2× Hieff Canace® PCR Master Mix 高保真PCR预混液（for Multiplex PCR )_详细资料

产品信息

供应商：上海翊圣生物科技有限公司英文名： 2× Hieff CanaceTM PCR Master Mix (for Multiplex PCR) 规格： 1ml

产品信息

产品名称 产品编号 规格 价格（元）

2× Hieff Canace^® PCR Master Mix 高保真PCR预混液（for Multiplex PCR ) 10138ES03 1 mL 625.00

2× Hieff Canace^® PCR Master Mix 高保真PCR预混液（for Multiplex PCR ) 10138ES08 5×1 mL 2355.00

2× Hieff Canace^® PCR Master Mix 高保真PCR预混液（for Multiplex PCR ) 10138ES25 25×1 mL 4255.00

2× Hieff Canace^® PCR Master Mix 高保真PCR预混液（for Multiplex PCR ) 10138ES50 50 mL 8355.00

2× Hieff Canace^® PCR Master Mix 高保真PCR预混液（for Multiplex PCR ) 10138ES60 250 mL 38255.00

2× Hieff Canace^® PCR Master Mix 高保真PCR预混液（for Multiplex PCR ) 10138ES76 500 mL 72355.00

产品描述
2× Hieff Canace^® PCR Master Mix (for Multiplex PCR)是基于新一代高保真DNA聚合酶Canace开发的，针对于高通量测序领域中多重PCR文库构建应用专门优化的。Canace酶基于Pyrococcus furiosis DNA Polymerase，经基因工程改造而成。其蛋白结构包含5’→3’聚合酶结构域和经过改造的3’→5’外切酶结构域。这种组合大幅度提升了酶的耐热性，保真性。耐热温度达到98℃，保真性是Taq DNA聚合酶的52倍，普通Pfu DNA聚合酶的6倍。酶溶液中添加了独特的延伸因子，扩增速度达到15 sec/kb。本产品为2×mix PCR混合液，可添加的模板、引物体积范围大，使您的实验更加灵活（本公司另有5×mix可供选择，Cat.10137）。

产品应用
多重PCR文库构建。

质量控制
核酸外切酶残留检测：50 μL反应体系，本品和1 μg λDNA –Hind Ⅲ，37℃下孵育4 h，DNA的电泳谱带无变化。
核酸内切酶残留检测：50 μL反应体系，本品和1 μg λDNA，37℃温育4 h，DNA的电泳谱带无变化。
大肠杆菌残留DNA检测：50 μL体系中，加入本品，以无菌ddH₂O为模板，扩增E.coil 16s rDNA 基因。30个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。

运输与保存方法
冰袋运输。-20℃保存。有效期2年。

注意事项
1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
2. 值得注意的是，多重PCR建库实验本身具有一定的难度，通常需要进行优化，如您在使用本产品时遇到困难，可联系我们的技术支持，我们有多重优化方案，可帮助您更好的构建实验体系。

PCR反应体系（推荐冰上配制）

组分体积 μL

ddH₂O to 50

DNA模板 X

Primer mix (X μM) X

2× Hieff Canace^® PCR Master Mix (for Multiplex PCR) 25

【注】：1）试剂使用：使用前要充分解冻混匀。
2）引物与模板：轮多重PCR进行target enrichment，其中的引物和模板条件需要自行摸索。
第二轮多重PCR引物的浓度建议使用：10 μM引物加2 μL左右。

轮PCR扩增程序：

循环步骤 温度（℃） 时间 循环数

预变性 98℃ 3 min 1

变性 98℃ 20 sec 15-45

退火/延伸 60℃ 4-10 min

终延伸 72℃ 5 min 1

【注】 在PCR仪上设置上表中的反应程序进行多重PCR反应（设置热盖温度至105℃左右）。
退火/延伸时间：100重PCR推荐4 min；1000重推荐8-10 min需要自己根据引物情况摸索。

PCR产物磁珠纯化
建议在50 μL 反应体系中加45μL磁珠（Cat:12601）进行产物纯化。

第二轮PCR扩增程序：

循环步骤 温度时间 循环数

预变性 98℃ 30 sec 1

变性 98℃ 15 sec 25-35（可自行优化）

退火 60℃ 30 sec

延伸 72℃ 1 min

终延伸 72℃ 5 min 1

【注】：退火温度和时间：推荐使用60℃，也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的Z适温度。推荐退火时间设置为30 sec，可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。

PCR产物磁珠纯化
建议在50 μL 反应体系中加45μL磁珠（Cat:12601）进行产物纯化。

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温馨提示：不可用于临床ZL。

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