冰冻切片组织TUNEL荧光测定试剂盒产品说明书(中文版)
主要用途
YIJI冰冻切片组织TUNEL荧光测定试剂是一种旨在使用标准化的化学方法,包括固着、封阻、通透等完整步骤,从存档中的冰冻组织切片中探寻DNA断点,即运用修饰过的核苷酸,在末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT)的帮助下,对DNA单链或双链上断点处的3’末端进行荧光素标记,原位探测和定量分析单细胞水平的DNA降解状况的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。主要适用于冰冻组织切片的DNA降解测定。广泛用于细胞凋亡的研究。产品严格无菌,即到即用,反应敏感,操作简捷,性能稳定。
技术背景
细胞凋亡,或细胞程序性死亡,在诸如形态发育、免疫系统调节、以及肿瘤和神经退行性疾病等各种生物学过程中,起着实质性的作用。凋亡细胞具有形态、生化、和分子方面的显著特征。其中内源性核酸酶的激活,将DNA链在核小体间连接区切成缺口,使核内DNA断裂成小片断。在组织细胞原位DNA切口处可被末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT)标记上生物素dUTP,即TUNEL(Terminal deoxynucleotidyl Transferase Biotin-dUTP Nick End Labeling),然后通过与荧光素缀合卵白素(FITC conjugated avidin)的反应,显示绿色荧光(激发波长488nm, 散发波长530nm)。
产品内容
YIJI清理液(Reagent A) 120毫升
YIJI固着液(Reagent B) 1毫升
YIJI封阻液(Reagent C) 500微升
YIJI酶标液(Reagent D) 500微升
YIJI荧光液(Reagent E) 500微升
产品说明书 1份
保存方式
保存YIJI封阻液(Reagent C)、YIJI酶标液(Reagent D)和YIJI荧光液(Reagent E)在-20℃冰箱里,严格避免反复冻融,其余的保存在4℃冰箱里;YIJI荧光液(Reagent E),避免光照;有效保证6月
用户自备
小型染色缸:用于切片的清洗操作
(共聚焦)荧光显微镜:用于细胞染色后观察分析
特别注意
- YIJI酶标液(Reagent D)不能在室温下冻融,而必须在冰槽里冻融,冻融后即刻使用;严禁反复冻融;考虑分装,以备下次使用
- YIJI荧光液(Reagent E)避免光照
- 每次移取试剂,须更换枪头,以免污染母液,影响结果
实验步骤
一、样品预处理
- 取出10片待测的冰冻组织切片
- 室温下,小心加上200微升YIJI清理液(Reagent A)在切片上,铺满样品表面
- 小心移去切片上的YIJI清理液(Reagent A)
- 小心加上100微升YIJI固着液(Reagent B),铺满整个样品表面
- 室温下孵育30分钟
- 小心移去切片上的YIJI固着液(Reagent B)
- 室温下,将切片置入50毫升YIJI清理液(Reagent A)中,孵育2分钟
- 小心移去切片上的YIJI清理液(Reagent A)
- 小心加上50微升YIJI封阻液(Reagent C),铺满整个样品表面
- 室温下孵育30分钟
- 室温下,将切片置入50毫升YIJI清理液(Reagent A)中,孵育5分钟
- 小心移去切片上的YIJI清理液(Reagent A)
二、断点标记处理
- 小心加上50微升YIJI酶标液(Reagent D),铺满整个切片样品表面
- 在37℃湿润的培养箱里,孵育1小时,保持湿润,避免干燥
- 小心移去切片上的YIJI酶标液(Reagent D)
- 室温下,小心将切片置入50毫升YIJI清理液(Reagent A)中孵育2分钟
- 小心移去切片上的YIJI清理液(Reagent A)
三、样本染色处理
- 小心加上50微升YIJI荧光液(Reagent E)在切片上,铺满整个切片样品表面
- 室温下孵育30分钟,避免光照
- 小心移去切片上的YIJI荧光液(Reagent E)
- 室温下,小心将切片置入50毫升YIJI清理液(Reagent A)中孵育2分钟
- 小心移去切片上的YIJI清理液(Reagent A)
- 放上盖玻片或封片
- 即刻在(共聚焦)荧光显微镜下(激发波长488nm, 散发波长530nm)观察:阳性细胞呈现绿色荧光
注意事项
- 本产品为10次操作
- 操作时,须戴手套
- YIJI封阻液(Reagent C)达到100%封闭效果,超过双氧水封闭效果
- YIJI酶标液(Reagent D)严禁反复冻融
- YIJI清理液(Reagent A)50毫升置于小型染色缸里,可重复使用
- 所有操作在室温下进行,除操作中规定之外
- 每次更换试剂溶液时,保持样品表面基本晾干:可以使用餐巾绵纸吸干或枪头抽掉
- 试剂溶液在样品表面时,避免有气泡存在,同时确保铺满样品表面
- 染色完成后,即刻进行荧光显微镜观察
- 本公司提供系列细胞凋亡试剂产品
质量标准