免疫印迹辣根过氧化酶/四甲基联苯胺显色

免疫印迹辣根过氧化酶/四甲基联苯胺显色试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

免疫印迹辣根过氧化酶/四甲基联苯胺（HRP-TMB）显色试剂是一种旨在通过过氧化物酶的催化，底物四甲基联苯胺氧化形成蓝黑色沉淀产物，以此鉴定过氧化物酶活性，进而确定目标分子表达的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于辣根过氧化酶标记的免疫学检测包括蛋白质西方杂交（Western blot）和其它分子检测，例如南方（Southern blot）、北方（Northern blot）和点状（Dot blot）印迹检测等。产品即到即用，性能稳定，操作便捷，敏感度高，显色清晰，重复性好。

技术背景

四甲基联苯胺（3,3’,5,5’-tetramethylbenzidine；TMB）是过氧化物酶（Peroxidase）的生色底物，在过氧化物酶的催化下，电子供体TMB底物在过氧化氢氧化下失去电子，在pH4.9条件下，产生游离自由阳离子单电子氧化产物，呈现出颜色变化和沉积，形成蓝黑色沉淀产物，且不受乙醇影响。被用于检测过氧化物酶的活性，灵敏度高（可达0.15纳克），特异性好。

产品内容

染色液（Reagent A） 100毫升

产品说明书       1份

保存方式

保存在4℃冰箱里，避免光照；有效保证6月

用户自备

无离子水：用于清洗染色后的印迹膜

PBST（12131）或TBST（12130）溶液：用于印迹膜清洗

成像仪：用于记录染色图像

实验步骤

• 准备好含有待测分子的固相膜（5 X 8 cm²）：包括电泳、转印、封阻、一抗（或生物素）处理、辣根过氧化酶（HRP）标记的二抗（或链霉亲和素）处理、清洗等步骤
• 加入5毫升室温预热的染色液（Reagent A），铺满整个固相膜表面
• 在室温下孵育5至30分钟，或直至蓝黑色沉淀出现；避免光照
• 用镊子夹起固相膜，放进用户自备的无离子水里
• 室温下孵育1分钟
• 空气中晾干，避免光照
• 数码相机拍照记录

 注意事项

• 本产品为10次（10毫升体系）或20次（5毫升体系）操作
• 本产品较之二氨基联苯胺（DAB）等染色，敏感10至20倍
• 可用于约1000 cm²免疫印迹膜片：建议5毫升用于1张5 X 8 cm²膜片
• 用户可以根据需求，调整试剂用量
• 操作时，须戴手套
• 本产品适合于PVDF或硝酸纤维素（nitrocellulose）印迹膜
• 染色前清洗时，建议使用PBST或TBST溶液，避免使用酚类化合物和防腐剂，例如硫柳汞（thimerosal）
• 染色液（Reagent A）含有有机溶剂
• 染色时间可以根据情况调整，以免造成过度染色或背景过深
• 如果封闭欠佳，易造成背景颜色过深
• 本产品只能用于辣根过氧化酶（HRP）标记的免疫印迹染色，不适合于组织化学沉淀反应和原位杂交
• 如果染色过快或过深，以及染色沉淀物漂浮，建议稀释一抗和二抗浓度
• 固相膜染色后可在暗室里保存1周，但不能保存
• 本公司提供系列免疫印迹染色试剂产品

质量标准

• 本产品经鉴定性能稳定
• 本产品经鉴定显色清晰