钙离子定量检测荧光探针Fura 2-AM 同仁Dojindo F025 现货_详细资料

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Fura 2是Z常用的检测细胞内钙离子浓度的荧光探针之一，Fura 2-AM(钙离子荧光探针)需用无水DMSO(anhydrous DMSO)溶解。
Fura 2对Quin 2的荧光特性做了改进。1 μM Fura 2结合后的信号强度相当于30 μM的Quin 2结合后的信号强度。这样就保证在实验中可以使用比Quin 2的浓度低得多的Fura 2指示剂。Fura 2是一种使用Z广泛的比率测量的钙荧光指示剂。目前适用于Fura 2实验的设备有很多，它特别适合于用数字成像显微镜来检测。它比Indo 1更不易受到光褪色作用的影响。细胞形状的改变有时候会影响340 nm和380 nm的荧光比率，比如，平滑肌收缩会同时引起这些波长的荧光信号强度的减小。另外，对于血管来说，340 nm的信号强度的增加会因为血管收缩而趋向于变小，而380 nm信号强度的减小会因为血管收缩而变大。Fura 2-AM是Fura 2的一种乙酰甲酯衍生物，通过培养，能够轻易地负载到细胞中。
Fura 2可以和钙离子(Ca²⁺)结合，结合钙离子后在330-350 nm激发光下可以产生较强的荧光，而在380 nm激发光下则会导致荧光减弱。这样就可以使用340 nm和380 nm这两个荧光的比值来检测细胞内的钙离子浓度，可以消除不同细胞样品间荧光探针装载效率的差异，荧光探针的渗漏，细胞厚度差异等一些误差因素。
Fura 2-AM是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。Fura 2-AM的荧光比较弱，激发波长为369 nm，发射波长为478 nm，并且其荧光不会随钙离子浓度改变而改变。Fura 2-AM进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成Fura 2，从而被滞留在细胞内。Fura 2和钙离子结合后，激发波长为335 nm(激发波长随离子浓度的的不同而有所不同)，发射波长为505nm。实际检测时推荐使用的激发波长为340nm，发射波长为510 nm。如果做双波长检测，则推荐使用的激发波长为340 nm和380 nm。
操作说明 (for NG 108-15/ Neuronal Cell Line)*
试剂:
1 mM 的Fura 2-AM/DMSO (将1 mg 的Fura 2-AM 溶于 1 ml DMSO)
Hanks'balanced salt solution (HBSS)
HEPES buffer saline (20 mM HEPES, 115 mM NaCl, 5.4 mM KCl, 1.8 mM CaCl₂, 0.8 mM MgCl₂, 13.8 mM glucose, pH 7.4)

操作:
1. 用含有5%的胎牛血清的DMEM在玻璃底培养皿中培养细胞。
2. 将培养液换成1 mM的 dibutyl cAMP/DMEM，再培养细胞3-4天来诱导树突。
3. 用HEPES buffer saline来稀释1 mM 的Fura 2-AM DMSO溶液，制成1μM的Fura 2-AM working
solution。
4. 除去培养液，加入0.5 ml 的Fura 2-AM working solution。
5. 培养20分钟，然后除去Fura 2-AM working solution。
6. 用HEPES buffer saline洗涤细胞一次，然后将细胞在HEPES buffer saline中培养1小时。
7. 将此细胞用于荧光钙离子检测。
8. 激发波长380 nm（游离钙）和340 nm（结合钙），发射波长510nm。
*标记的条件因细胞种类而异，在每次实验前，请先确定条件。以上方法仅供参考。
染色实例1：
视网膜双极细胞钙离子浓度定标测定
（A）分离的视网膜双极细胞预孵育2 ug/ml 的Fura-2 AM 20分钟，且存在有ionomycin时，分别在无钙、10 mM游离钙离子以及用无钙液洗脱的溶液中的图像；（B）双极细胞不同区域（1～3）的胞内钙离子浓度变化的连续记录图。10 mM游离钙离子溶液可使双极细胞胞体和轴突终末钙离子浓度显著升高，并可部分洗脱。
图像处理软件SimplePCI6，CCD Hamamatsu ORCA-ER，显微镜Olympus倒置显微镜IX70，40倍油镜。
（复旦大学神经生物学研究所杨雄里院士提供照片）

染色实例2：

加载了Fura 2的新鲜分离的大鼠肝脏细胞PE刺激后出现规则胞浆钙振荡，上图为细胞明场图和不同时间点（min）的比例成像（F340/F380）,下图为影响Fura 2荧光强度的比例（F340/F380）随时间的变化。成像系统：Photon Technology International Inc.,显微镜Nikon TE2000U，CCD相机QuantEM512S，软件ERP。
（北京师范大学细胞生物学研究所 崔宗杰教授提供照片）

染色实例3：
左图（Control）为施加高钾（50 mM）前，急性分离的大鼠背根神经节（DRG）细胞胞内钙离子浓度较低，施加50 mM KCl 5s后，DRG细胞内钙离子浓度快速升高（右图）

温馨提示：不可用于临床ZL。

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