5min TA/Blunt-Zero Cloning Kit

• 兼容：能够同时兼容TA克隆与平末端克隆
• 简单：加入片段即可
• 快速：仅需5min
• GX：克隆效率高且阳性率＞95%

兼容性强

                         图A                                                   图B

图A：TA-Zero Cloning

1.    将Taq酶(如Vazyme的Taq系列)的扩增产物(3’端带A)加入到5 × TA/Blunt-Zero Cloning Mix中，室温反应5 min。

2.    Mix中的平末端化因子将Taq酶扩增产物末端的A碱基去掉，形成平末端化产物。

3.    平末端化产物5’-OH进攻TOPO酶与载体之间的磷酸键，TOPO酶被释放出来，载体与平末端化产物形成环形重组子。

图B：Blunt-Zero Cloning

1.    将高保真酶(如Vazyme的Phanta系列)的扩增产物(平末端)加入到5 × TA/Blunt-Zero Cloning Mix中，室温反应5 min。

2.    平末端产物5’-OH进攻TOPO酶与载体之间的磷酸键，TOPO酶被释放出来，载体与平末端化产物形成环形重组子。

简单快速：

Mix+PCR产物，混匀，离心
室温反应5 mins

转化涂板

推荐使用Vazyme#C505，即Fast-T1 competent cell，冰浴5 min后，可直接涂氨苄培养板。整个连接转化过程10 min。

克隆效率高：

对不同插入片段进行测试并与与竞品比对，克隆数统计：（个）

TA连接测试：

平末端连接测试：

阳性率高：使用插入片段为1kb，转化后随即挑取单克隆进行菌落PCR鉴定，Marker为诺唯赞DL5000 DNA marker（MD104），

测试结果阳性率为

本产品是第二代TOPO克隆试剂盒，包含第二代Topoisomerase、含有自杀基因ccdB的载体以及平末端因子。使用第二代Topoisomerase，配合Z适的buffer，活性更高，进一步提高克隆效率，室温5 min完成GX连接。使用含有自杀基因ccdB的载体，当插入片段与载体成功连接时，破坏ccdB正确表达，宿主细胞能够正常生长，否则宿主细胞不能正常生长，从而实现“Zero”背景。添加平末端化因子，使得本产品能够同时兼容TA克隆与平末端克隆。