细菌计数板 计数板的使用 准备准备计数时,磨光的表面小心地用擦镜纸擦干净。盖玻片也要擦干净。 盖上盖玻片在需要盖的周边区域需要用蒸馏水弄的微湿然后盖玻片要慢慢的从计数板的前端推入,直到盖玻片的前端边缘与计数板的划格子的区域处于同位。 注意:盖玻片是很容易坏掉的! 在外部支持和盖玻片之间的干扰线(牛顿环)的组成显示了盖玻片的准确位置。 计数板加样 取一个良好混合型的吸管并且放置一些初期的几滴液体。把吸管的外部擦干然后保持吸管一定的角度直到小滴液体被吸管吸上去。然后这滴液体被放置在盖玻片和计数板之间。由于盖玻片和计数板之间的毛细管现象作用的结果,两个平面之间的缝隙被灌满。在溶液要满出击数板截面的边缘之前,马上移走吸管的。如果有可见气泡或者液体已经满出边缘并且进入其他的沟里,那么计数板就要擦干净并且重新加样。 计数装载好的计数板被放置在显微镜台上然后计数格在低倍镜焦距中显示。高倍物镜要非常小心的操作,因为计数板比常规的要更厚。如果你不小心的话,会导致计数板或者物镜镜头的损伤。如果可能的话,在作血细胞计数的时候使用机械平台的显微镜。显微镜的照明是重要的,太亮了会影响划格线的观察。光可以通过虹膜光圈减弱直到划得格子在背景中再次清晰可见。细胞/质粒的计数应该充分稀释到他们不再互相重叠,并且均匀的分配。 要完成计数检测需要扩大到期望的可见的细胞/质粒。细胞数量的计算推荐计数100方格作为排除少量的结果。 计数格在超过划线区域使用时需要均匀的分配,并且这个通过藉由三倍之数决定的方格支架在进入区段之内。 计数完100方格后总数除100(计数的方格数),来得到每格的平均值。乘稀释度,除1/4000(每个小方格的立方容积1/20 x 1/20 x 1/10 – 1/4000mm3)。这次计算得到的数字是原非稀释流质的每立方毫米的细胞数量。
一个计数室实质上是一种显微镜下将砌体蚀刻其表面上让使用者能够数出细胞或悬浮在上面的其他粒子。
计数室用于血液分析(白细胞、红细胞、血小板),细菌、真菌孢子、精液、尿微粒,虫卵等。
计数室如果用于血液分析时,会被称为血球计数器。计数室可以被鉴定为全面单一网格(ZY区域没有分部)或双网格(分开的中部地区)。
它们可以在视觉识别(反射)涂层标的ZY或者是被涂层区域。
一个金属化的(有时叫做“亮线”)计数室有一铑涂层在网格上。在显微镜下,通过改变的对比,颜色是可能的改变的,
所以计算网格可以选择亮或暗的颜色。
一个未包装的计数室有计数网格直接蚀刻在玻璃上。
计数室的外部应印有以下信息:
a)制造商的名称。
b) 网格统治模式的类型。
c) 毛细管差距的深度(已知的深度的样品)。
d) 网格上可找到的方格表面区域(请参阅特定为每个网格类型信息表)。
铑涂层的计数室,比普通类型的有更多的优点。灌装更加简单,样品溶液形成更为清晰在深色背景下。
显微镜的调整更少出错并且在线和背景的更好的对比下,界线颗粒可以快速识别。薄膜厚度保证在严格的限制下——
光的传播的保证其价值。
之后,铑涂层被加热来硬化金属并且来性的粘合在玻璃表面。
金属化的区域除了普通计数室以外并不需要特别的条件。
所有Auvon的计数室制造符合英国标准BS748。这个标准制定了详细的要求并且计数室用于大多数血液
分析。以下几点说明在科学的精度和标准下的要求非常高:
A)测量区域的深度低于外部支持(已知的深度)必须在±0.001毫米。
B)玻璃盖必须地支持和抛光光学平面和共面在测量区域±0.001毫米范围内。
C)玻璃片的光学工作为了准备充填、玻璃片底部和测量表面之间的距离在±0.001毫米范围内变化
遵循一般指令。要求做出更详细的说明和信息关于如何数计算量特指计数室的具体信息和说明书。
