实验技术简介:美国SABiosciences公司在功能分类基因芯片领域具有 国际领先地位,其产品灵敏度高、准确可靠、重复性好的优越性已广为国际科学界认可。 SuperArray寡核苷酸(Oligo)基因芯片是使用位于mRNA序列3’端的约60bp的基因特异性寡核苷酸制作而成的功能分类基因芯片,每张 Oligo芯片通常含有100至 400多个目的基因。功能分类Oligo基因芯片使用的寡核苷酸序列均经过严格的设计筛选,提高了杂交的特异性,实验结果重复性更高;使用特殊的探针合成 方法(TrueLabeling-AMP线性RNA扩增试剂盒)针对样本的mRNA3’端进行探针的扩增和标记,以合成cRNA探针,提高了芯片杂交效 率,从而进一步增强芯片的检测灵敏度,仅需要0.1ugRNA,可检测的RNA为10fm。

SABiosciences 公司总共设计了170多种功能分类Oligo芯片,涵盖生命科学研究的各个方面,包括:细胞凋亡基因芯片、细胞周期基因芯片、肿瘤基因芯片、常见疾病研究 基因芯片、细胞因子与炎症反应基因芯片、细胞外基质与黏连分子基因芯片、神经科学基因芯片、信号转导基因芯片、干细胞基因芯片、毒理和药理基因芯片等,种 属包括人、小鼠、大鼠。
实验操作流程:
1、样品RNA抽提
2、RNA质量检测
3、RNA芯片检测
4. 提供实验报告:包括详细的实验方法和芯片实验数据和图表
实验注意事项:
客户提供:
1、组织样品:新鲜组织放入液氮或-80度保存,组织不少于100mg;
2、培养细胞:通过细胞计数取不少于2×106个细胞于EP管,加入0.5ml生理盐水或蛋白保护剂,混匀后保存于冰箱(-80℃,避免反复冻融);
3、血液细胞标本:以抗凝管保存血样或以淋巴细胞分离液分离细胞后加入0.5ml生理盐水或蛋白保护剂,保存(-80℃可长期保存,避免反复冻融);
4、血清或细胞培养液标本:离心去掉杂质后取上清入EP管,保存(4℃可保存15-20天,-80℃可长期保存,避免反复冻融);
5、样本运输:可选择以下任何一种方式寄送标本
组织样本、细胞样本以干冰运输或加入蛋白保护剂后,加冰袋寄送;
细胞样本也可直接寄送培养瓶(密封保证不污染、培养液不漏出);
血清或上清液直接加冰袋寄送(送视路程远近2-3天可到达)。
交付标准:
1、芯片检测数据
2、完整项目报告(材料、试剂、仪器、方法、数据分析、实验结果)
其他:
1、oligo芯片是在cDNA芯片的基础上发展起来的,通过预先设计并合成特性的寡核苷酸一般25-60mer长度,然后将其点样到特定的基质上构成芯片。
2、克服了由于探针杂交条件变化巨大导致的数据结果的不可靠。但也存在点样时引物浓度不同引起的信号差异变化。
3、 由于Oligo芯片的探针是初期一次性合成,因此 Oligo芯片需要合成的数量十分巨大才能使每片的成本摊薄。事实上,由于每次芯片的使用很少,加上实验分析等消耗的时间,从实验初期到实验末期的时间跨 度很大,因此早期合成的Oligo探针存在着降解而导致检测质量下降的情况,这样,除非重新合成新的探针,否则后期的芯片的检测质量会大大的降低。同时, 如果实验目标发生变动,则合成的探针无法继续使用,造成巨大的浪费。