试剂盒的检测原理:
参考图1,组织、细胞等样品表面的抗原先与一抗结合,后者再与生物素标记的二抗结合;按照适当比例将Streptavidin和生物素标记的辣根过氧化物酶(Biotin-labeled Horseradish Peroxidase, Biotin-HRP)或生物素标记的碱性磷酸酶(Biotin-labeled Alkaline Phosphatase, Biotin-AP)混合,形成网络状的SABC-HRP或SABC-AP (Streptavidin-Biotin Complex containing HRP/AP)复合物;接着二抗上标记的生物素再与SABC-HRP/AP结合,加入HRP/AP底物进行显色或发光反应即可检测到相应的信号。其中Streptavidin和Biotin-HRP/AP混合后形成网络状复合物是信号能被放大的关键,相当于一个待检测的生物素分子通过SABC-HRP/AP复合物的识别可以由很多个HRP/AP分子来显示其信号,从而达到了信号放大的效果。
图1. SABC试剂盒的检测原理图。图中以生物素标记的HRP为例,生物素标记AP的检测信号放大原理与其完全一致。
试剂盒检测效果:
参考图2和图3,免疫染色的信号可以轻松增强5倍以上!
图2. Hela细胞Tubulin免疫染色效果图。A. 阴性对照组(不加一抗)。B. SABC-HRP实验组。C. HRP标记二抗对照组。
图3. Hela细胞Tubulin免疫染色效果图。A. 阴性对照组(不加一抗)。B. SABC-AP实验组。C. AP标记二抗对照组。