50 μg Fluo 3-AM的配制
| DMSO（μl） | 10 | 20 | 30 | 40 | 44 | 50 |
| 浓度(mmol/l） | 4.4 | 2.2 | 1.5 | 1.1 | 1.0 | 0.9 |
操作说明(for Human T cells)*
试剂:
2 mM的Fluo 3-AM/DMSO
Pluronic F127
Hanks’ balanced salt solution (HBSS)
HEPES buffer saline (10 mM HEPES, 1 mM Na2HPO4, 137 mM NaCl, 5 mM KCl, 1 mM CaCl2, 0.5 mM MgCl2, 5 mMglucose, 0.1% BSA, pH 7.4)
操作: 1. 配制2mM的Fluo 3-AM/DMSO溶液即：将1mg Fluo 3-AM溶于442ulDMSO中（推荐现配现用）。
2. Pluronic F127先用DMSO配制成5%（W/V）的溶液，室温保存。使用时加入到上述Fluo 3-AM/DMSO溶液至终浓度0.05%（W/V）.
Pluronic F127可以防止Fluo 3-AM在HBSS中聚合并能帮助其进入细胞。
3. 用HBSS稀释Fluo 3-AM溶液，制备4 µM的Fluo 3-AM working solution。
4. 将Fluo 3-AM working solution加入细胞，在37 ℃培养20分钟。
5. 加入5倍体积的含有1%胎牛血清的HBSS，再继续培养40分钟。
6. 用HEPES buffer saline洗涤细胞3次，然后用HEPES buffer saline使细胞重悬浮，制成1x105 cells/ml的溶液。
7. 37 ℃下培养10 分钟，然后用该细胞进行荧光钙离子检测。
8. 观察528 nm (excitation: 490-500 nm)时的荧光。
*标记的条件因细胞种类而异，在每次实验前，请先确定条件。以上方法仅供参考。
