消化液。(以液面盖住细胞为宜),静置5~10分钟。2.在倒置镜下观察被消化的细胞,如果细胞变圆,相互之间不再连接成片,这时应立即在超净台中将消化液倒掉,加入3~5ml新鲜培养液,吹打,制成细胞悬液。3.将细胞悬液吸出2ml左右,加到另一个培养瓶中并向每个瓶中分别加3ml左右培养液,盖好瓶塞,送回二氧化碳培养箱中,继续进行培养。一般情况,传代后的细胞在2小时左右就能附着在培养瓶壁上,2~4天就可在瓶内形成单层,需要再次进行传代。
1%葡萄糖肉汤培养基,英文名:1% Dextrose Broth Medium,用途:用于初次分离细菌的增菌培养
HCT-116细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:上皮样;细胞传代方法:1:3传代,3-4天换液一次
细胞产品包装:复苏形式:T25培养瓶(一瓶)或冻存形式:1ml冻存管(两支)
MES-SA细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:成纤维细胞样 ;细胞传代方法:1:6-1:8传代;每周2-3次。
QBC-939细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
Capan-2细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:多边形;细胞传代方法:1:2-1:4传代,2-3天换液1次。
改良NBB肉汤基础,英文名:NBB Broth Base,Modified,用途:用于啤酒中微生物的检测
胰蛋白胨酵母浸粉肉汤,英文名:ISP Medium 1(Tryptone Yeast Extract Broth,用途:用于链霉菌属的培养鉴定
BSC-1细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
细胞生长特性:贴壁
FAO细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:上皮细胞;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
T241细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
LAC细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
N6培养基(不含琼脂),英文名:N6 Medium without Agar,用途:适合于愈伤组织和悬浮细胞培养
TGY肉汤培养基,英文名:Tryptone Glucose Yeast Broth Medium,用途:用于芽孢菌的培养
细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
MS培养基(1/2蔗糖),英文名:Murashige & Skoog Medium (1/2 Sucrose),用途:含琼脂,蔗糖15g/L,用于植物组织培养
A7R5细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:成纤维细胞;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
酵母粉葡萄糖霉素琼脂(YGC),英文名:Yeast Extract Glucose Chloramphenicol Agar,用途:用于霉菌酵母菌的分离和计数
麸皮液体培养基,英文名:Wheat Bran Medium,用途:用于细菌、真菌的培养
GA-10(Clone4)细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
细胞来源说明:细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国外大学建系
GA-10(Clone4)细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁或悬浮,详见细胞说明书部分;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
ECV304细胞专业复苏;细胞生长特性:悬浮生长;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2传代
现隐肉汤,英文名:Presence Absence Broth,用途:用于水中大肠菌群计数
Middle Brook 7H10琼脂基础,英文名:Middle Brook 7H10 Agar Base,用途:用于分枝杆菌分离培养,每180ml添加1支甘油和4支Middlebrook OADC增菌液
抗生素培养基A(PH6.6),英文名:Medium A(PH6.6),用途:用于抗生素检测
小鼠凝血因子XIII(FXIII)ELISA试剂盒,英文名:Mouse FXIII ELISA Kit,规格:48T/96T
人抗双链DNA抗体/天然DNA抗体(dsDNA)ELISA试剂盒,英文名:Human dsDNA ELISA Kit,规格:48T/96T
大鼠嗜环蛋白/亲环素D(CYPD)ELISA试剂盒,英文名:CYPD ELISA Kit,规格:48T/96T
TO 175.T细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁生长;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2传代;每周换液2-3次。
HUVSMC细胞专业复苏;细胞生长特性:贴壁;细胞形态特性:详见细胞说明书;细胞传代方法:1:2-1:3传代;每周换液2-3次。
细胞物种来源:人源或鼠源等其它物种来源
本尼特琼脂,英文名:Benett’s agar,用途:用于链霉菌属的培养鉴定
气单胞菌培养基基础(Ryan),英文名:Aeromonas Medium Base (Rayn),用途:用于气单胞菌的诊断,每400ml添加1支苄青霉素溶液
志贺氏菌(BCT)增菌液,英文名:BCT Enrichment Broth,用途:用于志贺氏菌选择性增菌
大鼠血管内皮细胞生长因子受体1(VEGFR-1/Flt1)ELISA试剂盒,英文名:VEGFR-1/Flt1 ELISA Kit,规格:48T/96T
人醛固酮合酶(ALDOS)ELISA试剂盒,英文名:Human ALDOS ELISA Kit,规格:48T/96T
人可溶性粘附分子(Sam)ELISA试剂盒,英文名:Human Sam ELISA Kit,规格:48T/96T