服务名称:
WB,IH,IF,ICC实验外包服务
提供商:
嘉美实验
实验步骤:1).收集约1×106--107细胞(贴壁细胞用PBS洗一遍,胰酶消化后离心,悬浮细胞直接离心);
2).洗涤细胞:用预冷的PBS轻轻重悬细胞沉淀,取少量细胞用于计数,剩余细胞2000rpm,4°C离心5min,弃上清。
3).预处理:加入1-2.5ml临用前添加了PMSF的线粒体分离试剂至细胞中,轻轻悬浮细胞,冰浴放置10—15min。
4).把细胞悬液转移到玻璃匀浆中,匀浆20下左右,把细胞匀浆2000rpm,4°C离心10min。
5).小心把上清转移到另一离心管中,12000rpm,4°C离心10min。
6).小心去除上清,沉淀即为分离得到的细胞线粒体。
7).在分离得到的线粒体样品中加入150—200ul临用前添加了PMSF的线粒体裂解液裂解线粒体,裂解后的线粒体可以用于PAGE、Western、IP及线粒体中的酶活性检测。