供应商:
上海翊圣生物科技有限公司
英文名:
2× Hieff CanaceTM PCR Master Mix (for Multiplex PCR)
规格:
1ml
产品信息 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格(元) |
2× Hieff Canace® PCR Master Mix 高保真PCR预混液(for Multiplex PCR ) | 10138ES03 | 1 mL | 625.00 |
2× Hieff Canace® PCR Master Mix 高保真PCR预混液(for Multiplex PCR ) | 10138ES08 | 5×1 mL | 2355.00 |
2× Hieff Canace® PCR Master Mix 高保真PCR预混液(for Multiplex PCR ) | 10138ES25 | 25×1 mL | 4255.00 |
2× Hieff Canace® PCR Master Mix 高保真PCR预混液(for Multiplex PCR ) | 10138ES50 | 50 mL | 8355.00 |
2× Hieff Canace® PCR Master Mix 高保真PCR预混液(for Multiplex PCR ) | 10138ES60 | 250 mL | 38255.00 |
2× Hieff Canace® PCR Master Mix 高保真PCR预混液(for Multiplex PCR ) | 10138ES76 | 500 mL | 72355.00 |
产品描述
2× Hieff Canace® PCR Master Mix (for Multiplex PCR)是基于新一代高保真DNA聚合酶Canace开发的,针对于高通量测序领域中多重PCR文库构建应用专门优化的。Canace酶基于Pyrococcus furiosis DNA Polymerase,经基因工程改造而成。其蛋白结构包含5’→3’聚合酶结构域和经过改造的3’→5’外切酶结构域。这种组合大幅度提升了酶的耐热性,保真性。耐热温度达到98℃,保真性是Taq DNA聚合酶的52倍,普通Pfu DNA聚合酶的6倍。酶溶液中添加了独特的延伸因子,扩增速度达到15 sec/kb。本产品为2×mix PCR混合液,可添加的模板、引物体积范围大,使您的实验更加灵活(本公司另有5×mix可供选择,Cat.10137)。
产品应用
多重PCR文库构建。
质量控制
核酸外切酶残留检测:50 μL反应体系,本品和1 μg λDNA –Hind Ⅲ,37℃下孵育4 h,DNA的电泳谱带无变化。
核酸内切酶残留检测:50 μL反应体系,本品和1 μg λDNA,37℃温育4 h,DNA的电泳谱带无变化。
大肠杆菌残留DNA检测:50 μL体系中,加入本品,以无菌ddH2O为模板,扩增E.coil 16s rDNA 基因。30个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳,EB染色,无扩增条带。
运输与保存方法
冰袋运输。-20℃保存。有效期2年。
注意事项
1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
2. 值得注意的是,多重PCR建库实验本身具有一定的难度,通常需要进行优化,如您在使用本产品时遇到困难,可联系我们的技术支持,我们有多重优化方案,可帮助您更好的构建实验体系。 PCR反应体系(推荐冰上配制) 组分 | 体积 μL |
ddH2O | to 50 |
DNA模板 | X |
Primer mix (X μM) | X |
2× Hieff Canace® PCR Master Mix (for Multiplex PCR) | 25 |
【注】:1)试剂使用:使用前要充分解冻混匀。2)引物与模板:轮多重PCR进行target enrichment,其中的引物和模板条件需要自行摸索。 第二轮多重PCR引物的浓度建议使用:10 μM引物 加2 μL左右。轮PCR扩增程序: 循环步骤 | 温度(℃) | 时间 | 循环数 |
预变性 | 98℃ | 3 min | 1 |
变性 | 98℃ | 20 sec | 15-45 |
退火/延伸 | 60℃ | 4-10 min |
终延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
【注】 在PCR仪上设置上表中的反应程序进行多重PCR反应(设置热盖温度至105℃左右)。退火/延伸时间:100重PCR推荐4 min;1000重推荐8-10 min需要自己根据引物情况摸索。PCR产物磁珠纯化建议在50 μL 反应体系中加45μL磁珠(Cat:12601)进行产物纯化。第二轮PCR扩增程序: 循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 98℃ | 30 sec | 1 |
变性 | 98℃ | 15 sec | 25-35(可自行优化) |
退火 | 60℃ | 30 sec |
延伸 | 72℃ | 1 min |
终延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
【注】:退火温度和时间:推荐使用60℃,也可根据需要,设立温度梯度去摸索引物退火的Z适温度。推荐退火时间设置为30 sec,可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。PCR产物磁珠纯化建议在50 μL 反应体系中加45μL磁珠(Cat:12601)进行产物纯化。相关产品 产品名称 | 货号 | 规格 | 价格(元) |
Hieff ® Multiplex PCR Kit(Mg2+ free) | 12278ES50/76 | 100/500 T | 875/3165 |
Hieff ® Multiplex PCR Kit | 12279ES50/76 | 100/500 T | 875/3165 |
Hieff ® Multiplex PCR Master Mix | 12280ES50/76 | 50/200 T | 875/3165 |
Hieff NGS® DNA Selection Beads 分选磁珠(替代AMPure XP Beads) | 12601ES03/08 | 1/5mL | 296/986 |
5×Hieff Canace® PCR Master Mix 高保真酶预混液(for multiplex PCR) | 10137ES03/08/25/76 | 1/5/25 mL | 1215/3065/11165 |
温馨提示:不可用于临床ZL。