A-375人恶性黑色素瘤细胞【可带STR鉴定】

A-375人恶性黑色素瘤细胞【可带STR鉴定】（培养基：DMEM+10% FBS+1% 双抗）如需A-375细胞的详细资料、照片及细胞培养操作指南欢迎联系我们。
发货方式：
复苏后发货：我们复苏细胞后发货，货期一周左右，免运费。（气温较好建议复苏后发货）
冻存发货(干冰运输）：需增加干冰运费，选择干冰运输的我们发两管细胞，为了保证客户接种可靠性多发一管细胞。（气温低于0℃须冻存发货）
细胞发货采取专业的运输包装，并选择Z快捷的运输方式（顺丰速运或其他空运快递）
本公司细胞引种来源：ATCC、DSMZ、ECACC、JCRB、武大细胞库、上海生化细胞所、ZG科学院典型培养物保藏委员会等

细胞在发货前进行质检：
1、细胞存种的活性检测
2、细菌、真菌、霉菌污染物镜检
3、衣原体、支原体检测（荧光法、培养法等）

细胞质量保证及售后：
1、 细胞为三代以内，活体。运输过程中细胞出现污染和状态不好，我们完全免费重新发货。
2、 实验过程中若确定是客户问题，客户仅需支付物流和耗材费用，我们可重新发货。其他根据情况灵活处理。
3、 产品使用过程中，华拓生物可提供技术上的指导。

细胞收货处理方法：
一、贴壁细胞
1、 接收到细胞，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞 100X,200X 各一张）。
2、用 75%的酒精消毒外包装,在超净工作台内打开外包装。
3、严格遵循无菌操作规范，打开细胞培养瓶。
4、37度平衡1-2小时。
5、用移液管吸取培养基，到50ml离心管中，剩下细胞密度达到80%至90%可以传代，如没有达到添加6ml新鲜培养基继续培养。
6、如果肉眼检查上清有细胞，对50ml上清进行离心收集细胞，如果细胞连片状态，弃掉上清对收集的细胞进行胰酶消化（1ml胰酶37度），接种培养。

二、悬浮细胞
1、接收到细胞，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞 100X,200X 各一张）。
2、用 75%的酒精消毒外包装,在超净工作台内打开外包装。
3、严格遵循无菌操作规范，打开细胞培养瓶。
4、细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（不能直接倾倒）。
5、1000rpm，5min 离心，用吸管小心吸出上清，加入培养基，重悬细胞。
6、将重悬好的细胞转入六孔板或者细胞培养瓶种，加入新鲜培养基，置于 37℃，5%CO2 培养（大部分细胞）。

细胞培养操作：华拓细胞培养操作指南
细胞常见问题：细胞培养常见问题分析

A-375人恶性黑色素瘤细胞培养步骤：
1、吸走用于培养基，加入3-5mL PBS后轻轻晃动培养瓶润洗细胞；
2、吸干净PBS后加入1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA，轻轻摇晃培养皿使胰酶浸没细胞表面，培养瓶放37度培养箱消化；（悬浮细胞不需要消化，细胞对于消化比较敏感，消化过度会严重影响细胞状态，导致细胞传代死亡漂浮或者传代后不长。细胞消化到细胞间隙变大但未脱落，可以轻轻吹下时即可终止，禁止消化到细胞完全漂浮。混匀细胞时尽量轻柔，不要吹出大量气泡。）
3、加入6-8ml完全培养基终止消化，轻轻吹下细胞混匀；
4、将混匀的细胞1000rpm（约150g）离心3min，弃上清，再用新鲜培养基重悬37度培养箱继续培养；
5、传代比例: 不同细胞生长速度不一，具体传代比例视细胞生长速度而定，大部分细胞适用1:3-1:4传代，生长较慢的细胞可以1:2传代。
6、细胞冻存：冻存液：92%完全培养基+8%DMSO（可以根据实验室条件自行选择）；降温步骤：4度10min，-20度2h，-80过夜后液氮保存。推荐冻存液：92%完全培养基+8%DMSO，也可以根据实验室条件自行选择。