准备计数室,其磨合表面用镜片纸仔细清洗。钢化玻璃也清洗的。
外部区域滑坡形成的蒸馏水和钢化玻璃是轻轻推到计数室,前面的前边缘放置在钢化玻璃是对称的区域被计数的区
域。
必须小心:钢化玻璃是很容易破碎的。
干涉(扰)线的形成(牛顿环)之间的外部支持和钢化玻璃盖片玻璃显示正确的位置。
采取混合均匀的移液管并且处理初的几滴溶液。把移液管的外部擦干并且把它放置在一个特定的角
度直到小液滴从移液管的一端出现。然后把这液滴放在玻璃片和计数室的中间。由于毛细管作用钢化
玻璃和计数室,这两项之间的差距被填满。在溶液溢出的边缘剖面、尖针必须清除。如果任何气泡是可
见的,或者如果在液体溢出的边缘和其他的凹槽,计数室必须清洗而且必须从头做起
这些带电的计算腔体然后放在显微镜阶段和计算网格带进低功率聚焦。必须非常小心的目标和更高的力量,因为点票
工作更厚的商会是比传统滑动。你可能损坏计数室或一个客观的镜头,如果你不小心。
显微镜使血细胞计数与受力阶段应该的,如果可能的话,可以使用。照明的显微镜是重要的,因为太亮防止裁决被容易
地看到它。光线可以减少通过瞳孔膜直到裁决的背景突出出来。
细胞/微粒数足够应该稀释,所以不会互相重叠,应均匀分布。执行计算确定需要认识到想要的细胞放大/粒子
这是明智的。计数应均匀地分布在计算区域,并且这是推动改进的计数板和计数板裁决了广场被分成块,采用三重判
决。拥有100平方数分这笔钱到100年(数量的方格计算在内),取得平均每平方。乘稀释并且除以1/4000(的立体容积每
个小方是1/10 - 1/20 1/20倍x 1/4000mm3)。到达的人数这个计算是细胞的数量每立方毫米的原始稀释液体。下面的
公式提供了一种方便的方法进行了描述。
(D×N)/(Sx K)
地点:D =稀释系数 N =数量的两种血球细胞数 / K =体积为每个小广场
(1/4000 mm3为一种改进的计数板 0.1毫米深腔)数量的方格S =数
例如:当D = 100,N = 1350 S = 100
然后(100×1350)/(100×4000)= 5400000细胞每立方毫米
在计算时是很常见的细胞大所有的细胞数包含在1毫米×1毫米测量。进行了统计,继续和以前一样,但在这种情况下,
价值“K”的能力将1/10的各大广场是1 * 1 * 1/10 = 1/10mm3。
一个小的K值类型不同的裁决广场下面给出:
改进计数板(0.1毫米细胞深度)K = 1/4000
计数板(0.1毫米细胞深度)K = 1/4000
特计算池(0.1毫米细胞深度)K = 1/250
Thoma(0.1毫米细胞深度)K = 1/4000
富克斯罗森塔尔(0.2毫米细胞深度)K = 1/80
Helber细菌(0.02毫米细胞深度)K = 1/20000
马拉塞(0.2 毫米细胞深度)K = 1/2000 精液不育Z3BC1B(0.01 细胞深度)K = 1/10000
完成实验后的计数玻璃片硬钢立即移除,并且去除的计数室和钢化玻璃如有必要用温和的洗涤剂溶液来清洗干净。
当一个干膜必须从计数室或者玻璃片上移除时,1%的盐酸溶液可能要小心使用。
接下来计数室是用软布或与丙酮清洗。
吸量管在使用后必须用生理盐水(0.9%氯化钠)以及水、醇、醚清洗。空气通过根吸管轻轻蒸发后,来使吸量管干
燥。应该在血凝加样器,它可能被0.3%胰液素消化在1%碳酸氢钠或解决胃蛋白酶在稀释的盐酸中。一个小型探测器或
珠宝商可以用来清除沾着血迹的钻,为了防止损坏电纺丝。破碎的小部分吸量管不能用作实验会产生相当大的误差,
估计会影响的血液细胞浓度,由于其毛管部分的针。因为更大的稀释,误差将较大。