SMD1168H酵母菌种产品及特点
SMD1168H是毕赤酵母菌株,属于真核细胞。具有氨苄和卡纳抗性。质粒转化条件为电转化,应用于蛋白表达,诱导方法为甲醇诱导。适宜的生长温度是28-30度,一般使用30度培养,温度超过32度可能导致细胞的死亡。本菌株被推荐用来表达含有Zeocin抗性的酵母表达载体重组质粒,例如pPICZ A, B, C系列的载体。本菌株基因组中的Pep4基因发生突变,造成蛋白水解酶A活性的丧失,可以保护表达产物免受降解,促进表达量的提高。
其基因型如下:
pep4
低温运输,-80℃保存,有效期一年。
SMD1168H酵母菌种细菌的培养和收集:
将含有质粒pBS的DH5α菌种接种在LB固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12小时至对数生长后期。
SMD1168H酵母菌种质粒DNA少量快速提取:
质粒DNA小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA十分有用。这些方法共同特点是简便、快速,能同时处理大量试样,所得DNA有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
SMD1168H酵母菌种(一)、煮沸法
1、将1.5ml培养液倒入eppendorf管中,4℃下12000g离心30秒。
2、弃上清,将管倒置于卫生纸上几分钟,使液体流尽。
3、将菌体沉淀悬浮于120ml STET溶液中, 涡旋混匀。
4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液(10mg/ml), 涡旋振荡3秒钟。
5、将eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。
6、用微量离心机4℃下12000g离心10分钟。
7、用无菌牙签从eppendorf管中去除细菌碎片。
8、取20ml进行电泳检查。
XY60904一站式RNA电泳套装10次XY90317一站式DNA尿素-PAGE电泳套装30次XY70606一站式miRNA尿素-PAGE电泳套装30次XY100205一站式DNA非变性PAGE电泳套装30次XY51210超快核酸电泳液干粉20L|50LXY100211TAE电泳液,50×250mL|2500mLXY90313TBE电泳液,10×250mL|2500mLXY100816碱性胶电泳液,10×250mLXY3150RNA电泳液,10×100mL|250mLXY3690DNA上样液,6×10mL(A)|10mL(B)XY3130三合一RNA上样液1.5mL(A)|1.5mL(B)XY101222DNA碱性胶上样液1.5mL|10mLXY70608miRNA尿素-PAGE上样液1.5mL|10mLXY100874DNA尿素-PAGE上样液1.5mL|10mLXY100875DNA 非变性PAGE上样液1.5mL|10mLXY3280SYBR GreenⅠ,电泳级50μLXY61201耐热型SYBR染料,电泳级50μLXY70303绿如蓝核酸染料(UV型)0.5mL|1.5mLXY121002绿如蓝核酸染料(可见光型)10mL