蛋白质非标记定量技术(label-free)是通过液质联用技术对蛋白质酶解肽段进行质谱分析,无需使用昂贵的稳定同位素标签做内部标准,只需分析大规模鉴定蛋白质时所产生的质谱数据,比较不同样品中相应肽段的信号强度,从而对肽段对应的蛋白质进行相对定量。Label-free的技术优势就在于蛋白质不需要进行标记,所需样品总量少,耗费低。技术优势
1.无需昂贵的同位素标签标记,实验耗费低,操作简单;
2.对样本的操作少,并且不受样本数目的现在,客服了标记定量技术在对多个样本进行定量方面的缺陷;
3.可以检测到的肽段动态范围可以达到4个数量级以上,提高低丰度蛋白的检出率和非标定量的准确性;
4.可以检测不同组样本中有无差异的蛋白变化;
5.样本需求量少
仪器类型
Thermo Scientific Q Exactive
样本要求
1.蛋白运输:24小时内可以4℃运输;
2.蛋白长期保存:-20℃;
3.待检测蛋白要求:蛋白量300μg,浓度要求为1μg/μl,否则同位素无法标记;
4.蛋白提取试剂要求:使用普通的组织、细胞裂解液即可,切忌不要使用二维电泳试剂提取;
5.直接提供组织或细胞:动物、微生物组织湿重>10mg;植物鲜嫩组织>100mg;细胞量>107个;血液体积>500μl。