月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤(LST)瓶装颗粒培养基配方计质控标准
标准 | 国标 |
配方(g/L) | 蛋白胨 | 10g | 牛肉膏粉 | 3g | 乳糖 | 5g | 氯化钠 | 5g | 溴甲酚紫 | 0.016g | |
原理 | 蛋白胨、牛肉膏粉提供碳氮源及矿物质;乳糖是可发酵的糖类;氯化钠维持均衡的渗透压;溴甲酚紫为pH指示剂,酸性呈黄色,碱性呈紫色。 |
用法 | 1、称取本品23g(单料)、或46g(双料)或69g(三料),加入蒸馏水或去离子水1 L,搅拌加热煮沸至完全溶解,分装试管或三角瓶,115℃高压灭菌20min,备用。作双料时除蒸馏水或去离子水外其余成分加倍。 2、(1)检验生活饮用水国标发酵法:各取100mL水样加到50mL三料乳糖蛋白胨培养液中, 共2瓶;各取10mL水样加到5mL三料乳糖蛋白胨培养液中,共10管。 (2)检验生活饮用水卫生规范发酵法:取10mL水样接种到10mL双料乳糖蛋白胨培养液中,取1mL水样接种到单料乳糖蛋白胨培养液中,另取1mL水样注入到9mL灭菌生理盐水中,混匀后吸取1mL(即0.1mL水样)注入到10mL单料乳糖蛋白胨培养液中,每一稀释度共接种5管。对已处理过的出厂自来水,需经常检验或每天检验一次,可直接接种5份10mL双料培养基,每份接种10mL水样;检验水源水时,如污染较严重,应加大稀释度,可接种1,0.1,0.01mL甚至0.1,0.01,0.001。每个稀释度接种5管,每个水样接种15管。接种1mL以下水样时,必须做10倍递增稀释后,取1mL接种。每递增稀释一次,换用一支1mL灭菌分度吸管。 (3)滤膜法:挑取可疑菌落接种到乳糖蛋白胨培养液中。 3、将接种管放入到培养箱中36±1℃培养24h。 4、观察结果。如所有乳糖蛋白胨培养管都不产气,则可报告为总大肠菌群阴性,如有产酸产气者,则要进行分离、证实试验。 |
月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤(LST)瓶装颗粒培养基使用注意事项:
1、称量时注意粉尘,佩戴口罩操作以避免引起呼吸道系统不适。
2、干粉培养基使用后立即旋紧瓶盖,避免吸潮结块。
3、自制平板时需注意培养基的厚度,厚度过薄容易造成琼脂水分保持性下降,开裂;因此,一般需要15-20mL(Φ90mm)体积培养基,平板培养基厚度至少为2mm。
4、即用型成品平板应该尽量保持在2-8℃下保存且与存放容器冷凝管保持一定距离以避免冻损坏。产品多次在低温与常温之间变更会引起琼脂的泌水,属于正常现象。使用前应平衡至室温且尽量在无菌干燥箱中预干燥。
月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤(LST)瓶装颗粒培养基常见问题解答:
1,微生物方法验证,要求菌株回收率≥70%,是否有上限要求?(如不得高于或者110%)
答:没有上限。但一般不会高于,因为加进去的菌量是一样的,如果超过可看成是操作上的误差。按微生物的特性,如果不超过太多,是可以接受的,但没有具体上限。(本所控制在110%以内)
2.微生物限度检查法中所用的培养基要进行实用性检查试验,请问这些培养基还需要做无菌检查实验吗?
答:微生物限度检查,药典上没有特别说明对培养基做无菌性检查,但每次都要做阴性对照是检查整个检验系统是否被微生物污染,实际上也包括了培养基的无菌性检查。
3.细菌在液体培养基和半固体培养基中分别呈现什么样的生长现象?
答:细菌在液体培养基中有三种生长现象:大多数细菌在液体培养基中生长繁殖后均匀浑浊;少数链状排列的细菌如链球菌,炭疽芽孢杆菌等则呈沉淀生长;枯草芽孢杆菌、结核分歧杆菌和铜绿假单胞菌等专性需氧菌一般呈表面生长,常形成菌膜。
细菌在半固体培养基主要用于细菌动力试验,有鞭毛的细菌除了沿着穿刺线生长外,在穿刺线两侧也可见羽毛状或雾状浑浊生长。无鞭毛的细菌只能沿着穿刺线呈明显的现状生长,穿刺线两边的培养基仍然澄清透明,为动力试验阴性。
月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤(LST)瓶装颗粒培养基
温馨提示:不可用于临床ZL。