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血小板的分离:
1、血小板的分离方法一:
①、硅化管的制备:
将硅油与石油醚按3:97的比例配制,取适量于10ml玻璃管内,转动玻管,使硅油均匀地涂布于玻璃管内壁,把每只玻管内的硅油稍倒干净后放入烤箱,200℃烤1.5~2小时。
也可直接用干净的塑料管来代替硅化管,不需进行硅化。
②、血小板的制备:
a、取抗凝全血收集在硅化管内或塑料管内。
b、800转/分 离心10分钟。
c、取上层血浆于硅化管或塑料管中,以3000转/分 离心10分钟。
d、弃去上层血浆,管底沉淀物即为血小板。
e、用生理盐水洗三次,每次以3000转/分 离心10分钟,去上清留沉淀。
[注]:分离血小板时所有的玻管及滴管均要硅化,或用塑料试管或塑料滴管。
2、血小板分离方法二:
①、将抗凝全血收集在硅化玻璃管或塑料管内,用生理盐水,或者Han’s液或含EDTA的缓冲液作等体积稀释,混匀。
②、取淋巴细胞分离液 2ml,置10ml圆底试管中(分离血小板的玻璃试管均要硅化,或用塑料管及塑料滴管)
③、用滴管将稀释血沿管壁徐徐铺于分离液界面上,注意勿冲破界面。
④、以2000转/分 水平离心15分钟,取出,可见试管内分四层,层为含血小板的血浆层;第二层很薄,是白雾状或白絮状,为白细胞层;第三层为分离液层;第四层为红细胞层。
⑤、用尖毛细滴管直接沿管壁吸取层富血小板的血浆层,注入硅化玻璃管或塑料管内。
⑥、以3000转/分,离心10分钟,将上层血浆倒去,管底沉淀物即为血小板。
⑦、用生理盐水或含EDTA的溶液清洗2~3次(每次3000转/分 离心10分钟),弃上清留沉淀反复2~3次。
⑧、将血小板记数后备用。
温馨提示:不可用于临床ZL。