荧光染料罗丹明123(Rh123)是一种可对活细胞线粒体染色的细胞染色试剂。Rh123可透过细胞膜且在活细胞的线粒体内聚集,并发出黄绿色荧光。Rh123用于对许多种细胞进行染色,包括植物细胞和细菌。由于细胞内ATP的量与Rh123的荧光强度之间有相关性,此荧光染料被应用于检测细胞内的ATP。Rh123还用于癌症研究。
染色例:
染色步骤
1. 将0.4 mg Rh123溶解到1 ml DMSO中制备成1 mM Rh123-DMSO溶液。
2. 用载玻片准备细胞。细胞数目应为5×104-5×105个/ml。
3. 孵育该载玻片,用PBS或Hank's液洗涤细胞。
4. 用培养基稀释1 mM Rh123溶液以制备1-20 µM Rh123缓冲液。
5. 将Rh123缓冲液a) 加入载玻片并在37℃下孵育30分钟至1小时。
6. 去除Rh123缓冲液并用培养基洗涤细胞。b)
7. 用带有荧光素滤光片的荧光显微镜观察细胞。
a) 加入细胞前将Rh123缓冲液放在37℃下孵育。
b) 洗涤细胞后为了固定,加入10%缓冲液并孵育15-20分钟,接着用PBS洗涤。