中文名称:
Rapamycin 自噬诱导剂,mTORYZ剂
英文名称:Rapamycin(Sirolimus)
产品规格:1mg
发货周期:1~3天
Rapamycin 自噬诱导剂,mTORYZ剂CAS:53123-88-9
分子量:914.18
储存:-20℃,有效期36个月
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注意事项:
1、悬浮细胞用此法时必须经离心后才能吸出上清再加DMSO。
2、Formazan 的生成不仅与活细胞数成比例,也受作用时间的影响,因此当样品较多时测定的OD 值可能随时间而变。
3、MTT 溶液为黄色,需避光保存,长时间光照会导致失效。当颜色变为灰绿色时,请勿使用。MTT 溶液在4℃或较低温度情况下会凝固,可以20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。
4、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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H9c2细胞,大鼠心肌细胞 人肝癌细胞,HepG2/2-15细胞 CL-0128JeKo-1(人套细胞淋巴瘤细胞)5×106cells/瓶×2
二氢叶酸还原酶缺陷型ZG仓鼠卵巢细胞;CHO/dhFr-
CD38 Others Human 人 CD38 人细胞裂解液 (阳性对照)
MPC-11(小鼠浆细胞瘤) 5×106cells/瓶×2
MS751(人颈表皮癌细胞) 5×106cells/瓶×2
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NCI-H1688(人典型小细胞肺癌细胞) 5×106cells/瓶×2
Rapamycin 自噬诱导剂,mTORYZ剂操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。
8、结果分析
a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(完全培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(完全培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)