冻干羊抗人C3D血清标本要求
1. 血清:
室温血液自然凝固10-20 分钟后,离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保
存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
2. 血浆:
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20 分钟后,离心20
分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。
3.尿液:
用无菌管收集。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀
形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
4.细胞培养上清:
检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。
5.培养细胞:
检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100 万/ml 左右。
通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20 分钟左
右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
6.组织标本:
切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化
后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀
浆器将标本匀浆化。离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检
测,其余冷冻备用。
7.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进
行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
8.不能检测含NaN3 的样品,因NaN3 YZ辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
冻干羊抗人C3D血清应用范围:
酶标试剂、免疫比浊试剂、免疫胶乳试剂生产、提取纯化抗体、组化实验中
对应抗原,或封闭对应杂抗体,测定对应抗原浓度,或抗原夹芯法测定对应
抗体,吸收杂抗原成分,层析纯化抗原,分析与鉴定对应抗原成分,封闭交
叉抗原,测定对应抗原成分,测定抗原纯度等。
1.液体抗血清保存原则:避免反复冻融
2.短期保存的抗血清:如几周内就会使用,收到后推荐在 2-8℃保存,2-8℃短暂保存
数周对活性没有影响。
3.长期保存的抗体:如抗体需超过 1 个月后才会使用,请酌情分装后于-20℃保存。
冻干羊抗人C3D血清操作步骤
试管法(改良 Mayer 法)
1、致敏羊红细胞: 2%绵羊红细胞加等量稀释后的溶血素( 1:2000),混匀,置 37℃水浴 30min。
2、稀释血清:待测血清 0.2ml,加应用液 3.8ml,稀释度为 1:20。
3、配制溶血标准管:全溶血管:2%绵羊红细胞 2ml 加 8ml 蒸馏水,混匀。
50%溶血管:取全溶血管液 2ml 加缓冲液 2ml。
4、按表所示,依次加各成分于试管中,混匀,置 37℃水浴 30min, 第 10 管为非溶血对照:补体 CH50 测定试管法
5、结果测定:取出试管, 2000r/min 离心 10min,对照管应不溶血。肉眼比色,选与 50%溶血标准管相近二管,再用分光光度计测(波长 542nm、 0.5cm 比色杯) OD 值,
确定与标准管Z接近者为终点管,然后按下公式计算 CH50 值:
血清补体 CH50( U/ml) =( 1/血清用量)×稀释度。
如第 5 管为终点管,测待测血清中CH50为66.7U/ml。血清补体CH50正常值为50-100U/ml。