shRNA慢病毒载体构建实验外包服务

【嘉美实验】实验服务简介  shRNAs (RNA-Short hairpin RNAs)：即短发夹RNA，是能够形成发夹结构的非编码小RNA分子。克隆到载体中的shRNA包括两个短的反向重复序列，中间由一茎环（loop）序列分隔，组成发夹结构，由polⅢ启动子（如人/鼠源的U6启动子和人H1启动子）控制，随后连上5-6个T作为polⅢ的转录终止子。嘉美实验可以根据靶基因设计shRNA，并合成2条互补的、编码shRNA的DNA单链，退火后连接到慢病毒载体的pol Ⅲ 启动子下游。shRNA慢病毒载体转染细胞后，经由细胞内的RNAi通路处理形成siRNA而发挥干扰作用。

shRNA慢病毒载体构建优势
1、用途广泛，既可被包装产生shRNA慢病毒，又能以质粒形式转染细胞。
2、与化学合成的siRNA相比，shRNA以质粒或病毒形式进入细胞，不易降解，更稳定。
3、载体多样，筛选标签种类丰富。

shRNA慢病毒载体构建内容
1、设计shRNA序列：根据目的mRNA序列设计3条shRNA序列。
2、模板合成：合成每条编码shRNA的单链DNA模板，退火形成DNA双链。模板链后面连接RNA PolyIII聚合酶转录终止位点，且两端分别设计酶切位点。
3、DNA双链和慢病毒载体的连接。
4、连接产物的转化。
5、测序验证。

shRNA慢病毒载体构建实验服务结果交付
客户提供：靶基因的序列或设计好的shRNA序列、指定载体     
交付产物：shRNA慢病毒载体、载体图谱、测序结果     


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